力学刺激调控骨髓间充质细胞向软骨的分化

背景:骨髓间充质细胞是组织工程和细胞治疗的理想种子细胞,有研究基于自然的力学传导途径来提高体外骨髓间充质细胞活力,继而进行的体外软骨修复的策略。目的:分析力学因素是如何影响骨髓间充质细胞的命运和有效地利用力学诱导软骨形成这一策略。方法:由第一作者应用计算机对CNKI,PubM ed,Medline和Elsevier数据库中1985至2015年的文献进行检索,以"力学作用;骨髓间充质细胞;软骨;mechanical regulation,bone marrow mesenchymal cells;bone marrow mesenchymal stem cells;chondrogenic differentiation;cartilage differentiation"为关键词,对相关文献进行整理归纳。结果与结论:总结力学刺激对骨髓间充质细胞软骨向分化的最新研究成果,论述不同力学刺激对骨髓间充质细胞软骨向分化的影响,并归纳骨髓间充质细胞软骨向分化过程中细胞感应力学刺激并转化为生物学信号的机制和信号通路,同时对基于间充质干细胞和机械应力的新生组织的软骨再生和修复策略等重点研究的问题进行了展望。

尾静脉注射EMT-6细胞建立转移性肺癌模型的研究

目的通过尾静脉注射EMT-6细胞建立一种临床特征明显、稳定可重复的转移性肺癌BALB/c小鼠模型。方法取对数生长期的EMT-6细胞,用0.25%胰蛋白酶消化,再用磷酸盐缓冲溶液调整细胞浓度至1×10~6个/m L(高)、5×10~5个/m L(中)和1×10~5个/m L(低)3个浓度,尾静脉注射0.2 m L EMT-6细胞悬液,对不同浓度模型的临床症状、成瘤时间、生存期、成瘤程度和病理学特征等生物学特征和评价指标进行研究,筛选出效果好的模型,并对该模型的重复性和稳定性通过3次重复实验加以确定,成功建立EMT-6细胞转移性肺癌BALB/c小鼠模型。结果 EMT-6细胞注射后解剖小鼠发现,高浓度组小鼠7 d肺表面开始出现肿瘤灶,18 d内所有小鼠死亡;中浓度组小鼠7 d肺表面开始出现肿瘤灶,28 d内所有小鼠死亡;低浓度组小鼠14 d肺表面开始出现肿瘤灶,21 d所有小鼠肺表面均有肿瘤灶,荷瘤小鼠24 d开始出现死亡,35 d肿瘤灶数量达到顶峰(平均12~15个/只)且肿瘤体积变大,42 d内全部死亡。结论相比之下,低浓度模型成瘤时间到小鼠全部死亡时间,为实验研究留有4周的处理、观察、评价的窗口期,其病理组织学符合肺癌的组织学特征,临床症状指标明显,模型重复性和稳定性好,是适合转移性肺癌研究的理想模型。

MSP影响非小细胞肺癌PC14细胞周期和上皮间质转化的研究

目的研究巨噬细胞刺激蛋白(MSP)在无巨噬细胞刺激蛋白受体(RON)的情况下对非小细胞肺癌PC14细胞周期的影响,并分析其对PC14上皮间质转化(EMT)的影响。方法取MSP阴性、RON阴性的PC14细胞系,稳定表达MSP的细胞系PC14-Mst1-pEGFP-N1和稳定表达荧光蛋白的空载质粒细胞系PC14-pEGFPN1,流式细胞术检测各细胞系细胞周期的影响;透射电镜观察在细胞增殖期间细胞之间的连接间隙;逆转录(RT)-PCR和Western blot分别检测E-钙粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)mRNA、蛋白表达水平。结果流式细胞术结果显示与PC14、PC14-pEGFP-N1相比,PC14-Mst1-pEGFP-N1细胞G_1/G_0期数量增多,S期与G_2/M期减少;透射电镜发现PC14-Mst1-pEGFP-N1细胞之间的细胞连接较紧密,细胞之间空隙距离缩小;RT-PCR和Western blot检测结果显示,与PC14细胞相比,PC14-Mst1-pEGFP-N1细胞E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平升高,而Vimentin的mRNA、蛋白表达水平降低。结论 MSP在RON阳性的情况下,可使G_1期肺癌细胞增多、分裂相减少,抑制EMT。

急性肝损伤模型鼠血清中microRNAs绝对定量与肝损伤程度的相关性研究

目的观察四氯化碳(CCl_4)诱导的大鼠急性肝损伤模型和对乙酰氨基酚(APAP)诱导的小鼠急性肝损伤模型血清中microRNAs(miR-122、miR-451、miR-92a、miR-192)的绝对定量随时间的变化情况,并分析血清中microRNAs绝对定量与对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤组织病理评分之间的相关性。方法建立CCl_4(1.5mL/kg)诱导的大鼠急性肝损伤模型和APAP(160mg/kg)诱导的小鼠急性肝损伤模型,收集建模过程中各时间点的血清,通过MiRbay^(TM) SV miRNA检测试剂盒对血清中microRNAs的含量进行绝对定量,探究血清中microRNAs的变化情况。同时收集APAP诱导的小鼠急性肝损伤模型中各时间点的肝损伤组织,进行组织病理染色、组织病理评分;随后对小鼠血清中microRNAs的绝对定量与肝损伤组织病理评分进行相关性分析。结果在两种急性肝损伤模型中,均发现血清中miR-122和miR-192的绝对定量在肝损伤8h或2h就出现明显的升高,在24h左右维持在最高的水平,72h逐渐下降至正常水平。miR-92a在CCl_4诱导的大鼠急性肝损伤模型中,出现波动性的变化,无明显的变化规律,miR-451则出现了轻微下降的趋势。miR-92a和miR-451在APAP诱导的小鼠肝损伤进展中,均有逐渐下降的趋势,在48h到达最低点,随后开始恢复。相关性分析发现,小鼠血清中miR-122和miR-192的绝对定量与APAP诱导的小鼠肝损伤组织病理评分(DILI-PSS)呈现良好的正相关(分别为r=0.741 3,P<0.05;r=0.788 3,P<0.01)。结论血清中microR-122和microR-192的绝对定量在大鼠或小鼠急性肝损伤后24h左右达峰,72h降低,并且与APAP诱导的小鼠急性肝损伤组织病理评分具有良好的相关性。

Msp对人非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力影响的实验研究

目的探讨巨噬细胞刺激蛋白(macrophage stimulating protein,Msp)对人非小细胞肺癌细胞株PC14增殖、迁移和侵袭能力影响的研究。方法构建Msp编码基因Mst1真核表达载体,将Mst1导入Msp(-)和RON(-)人非小细胞肺癌细胞株PC14,并用G418筛选出稳定表达的细胞株。通过RT-PCR方法检测已转染Mst1载体PC14细胞中Mst1的表达,用Western blot检测Msp在PC14、PC14-Mst1-pEGFP-N1、PC14-pEGFP-N1中的表达水平,同时检测RON在PC14和RON(+)细胞SKBR-3中的表达情况。通过计算RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞)和SKBR-3细胞在各转染组细胞培养上清液的刺激下穿过Transwell微孔膜的细胞数来评价Msp的生物学活性。利用MTT法检测Msp对PC14细胞增殖力的影响,采用Transwell小室和基质胶侵袭实验观察Msp对PC14细胞迁移和侵袭能力的影响。结果转染Mst1基因后,形成PC14-Mst1-pEGFP-N1,稳定表达Mst1mRNA及蛋白,其本身的增殖能力被明显抑制,迁移能力和侵袭能力均较PC14和PC14-pEGFP-N1降低。它还通过旁分泌的方式对RON(+)阳性的癌细胞RAW264.7和SKBR-3的迁移起促进作用。结论 Msp表达可降低人非小细胞肺癌细胞PC14的增殖、迁移和侵袭能力,却对RON(+)阳性的癌细胞迁移通过旁分泌的方式有促进作用。