猫中脑中央灰质、Darkschewitsch氏核和Cajal氏中介核向大中缝核及其邻近网状结构(巨细胞网状核和尾侧脑桥网状核)的投射

在9只成年猫应用HRP轴突逆行追踪法证实了中脑中央灰质、Darkschewitsch氏核和Cajal氏中介核内的神经元发纤维向下投射到大中缝核及其邻近网状结构(巨细胞网状核和尾侧脑桥网状核)。中脑中央灰质的两侧半均出现标记细胞,注射侧略多于对侧。Darkschewitsch氏核和Cajal氏中介核内的标记细胞主要集中在注射侧两核的头端部分(后连合平面)。另外,背中缝核在9例中只有5例出现少量标记细胞。

猫冠状回向三叉脊束核的定位投射

本实验用WGA—HRP法研究了猫冠状回向三叉脊束核的投射。结果是:(1)冠状回前部投至两侧三叉脊束核的背内侧部,对侧稍多于本侧。向尾侧亚核的投射,由吻侧向尾侧逐渐减少,在延髓下部平面只有对侧投射。(2)冠状回中、后部基本上投至对侧三叉脊束核。在尾侧亚核,中部主要投至吻侧半,向尾侧逐渐减少,于延髓下部平面消失;后部来的投射山吻侧向尾侧逐渐增多,核心部位移至尾侧半并延伸到最尾端。在极间亚核和吻侧亚核,其投射区随注射部位从前向后移而由内向外移。(3)于尾侧亚核,投射区主要为Ⅲ,Ⅳ层,但Ⅰ、Ⅱ层内也有少量标记终末支。

大鼠间脑向中脑导水管周围灰质的投射

本实验用HRP方法研究了大鼠间脑向中脑导水管周围灰质前部的投射。间脑向中脑导水管周围灰质前部的投射主要来自同侧的内侧视前区、丘脑下部前区、背内侧核、腹内侧核、背侧乳头体前核、丘脑下部外侧部、Forel氏区和未定带,对侧较少。其中丘脑下部前区、腹内侧核、背侧乳头体前核和未定带向同侧中脑导水管周围灰质外侧核的投射明显地多于向内侧核和对侧外侧核的投射。丘脑下部前区向中脑导水管周围灰质投射的神经元多位于该区的腹外侧部,即外前核范围内。外侧视前区和丘脑下部外侧部前份向中脑导水管周围灰质外侧核和内侧核均有投射,而丘脑下部外侧部的结节份和乳头体份可能只投射到外侧核。

大鼠胃肠道伤害性刺激引起的中枢神经系统c-fos表达

本文应用Fos免疫组织化学(ABC法)对大鼠胃肠道伤害性刺激后中枢神经系统内的c-fos表达进行了观察,结果表明:(1)多数核团或部位的c-fos表达于伤害性刺激后的30min开始,2h达高峰,4h后逐渐降低,12h基本恢复正常。(2)Fos免疫反应阳性神经元呈双侧性分布,定位于胸髓(Rexed Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ和Ⅹ层)、孤束核、延髓腹外侧区、臂旁外侧核、脑桥室周灰质、中脑导水管周围灰质、楔形核、中缝背核、下丘、丘脑(中线核团、背内侧核、腹后内侧核小细胞部)、外侧缰核、内侧膝状体大细胞部、下丘脑(背内侧核、腹内侧核、室周核等)、中央杏仁核、终纹床核、伏核、外侧隔核、梨状区皮质等。本文对以上部位的c-fos表达规律及其意义进行了初步探讨。

内脏伤害性刺激诱导的大鼠延髓内Fos表达

用抗Ｆｏｓ蛋白和酪氨酸羟化酶（ＴＨ）的免疫组织化学方法，对大鼠两种内脏（胃肠道和心脏）伤害性刺激诱导的大鼠延髓Ｆｏｓ表达情况及其与儿茶酚胺能神经元的关系进行了观察。结果表明：Ｆｏｓ样免疫阳性神经元主要分布在延髓中段和尾段的孤束核、腹外侧区以及两者之间的网状结构内；在抗Ｆｏｓ和抗ＴＨ的双重免疫染色切片上，见到许多Ｆｏｓ阳性神经元的胞浆同时呈ＴＨ样免疫反应阳性（Ｆｏｓ／ＴＨ双重阳性细胞），计数结果证明Ｆｏｓ／ＴＨ细胞占ＴＨ阳性细胞总数的５０％以上，提示延髓内脏带半数以上的儿茶酚胺神经元参与对内脏伤害性刺激的反应。

大鼠延髓内脏带的化学神经解剖学

应用免疫组织化学技术（ＰＡＰ法和ＡＢＣ法），对儿茶酚胺类（以酪氨酸羟化酶－ＴＨ作标记物）、５－羟色胺、胆碱类（以胆碱乙酰化酶－ＣｈＡＴ作标记物）以及神经肽类（Ｐ物质、降钙素基因相关肽、神经降压素、胆囊收缩素、生长抑素和神经肽Ｙ）等物质在ＳＤ大鼠延髓内脏带内的分布进行了观察。结果证明，上述物质均较集中地分布于延髓内脏带，即位于延髓中尾段（从闩尾侧１．０ｍｍ到闩吻侧０．８ｍｍ）的一条从背内侧至腹外侧宽约０．６～１．３ｍｍ的弧形带状区，表明延髓内脏带是一相对独立的机能结构区。

大鼠延髓内含前-原脑啡肽mRNA、甲硫氨酸-脑啡肽和亮氨酸-脑啡肽神经元的分布

应用原位杂交和免疫组织化学方法,对成年大鼠延髓内含前-原脑啡肽(PPE)mRNA和甲硫氨酸-脑啡肽(M-ENK)与亮氨酸-脑啡肽(L-ENK)免疫反应神经元进行观察。结果表明:含PPEmRNA的神经元胞体,多数分布在孤束核、腹外侧区以及两者之间的网状结构等形成的一条从背内侧到腹外侧区的弧形带内。M-ENK与L-ENK样免疫反应阳性结构(神经元胞体、纤维和终末)也主要密集分布在该带内。本结果对ENK(M-ENK和L-ENK)参与延髓内脏功能活动的调控过程,提供了进一步的形态学证据。

大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核及三叉神经节内PPTA、CGRP和PPEmRNA及其相应蛋白在面口部炎性刺激时的变化

利用原位杂交技术和免疫组化技术，观察完全福氏佐剂致炎大鼠的三叉神经脊柬核尾侧亚核和／或三叉神经节内SP、CGRP和L-ENK样阳性结构及它们相应的前体PPTAmRNA、CGRPmRNA和PPEmRNA分布状况的动态变化。原位杂交结果显示：PPTAmRNA在三叉神经节与三叉神经脊束核尾侧亚核浅层神经元中的表达于致炎刺激后12h明显增强，分别于1d和4d时达到高峰，21d后恢复正常;CGRPmRNA在三叉神经节神经元中的表达变化与PPTAmRNA者相似;在三叉神经脊束核尾侧亚核浅层PPEmRNA阳性神经元的数量于刺激后12d明显增多，8d到达高速，28d时仍高于正常水平.免疫组织化学结果显示：尾侧亚核浅层SP样阳性纤维和终末的密度在致炎刺激后12h至4d降低，然后逐渐回升到正常水平;而CGRP样阳性纤维和终末的密度在佐剂注射后1d明显降低，8d后恢复正常，14d后又明显高于正常水平;佐剂刺激后1d，L-ENK样阳性纤维和终末的密度明显增加，以后维持正常水平，21d和28d时又低于正常水平.在三叉神经节，SP和CGRP样阳性神经元的数量在致炎刺激后早期明显减少，以后恢复至正常水平且再无明显变化。上述结果表明，在完全福氏佐剂的致炎条件下，SP、CGRP和L-ENK样阳性结构及其相应的mRNA在尾侧亚核浅层和／或三叉神经节存在着不同的时程变化。

大鼠三叉神经节及尾侧亚核内降钙素基因相关肽在面口部伤害性刺激时的动态变化

为了探讨降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）在面口部伤害性刺激条件下合成、运输和释放的规律，将福尔马林注入大鼠一侧口周皮下，分别于刺激后不同时间取材，用原位杂交和免疫组织化学方法观察ＣＧＲＰｍＲＮＡ及ＣＧＲＰ样阳性结构（ＣＧＲＰ－ＬＩ）在三叉神经节（ＴＧ）和三叉神经尾侧亚核（Ｖｃ）内的动态变化。原位杂交结果显示：ＴＧ内表达ＣＧＲＰ的两种亚型α－ＣＧＲＰ和β－ＣＧＲＰｍＲＮＡｓ神经元的数量分别于福尔马林刺激后２ｈ和４ｈ有明显增加，８ｈ达到高峰，然后渐下降，至４８ｈ后恢复至正常。免疫组织化学结果显示：Ｖｃ浅层ＣＧＲＰ－ＬＩ的含量在刺激后１ｈ内明显减少，２ｈ后渐增，１２ｈ达到高峰，２４ｈ后趋向正常。ＴＧ内ＣＧＲＰ－ＬＩ神经元的数量在刺激后１ｈ内也明显减少，此后逐渐回升至正常并有轻度增加，但与正常间无明显差异。

大鼠三叉神经尾侧亚核和脊髓背角浅层内C纤维的主要神经活性物质

本文用免疫荧光双重标记技术对三叉神经尾侧亚核（Ｖｃ）和脊髓背角浅层内ＢａｎｄｅｉｒａｅａＳｉｍｐｌｉｃｉｆｏｌｉａＩｓｏｌｅｃｔｉｎＢ４（ＢＳＩ－Ｂ４）标记的Ｃ纤维及其终末与Ｐ物质（ＳＰ）能、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）能、谷氨酸（Ｇｌｕ）能和一氧化氮（ＮＯ）能纤维及其终末的分布和相互关系，三叉神经节（ＴＧ）和脊髓背根节（ＤＲＧ）中ＢＳＩ－Ｂ４标记并呈ＳＰ样、ＣＧＲＰ样、磷酸激活的谷氨酰胺酶（ＰＡＧ，谷氨酸能细胞的特异性标识物）样和ＮＯＳ样阳性的双标细胞进行了定位、定性和定量的系统研究。Ｖｃ和腰髓背角内ＳＰ样、ＣＧＲＰ样、ＰＡＧ样、ＮＯＳ样阳性纤维和终末及ＢＳＩ－Ｂ４标记的Ｃ纤维及其终末分布的主要重叠区域是Ⅱ层外带（Ⅱｏ）。ＴＧ和ＤＲＧ内可见ＢＳＩ－Ｂ４标记并呈ＳＰ样、ＣＧＲＰ样、ＰＡＧ样或ＮＯＳ样阳性的双标细胞，其中ＰＡＧ／ＢＳＩ－Ｂ４双标细胞的数量最多。此结果提示Ｃ纤维主要含Ｇｌｕ，Ｇｌｕ是初级传入最主要的神经活性物质。此外还有一些Ｃ纤维含ＳＰ、ＣＧＲＰ和ＮＯ。

大鼠“延髓内脏带”向终纹床核投射的儿茶酚胺能神经元对内脏伤害性刺激的FOS表达

ＨＲＰ注入大鼠一侧终纹床核，存活４８小时，再将１％Ｆｏｒｍａｌｉｎ导入胃内造成内脏伤害刺激，存活２小时后，灌注取材．对延髓切片进行ＨＲＰ是色和抗ＦＯＳ（ＡＢＣ法）、抗ＴＨ（ＰＡＰ法）免疫组化反应的三重反应．在光镜下发现“延髓内脏带”内出现七种阳性细胞，包括ＨＲＰ阳性、ＴＨ和ＦＯＳ免疫反应阳性；ＴＨ／ＨＲＰ、ＦＯＳ／ＨＲＰ、ＦＯＳ／ＴＨ等双重阳性以及ＦＯＳ／ＨＲＰ／ＴＨ三重反应阳性细胞．这些阳性细胞主要见于内脏带背内侧部的孤束核，其次是腹外侧区的腹外侧网状核（ＶＬＲ），中间部较少．ＴＨ和ＦＯＳ免疫阳性细胞以及ＴＨ／ＦＯＳ双重阳性细胞为双侧分布，ＨＲＰ／ＦＯＳ、ＨＲＰ／ＴＨ以及ＨＲＰ／ＴＨ／ＦＯＳ阳性细胞也为双侧分布但以注射区同侧为多。

大鼠三叉神经尾侧亚核和脊髓内离子型谷氨酸受体、GABA_A受体和甘氨酸受体的分布

为了搞清兴奋性和抑制性氨基酸受体在伤害性刺激信息传递和调制初级门户内的精确定位，本研究用免疫组织化学技术观察了大鼠三叉神经尾侧亚核（Ｖｃ）和脊髓内离子型谷氨酸受体（ＮＭ－ＤＡ受体、ＡＭＰＡ受体和Ｋａｉｎａｔｅ受体）、ＧＡＢＡＡ受体和甘氨酸（Ｇｌｙ）受体的分布。ＮＭＤＡ受体１亚型分布于Ｖｃ和脊髓的各层，ＮＭＤＡ受体２Ａ／Ｂ亚型、Ｋａｉｎａｔｅ受体和ＧＡＢＡＡ受体α亚单位散在性地分布于Ｖｃ和脊髓后角的Ⅰ层，ＧＡＢＡＡ受体α亚单位仅见于Ｖｃ和脊髓Ⅰ层内轴突样结构。ＡＭＰＡ受体、ＧＡＢＡＡ受体β亚单位和Ｇｌｙ受体较密集地分布于Ｖｃ和脊髓的各层，尤其是它们的浅层（Ⅰ和Ⅰ层）。结合机能学研究的结果，讨论了这些受体阳性神经元在伤害性刺激信息传递和调制方面的作用。

大鼠“延髓内脏带”向杏仁核投射的儿茶酚胺神经元对内脏伤害性刺激的FOS表达

本文通过建立ＨＲＰ逆行追踪结合抗ＦＯＳ和抗酪氢酸羟化酶（ＴＨ）的免疫组织化学三重标记技术，在延髓见到以下七种标记细胞：ＦＯＳ，ＨＲＰ，ＴＨ单标细胞，ＦＯＳ／ＨＲＰ，ＦＯＳ／ＴＨ，ＨＲＰ／ＴＨ双标细胞，ＦＯＳ／ＨＲＰ／ＴＨ三标细胞。这些细胞主要分布于延髓中、尾段由孤束核、腹外侧区以及在两者之间的网状结构共同组成的弧形带状区──“延髓内脏带”。本文结果表明大鼠“延髓内脏带”向杏仁核直接投射的儿茶酚胺能神经元中约有４８％对内脏伤害性刺激起反应，提示“延髓内脏带”及其向杏仁核的儿茶酚胺能投射通路参与机体应激反应的调控过程。

大鼠延髓至下丘脑室旁核的儿茶酚胺能投射神经元在胃伤害性刺激后的FOS表达

用ＨＲＰ注入下丘脑室旁核逆行追踪与抗Ｆｏｓ和抗酪氨酸羟化酶（ＴＨ）双重免疫细胞化学相结合的三重标记方法，对大鼠孤束核和延髓腹外侧区至下丘脑室旁核的儿茶酚胺能投射神经元对胃伤害性刺激后的ｃ－ｆｏｓ表达进行了观察，发现孤束核和延髓腹外侧区有７种不同的标记细胞：ＨＲＰ、Ｆｏｓ、ＴＨ单标细胞，Ｆｏｓ／ＨＲＰ、Ｆｏｓ／ＴＨ、ＨＲＰ／ＴＨ双标细胞，Ｆｏｓ／ＨＲＰ／ＴＨ三标细胞。上述７种标记细胞主要分布在延髓中、尾段孤束核的内侧亚核、连合亚核和延髓腹外侧区以及两者之间的网状结构。ＨＲＰ标记细胞以注射侧为主，对侧有少量分布。本文结果证明，大鼠孤束核和延髓腹外侧区至下丘脑室旁核投射的部分儿茶酚胺能神经元可能参与胃伤害性刺激的传导和调控。

大鼠中枢运动核团内谷氨酸受体、GABA_A受体、甘氨酸受体和阿片μ受体的定位分布

目的观察大鼠中枢运动核团内谷氨酸受体、γ－氨基丁酸受体（ＧＡＢＡＡＲ）、甘氨酸受体（ＧｌｙＲ）和阿片μ受体（ＭＯＲ）的定位分布，搞清谷氨酸、ＧＡＢＡ、甘氨酸和脑啡肽在中枢运动核团内的作用部位。方法免疫组织化学染色技术。结果在动眼神经核、滑车神经核、三叉神经运动核、展神经核、面神经核、疑核、舌下神经核、Ｅ－Ｗ核、上涎核、迷走神经背核和脊髓前角内均可见ＮＭＤＡＲ１样和ＧｌｕＲ２／３样阳性胞体，但ＮＭＤＡＲ１样和ＧｌｕＲ２／３样阳性纤维和终末仅见于动眼神经核、Ｅ－Ｗ核、滑车神经核、三叉神经运动核和迷走神经背核，除三叉神经运动核、疑核和脊髓前角能见到少量ＧＡＢＡＡＲβ亚单位样阳性胞体外，上述各核团也可见ＧＡＢＡＡＲβ亚单位样阳性的纤维和终末，而ＧＡＢＡＡＲα亚单位样阳性胞体主要见于疑核、舌下神经核、迷走神经背核和脊髓前角；中枢运动核团内均可见ＧｌｙＲ和ＭＯＲ样阳性的纤维和终末。结论谷氨酸、ＧＡＢＡ、甘氨酸和脑啡肽在中枢运动核团可能通过突触前和突触后机制，对中枢运动神经元发挥调控作用。

在同一神经元内同时显示Fos－蛋白、酪氨酸羟化酶和HRP逆行标记的三重标记技术

本文介绍了一种能在同一神经元内同时显示ＨＲＰ逆行标记以及Ｆｏｓ和某类神经递质或相关酶（例如ＴＨ）的三重标记技术。首先将ＨＲＰ注入脑内某一核团（如中央杏仁核），动物存活４８ｈ后，再向胃内导入１％福尔马林２ｍｌ，以造成对胃的伤害性刺激，２ｈ后将动物处死。脑的切片（如本文的延髓切片）先用四甲基联苯胺－钨酸钠（ＴＭＢ－ＳＴ）法进行ＮＲＰ呈色反应，后用二氨基联苯胺（ＤＡＢ）和氯化钻作加强；然后按ＡＢＣ法进行Ｆｏｓ免疫组织化学反应，继之按ＰＡＰ法进行ＴＨ免疫组织化学反应。光镜下在延髓切片观察到７种标记神经元，即ＴＨ－、ＨＲＰ－或Ｆｏｓ－单标记神经元，ＴＨ和ＨＲＰ－、ＴＨ和Ｆｏｓ－或ＨＲＰ和Ｆｏｓ的双标记神经元以及ＴＨ和ＨＲＰ和Ｆｏｓ的三标记神经元。该方法为研究同时显示中枢神经元的功能活动状态、传出投射及所含神经递质提供了一个强有力的工具。

大鼠延髓网状背侧亚核下行投射终末在脊髓灰质的分布

本研究应用PHA－L顺行追踪技术研究了大风延髓网状背测亚核（SRD）至脊髓灰质下行投射的终止部位。结果表明：SRD发出的下行纤维走行于脊髓的背外侧京中，从高位至低位，脊髓灰质中的PHA－L顺标终末的密度逐渐降低。SRD的下行投射终未在脊髓中具有明显的同侧分布优势，主要终止在同侧脊历灰质的Ⅳ～Ⅶ层和X层，Ⅰ、Ⅱ层中只有少量的标记终末，对侧脊髓灰质中除了在Ⅳ层和X层中有中等密度的颁标终末分布外，其余各层中几乎无标记终未、PHA－L顺标终未与BSI-B4标记的初级传入C纤维终末在Ⅰ．Ⅱ层内重叠公布．本研究为SRD在调控脊髓的伤害性信息传递方面也起重要作用这一论点提供了直接的形态学依据．

电生理学特性得到确定的大鼠脊髓背根神经节细胞内谷氨酸和P物质的共存

在离体灌流带脊髓和坐骨神经的标本上，对脊髓背根神经节（DRG）细胞的电生理学特性、对P物质（SP）受体激动剂的反应及谷氨酸（Glu）／SP共存的特点进行了研究。（1）对135个细胞进行了细胞内记录，并依纤维传导速度将其分为Aα／β（＞12m／s）和C（＜1．3m／s）两大类；它们的动作电位的快速后超极化（fAHP）有明显区别，C类的fAHP幅度小、时程长，Aα／β类的fAHP幅度大、时程短；（2）SP受体激动剂Sar－SP（10－6mol／L）诱导42％（5／12）的Aα／β细胞和80％（8／10）的C细胞发生去极化反应；（3）最后向给予SP受体激动剂的22个细胞内电泳biocytin，固定、切片后进行磷酸激活的谷氨酰胺酶（PAG）和SP免疫荧光组织化学染色并同时显示biocytin，观察到biocytin标记并呈PAG样和SP样阳性的三标细胞在Aα／β类为25％（3／12），C类为80％（8／10），两者差异显著（P＜0.05）。结果提示DRG中Aα／β细胞与C细胞的化学解剖和电生理特性不同，SP可能通过作用于节细胞上的自身受体易化冲动的发放。

大鼠孤束核内5－羟色胺能轴突终末的突触联系

用顺行演变与免疫组织化学结合的双标技术，电镜下观察大鼠孤束核内５－羟色胺样免疫反应（５－ＨＴ－ＬＩ）轴突终末的突触联系，特别是与迷走神经初级传入（溃变）终末的关系。发现：１．５－ＨＴ－ＬＩ轴突终末和迷走神经初级传入终末终止于同一个树突形成轴－树突触；２．５－ＨＴ－ＬＩ轴突终末与树突形成轴－树突触；３．５－ＨＴ－ＬＩ轴突终末与迷走神经初级传入终末或非标记的轴突终未形成轴一轴相贴（ａｘｏ－ａｘｏｎｉｃ－ｃｏｎｔａｃｔ）。以上结果提示，孤束核内的５－ＨＴ能神经成分可能通过突触后、突触前机制调控经迷走神经传入的信息。

豚鼠耳蜗SP和SP受体分布的免疫组织化学研究

目的：研究Ｐ物质（ＳＰ）和ＳＰ受体在豚鼠耳蜗的分布．方法：采用兔抗ＳＰ血清、兔抗ＳＰ受体血清和免疫组织化学ＡＢＣ法及葡萄糖氧化酶－ＤＡＢ－镍（ＧＤＮ）染色技术．结果：在Ｃｏｒｔｉ器各圈均可见ＳＰ样免疫反应阳性的纤维和终末，以顶回及底回分布密集．阳性纤维从骨螺旋板向内外毛细胞区呈放射状分布，纤维呈串珠状，含明显的膨体．阳性的终末位于内、外毛细胞的底部．耳蜗各回均可见ＳＰ受体样阳性反应，其分布状态与ＳＰ阳性终末的分布状态相似，表现为内、外毛细胞底部的圆形、椭圆形结构．