人类疱疹病毒6、7、8型感染与特发性血小板减少性紫癜相关性研究

特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)是一种常见的出血性疾病.有研究资料显示[1,2],EB病毒、人类巨细胞病毒(CMV)、人细小病毒B19、水痘-带状疱疹病毒、人类疱疹病毒(HHV)6型、麻疹病毒、风疹病毒等病毒感染与ITP的发生有较密切的相关性;但HHV6～8型是新近发现的病毒,尤其HHV7、8型与ITP发病相关性的研究报道不多.

人乳房珠蛋白外周血表达RT-PCR检测及乳腺癌诊治应用

目的建立灵敏外周血人乳房珠蛋白(hMAM)表达 RT-PCR 检测方法,探索 hMAM 在乳腺癌诊治中的应用价值。方法分离受检者外周血单个核细胞,TRIZOL 液提取总 RNA,作 RT-PCR,并查β-actin 监控;确认的 cDNA 先作普通PCR 扩增,再作荧光定量 PCR 扩增。结果 64例标本有63例确认转录为 cDNA,其中乳腺癌43例、良性乳腺肿瘤和正常对照各10例。经普通 PCR 后再作荧光定量 PCR,乳腺癌 hMAM 表达阳性率为53.3%,与良性乳腺肿瘤和正常对照间阳性率有显著差异(P<0.05);而不作普通 PCR 的 cDNA 直接行荧光定量 PCR,结果无阳性。淋巴结转移较未转移,hMAM 表达阳性率有极显著差异(P<0.01)。结论外周血 hMAM 表达是乳腺癌细胞微转移的特异指标;单次 PCR 法的灵敏度不够,二次 PCR 可明显提高灵敏度,并一次普通 PCR 加一次荧光定量 PCR 的组合效果更理想。外周血 hMAM 表达可能是监测淋巴结转移较好指标。

HBV拉米呋啶耐药相关基因及HBV基因分型的初步研究

目的:利用基因测序技术,根据HBV S基因序列和HBV P基因区YMDD基因序列的特征,建立一种既可以诊断HBV基因型,又能检测拉米呋啶耐药突变的简便、可靠的方法。方法:采用特异的引物对待检标本进行PCR扩增后作基因序列检测,利用Chrom as2.23软件对测序结果进行分析有无突变产生,测序结果用软件DNASIS进行基因分型分析。结果:61例经拉米呋啶治疗的慢性乙肝患者B型11例(18%),C型50例(82%)。发生YMDD变异47例,变异检出率为77.0%。结论:该方法能同时检测HBV基因型和YMDD变异,可以通过准确的P基因序列测定区分YMDD变异的类型,并可根据需要监测其他的伴随突变,进一步进行核苷酸多态性分析,对临床治疗和病情监控均有指导意义。

非梗阻性无精子症和隐匿精子症与睾丸体积、血FSH和AZF基因微缺失的相关性分析

目的:探讨非梗阻性无精子症和隐匿精子症与睾丸体积、血FSH和AZF基因微缺失的相关性。方法:161例男性不育患者分为非梗阻性无精子症(A组,n=86)、隐匿精子症(B组,n=49)、严重少精子症(C组,n=13)和其它患者(D组,n=13,包括死精子症4例,梗阻性无精子症3例,正常精子1例,其他少弱精子症5例),进行睾丸体积、血FSH水平和AZF基因微缺失检测,AZF基因微缺失检测位点包括AZFa(sY84、sY86)、AZFb(sY127、sY134)、AZFcd(sY254、sY255、sY157、sY145和sY152)。结果:4组睾丸体积<12 ml的比例分别为73.26%(63/86)、34.69%(17/49)、7.69%(1/13)、30.77%(4/13);4组FSH水平升高1倍以上的比例分别为67.44%(58/86)、32.65%(16/49)、15.38%(2/13)和0.00%(0/13),组间均有极显著统计学差异(P<0.001);4组AZF基因微缺失率分别为15.12%(13/86)、18.37%(9/49)、0.00%(0/13)和0.00%(0/13),组间均无统计学差异(P>0.05),其中A组AZFa基因缺失1例,AZF(b+c+d)缺失5例,AZF(c+d)基因缺失7例,B组9例均为AZFc和(或)AZFd基因缺失,C组和D组均未见AZF基因缺失。结论:随着生精功能障碍程度的加重,血FSH水平升高和睾丸体积缩小趋势明显,而与AZF缺失几率无高度相关性;但在非梗阻性无精子症和隐匿精子症组中AZF基因缺失几率仍然偏高,AZFa和AZFb缺失大多出现在非梗阻性无精子症组中,而隐匿精子症组以AZFc和AZFd缺失为主。

无精子症和严重少／弱精子症ICSI子代与其他精子ICSI／IVF子代出生缺陷的比较研究

目的：观察无精子症和严重少／弱精子症患者借助卵胞质内单精子注射（ICSI）技术出生的子代与其他精子ICSI／体外受精（IVF）子代的出生缺陷情况。方法：将接受ICSI／IVF治疗的237对夫妇生育的300例子代按ICSI／IVF当日精液情况和受精方式分为附睾／睾丸精子ICSI组（A组，患者92例，子代118例）、严重少／弱精子ICSI组（B组，患者84例，子代106例）、非严重少／弱／畸形精子ICSI组（c组，患者35例，子代42例）、正常精子IVF组（D组，患者26例，子代34例）。对召回现场随访的子代进行出生缺陷病史询问、超声检查和无精子症因子（AZF）基因检测。结果：受访子代平均年龄为33．1±20．3（4-84）个月，新生儿出生缺陷率为1．7％（5／300），总出生缺陷率为4．7％（14／300），4组的出生缺陷率分别为5．1％（6／118）、3．8％（4／106）、2．4％（1／42）和8．8％（3／34），组间无统计学差异（P〉0．05）。112个家庭AZF基因检测显示B组有3对父子存在同样位点的AZF基因微缺失。结论：无精子症和严重少／弱精子症等严重男性不育症患者ICSI子代的出生缺陷发生率与其他较好精子或正常精子IVF子代相比无明显增加，AZF基因检测没有新增缺失位点和新增缺失病例。

小鼠单倍体细胞遗传性别聚合酶链式反应方法鉴定

目的建立高灵敏的可鉴定单个精子细胞、卵子细胞遗传性别的聚合酶链式反应(PCR)方法。方法通过对单个精子细胞、卵子细胞性染色体上的重复序列(Rhox基因、Rbmy基因)的PCR扩增,借助扩增后熔解曲线或琼脂糖凝胶电泳鉴别其遗传性别。结果多重PCR扩增后熔解曲线和电泳结果皆显示该PCR体系可稳定扩增单个精子细胞、卵子细胞DNA并应用于遗传性别鉴定,与传统方法比较,其可扩增单个精子细胞(PCR扩增检出率为75%)、卵子细胞PCR(扩增检出率为100%)中的单倍体DNA。结论利用基因组性染色体上自身重复序列的存在,可建立高灵敏的、可扩增单倍体DNA的PCR检测方法,继而为后续研究如精子细胞遗传性别比、囊胚遗传性别鉴定等小鼠胚胎性别筛选工作建立基础。

聚合酶链反应检测致瘤性人类疱疹病毒6型方法的建立及应用

目的 建立致瘤性人类疱疹病毒 6型 (HHV 6 )荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)检测方法 ,为快速、准确地定量检测HHV 6奠定基础。方法 根据HHV 6型基因序列 ,设计并合成引物、荧光标记探针。先用特异性引物筛选HHV 6 ,其PCR片段克隆入载体 ,再对重组质粒进行筛选、测序及鉴定。确证后的HHV 6DNA片段制成标准品并作为阳性模板 ,开发HHV 6FQ PCR检测系统。用该系统测定研究样品。结果 重组质粒获得的HHV 6DNA产物经 1∶10梯度稀释后 ,制作定量曲线的循环阈值 (Ct)与模板浓度具有良好的线性关系 ,相关系数为 0 99。经本反应系统检测的临床标本共135份 ,检测到 16份HHV 6DNA阳性。结论 建立了检测致瘤性HHV 6的FQ-PCR方法 ;此方法较定性PCR技术更为简便、快速、准确 。

实时荧光定量聚合酶链式反应技术在B族链球菌检测中的应用研究进展

B族链球菌(GBS)是围产期孕妇感染导致新生儿感染致病的主要致病菌之一,可引起新生儿肺炎、败血症、脑膜炎等早期侵入性感染,严重的甚至会导致死亡.本文综述了金标准培养法、快速培养法与实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法在孕产妇检测GBS阳性率、敏感度和特异度方面的差异,对不同孕周的孕妇采用何种检测方法提出了建议,以期能够在全国范围内普及GBS的筛查和预防,达到降低母婴并发症的目的.