CPNE3在胃癌中高表达并与患者的预后不良相关

目的明确CPNE3在胃癌组织中表达情况与患者远期预后的关系,探究其调控胃癌细胞凋亡的作用和分子机制。方法纳入2013年2月~2017年10月104例于我院行胃癌根治术的患者,通过癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)的公共数据和免疫组织化学染色分析CPNE3在胃癌中的表达和对患者肿瘤进展与远期预后的影响。GO富集分析预测CPNE3在胃癌中的生物学功能。采用干扰和过表达CPNE3以及对照慢病毒载体转染MGC803细胞,获取对照组(NC)、敲低组(si-CPNE3)、过表达组(LV-CPNE3)细胞,采用PI3K/AKT抑制剂(LY294002)干预LV-CPNE3组细胞获取LY294002组。流式细胞术分析细胞凋亡,Westernblot检测Bax、CleavedCaspase-3、Bcl-2、p-PI3K和p-AKT表达。结果TCGA预测分析和免疫组化结果显示CPNE3在胃癌中高表达(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示CPNE3高表达组患者5年生存率显著降低(P<0.01)。单因素及Cox回归分析显示CPNE3高表达、CEA≥5μg/L、CA19-9≥37kU/L、T3-T4期和N2-N3期是影响胃癌根治术后5年生存率的独立危险因素。ROC曲线分析显示CPNE3预判术后5年死亡的敏感度为79.59%,特异性为74.55%(P<0.05)。GO富集分析预测显示CPNE3可能与负向调控胃癌细胞凋亡有关。体外实验显示,si-CPNE3组的细胞凋亡率以及Bax、Cleaved Caspase-3表达的增多,而Bcl-2表达减少;LV-CPNE3组则结果相反(P<0.05)。机制分析显示,si-CPNE3组p-PI3K、p-AKT表达降低,LV-CPNE3组则增多(P<0.05);另外,LY294002减弱了CPNE3过表达对胃癌细胞凋亡的抑制作用(P<0.05)。结论CPNE3在胃癌组织中高表达且对患者的远期预后具有预测价值,可能与其通过激活PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞的凋亡有关。

桑黄酮G通过调控PI3K/AKT/mTOR通路抑制胃癌细胞的生长、迁移和侵袭

目的探讨桑黄酮G(KG)对胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用和分子机制。方法通过CCK-8实验、细胞克隆形成实验、裸鼠背部成瘤和Ki-67免疫组织化学染色评估不同浓度KG对胃癌细胞增殖与生长的影响;应用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒、Western blotting分析凋亡相关蛋白表达和Tunel染色评估KG对胃癌细胞凋亡的影响;使用Transwell迁移和侵袭实验与Western blotting分析基质金属蛋白酶表达检测KG对胃癌细胞迁移和侵袭的作用;利用免疫印迹技术和rescue实验验证PI3K/AKT/mTOR通路在KG调控胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭的作用。结果KG以浓度依赖性抑制胃癌细胞的增殖和减少细胞形成克隆数(P<0.05);KG上调凋亡细胞比例,促进cleaved caspase-3、Bcl2-Bax表达并下调Bcl2水平(P<0.05);KG干扰胃癌细胞的迁移和侵袭,并且抑制基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达(P<0.05)。机制验证显示,KG抑制PI3K/AKT/mTOR通路的激活,且PI3K/AKT/mTOR通路的激活剂IGF-1逆转了KG对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论KG至少部分是通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路的激活影响胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。

高表达MRPL13促进胃癌细胞增殖并影响患者预后:基于抑制p53信号

目的明确线粒体核糖体蛋白L13(MRPL13)在胃癌中的表达情况及对预后的影响,并分析其可能的作用机制。方法利用公共肿瘤数据库,对胃癌中MRPL13的表达及对预后的作用及发生机理进行初步分析。进一步纳入我院2014年1月~2017年10月开展胃癌根治术的100例患者,分析MRPL13表达量对肿瘤进展及术后5年生存期的影响。体外采用慢病毒转染的方式调控胃癌细胞系(MGC-803和SGC-7901)中MRPL13的表达,分析其对细胞增殖和周期的影响。通过裸鼠皮下移植瘤模型进一步验证MRPL13在体内对肿瘤生长的影响。结合体内外研究分析MRPL13影响胃癌细胞的分子机理。结果生物信息学和本机构的病例分析发现,胃癌组织中MRPL13的水平均显著高于癌旁组织(P<0.05)。相关性分析表明,MRPL13的表达与Ki67、外周血CEA和CA19-9均呈正相关(P<0.05)。单因素结合Cox多因素分析,证实MRPL13高表达是影响胃癌5年生存率的独立危险因素(HR:3.284;95%CI:1.537~7.016)。富集分析提示MRPL13的功能可能和细胞周期、p53信号有关。体外CCK-8、克隆形成、流式细胞术和免疫印迹检测显示:上调MRPL13促进胃癌细胞增殖、G1/S期转化和细胞周期蛋白(CyclinD1和CDK6)表达(P<0.05),下调MRPL13的结果则与之相反(P<0.05)。在体研究显示:上调胃癌细胞MRPL13表达显著促进裸鼠移植瘤的生长(P<0.05),而下调则抑制(P<0.05)。机制分析显示,上调MRPL13抑制胃癌细胞和裸鼠移植瘤中p53和p21的表达(P<0.05),而下调则反之(P<0.05)。结论MRPL13在胃癌中表达升高且影响长期预后,其可能通过抑制p53信号促进胃癌细胞增殖和细胞周期进程。