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急性粒-单核细胞白血病患者造血干细胞移植后微血栓形成凝血指标监测及治疗1例报告
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作者 沈连军 吴蔚 +6 位作者 吉薇 王红 孙幸 施青青 孙梅 顾健 倪军 《诊断学理论与实践》 2024年第2期180-183,共4页
本文报道1例急性粒-单核细胞白血病(急性髓系白血病M4型)(CBFB基因阳性)患者,经亲缘半相合造血干细胞移植后并发下肢微血栓形成,并总结其诊治经验。该患者经常规化疗后获完全缓解,但又于2年后复发,遂予行亲缘半相合造血干细胞移植。在... 本文报道1例急性粒-单核细胞白血病(急性髓系白血病M4型)(CBFB基因阳性)患者,经亲缘半相合造血干细胞移植后并发下肢微血栓形成,并总结其诊治经验。该患者经常规化疗后获完全缓解,但又于2年后复发,遂予行亲缘半相合造血干细胞移植。在患者接受移植后的常规治疗期间,动态观察其凝血相关指标[包括D-二聚体(D-dimer, D-D)、抗凝血酶Ⅲ(antithrombinⅢ,AT-Ⅲ)、血管性血友病因子(von Willebrand factor, vWF)、纤维蛋白原降解产物(fibrinogen degradation products, FDP)、纤维蛋白单体(fibrin monomer, FM)]。在移植后100 d左右,患者出现黄疸及转氨酶升高,采用经右下肢股静脉置管行血浆置换治疗3次。在去除静脉置管1周后,患者出现左踝部指凹性水肿,血管B超检查提示其左下肢腓肠肌浅静脉丛有微血栓形成;凝血指标检测显示,D-D、vWF、FDP、FM等指标升高,AT-Ⅲ水平降低。予口服拜瑞妥5 mg/d抗栓治疗2周后,患者上述凝血指标渐趋正常,左下肢肌间静脉丛血栓和肢肿消失。在造血干细胞移植后,除密切检查血管B超,动态监测D-D、AT-Ⅲ、vWF、FDP、FM等凝血指标可预测移植相关微血栓和高凝状态,并为临床开展有效抗的凝治疗提供实验依据。 展开更多
关键词 凝血指标 亲缘半相合造血干细胞移植 微血栓形成 彩色多普勒超声
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早防早治,老年痴呆并非不可避免
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作者 施青青 《家庭医药(快乐养生)》 2024年第2期81-81,共1页
老年痴呆症指患者大脑中承担控制记忆、推理的区域有病变发生,该病可导致患者脑功能逐步衰退。老年痴呆症的类型较多,包含阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合型痴呆(阿尔茨海默病与血管性痴呆并存)等,其中阿尔茨海默病是最常见类型。老年... 老年痴呆症指患者大脑中承担控制记忆、推理的区域有病变发生,该病可导致患者脑功能逐步衰退。老年痴呆症的类型较多,包含阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合型痴呆(阿尔茨海默病与血管性痴呆并存)等,其中阿尔茨海默病是最常见类型。老年痴呆症患者的病程可持续数年或数十年不等,结合病情表现可将其分为3个阶段。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 老年痴呆症 血管性痴呆 脑功能 常见类型 混合型痴呆
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金雀异黄素对淋巴瘤小鼠炎性易栓状态的体内干预及相关机制
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作者 陈祉悦 施青青 +7 位作者 孙幸 倪军 吴蔚 沈连军 孙梅 徐开林 顾健 顾昊 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期125-129,共5页
目的:探讨金雀异黄素(Genistein, GEN)对淋巴瘤鼠体内肿瘤相关炎性及易栓状态的干预及其机制。方法:将40只5-6周龄Balb/c雌性小鼠予以鼠源性Pro B细胞淋巴瘤细胞株38B9构建淋巴瘤荷瘤鼠模型,并随机分为对照组、荷瘤未干预、GEN干预和环... 目的:探讨金雀异黄素(Genistein, GEN)对淋巴瘤鼠体内肿瘤相关炎性及易栓状态的干预及其机制。方法:将40只5-6周龄Balb/c雌性小鼠予以鼠源性Pro B细胞淋巴瘤细胞株38B9构建淋巴瘤荷瘤鼠模型,并随机分为对照组、荷瘤未干预、GEN干预和环磷酰胺(Cyclophosphamide, CTX)干预共4组,每组10只。采用组织病理学评估成瘤情况,观察成瘤情况,取肿瘤组织行HE及免疫组化染色。采用ELISA和FCM法等分别检测GEN和CTX干预后血浆中炎性细胞因子分泌水平和血栓指标的变化。采用免疫组化法检测CD19在瘤体小鼠瘤组织中的表达。结果:小鼠荷瘤14 d后均成瘤,瘤体组织中淋巴瘤细胞呈弥散分布,荷瘤鼠瘤体组织的CD19表达为阳性。荷瘤鼠体内炎性指标IL-6、NETs及CLEC-2和血栓指标TF、FIB及D-D均明显高于荷瘤前(均P<0.05)。GEN及CTX干预后上述指标水平均低于未干预组。GEN干预组CLEC-2和D-D水平明显低于CTX干预组(P<0.05)。结论:荷瘤淋巴瘤小鼠体内存在肿瘤相关炎性及易栓状态。GEN通过干预肿瘤炎性因子达到的抗炎和抗易栓作用优于CTX。 展开更多
关键词 金雀异黄素 淋巴瘤 荷瘤鼠 肿瘤炎性易栓症
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国内近20年中医外治法治疗腰椎间盘突出症的可视化分析
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作者 方瑩 高利娟 施青青 《中医临床研究》 2024年第23期56-62,共7页
目的:利用CiteSpace软件研究我国近20年中医外治法治疗腰椎间盘突出症(Lambar Disc Herniation,LDH)的现状,并挖掘其合作网络、研究热点和研究前沿。方法:在中国知网检索2003年-2022年中医外治法治疗LDH的中文核心期刊文献,运用Note Exp... 目的:利用CiteSpace软件研究我国近20年中医外治法治疗腰椎间盘突出症(Lambar Disc Herniation,LDH)的现状,并挖掘其合作网络、研究热点和研究前沿。方法:在中国知网检索2003年-2022年中医外治法治疗LDH的中文核心期刊文献,运用Note Express软件进行期刊发文量统计分析,运用CiteSpace 6.2.R1软件对所纳入文献进行发文量、作者、机构分析,对关键词进行聚类和突现分析,绘制可视化知识图谱。结果:最终纳入文献533篇,年均发文量约27篇,高质量核心期刊文献不多。发文量最高的核心期刊为中国针灸杂志(98篇),综合影响因子最高的是中医杂志(1.062)。有537位作者纳入本次研究,其中核心作者有22位。发文量排名并列第一位的作者是向开维(7篇)、付勇(7篇)。近年来作者合作群体形成了主要以房敏、孔令军为代表的团体。本研究共纳入机构406家,发文量排名第一的机构为上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院(14篇),近年来形成了以上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院为中心的机构合作群。上海市中医药研究院推拿研究所在同类研究中影响较大。本研究分析获得10个关键词聚类和12个突现关键词,高频和高中心性关键词为“推拿”。关键词聚类形成10个聚类,#1推拿为最大聚类。结论:国内近20年中医外治法治疗LDH已形成了几个较稳定的学术研究团队,但该领域的核心作者群尚未形成。中医外治法治疗LDH常用方法为推拿、针刀、电针、中药热敷等,常用穴位为夹脊穴、环跳穴。中医外治法治疗LDH可恢复术后腰椎功能。各种中医外治法促进腰椎功能恢复为近年来研究热点。 展开更多
关键词 中医外治法 腰椎间盘突出症 可视化分析
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BMP4诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的研究 被引量:7
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作者 施青青 张振韬 +5 位作者 李鹏程 郑蒙蒙 王丹 黄晓梅 张亚妮 李碧春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1749-1757,共9页
旨在探讨BMP4诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的作用机理。采用单层贴壁培养作为分化模式,分别采用10、20、30和40ng·mL-1 BMP4浓度诱导雄性鸡胚胎干细胞,通过形态学、荧光定量PCR和免疫细胞化学检测诱导效果。根据细胞形态... 旨在探讨BMP4诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的作用机理。采用单层贴壁培养作为分化模式,分别采用10、20、30和40ng·mL-1 BMP4浓度诱导雄性鸡胚胎干细胞,通过形态学、荧光定量PCR和免疫细胞化学检测诱导效果。根据细胞形态变化和差异基因表达量变化,确定了BMP4的适宜诱导浓度为40ng·mL-1。在适宜浓度诱导过程中,诱导4d类胚体开始出现,6~8d类胚体逐渐增大,数量增多,10d部分类胚体开始散开,变为小的圆形细胞,12d在散开后的类胚体周围可观察到少量生殖样细胞,14d生殖样细胞数目增多,且呈聚团生长的趋势。诱导过程中相应基因表达量也发生变化:胚胎干细胞标记基因Nanog、Sox2表达量显著下降(P〈O.01),生殖细胞特异基因Stra8、Dazl、integrina6、c-kit表达量均呈显著上升趋势(P〈O.01)。BMP4可以引起生殖细胞相应基因的表达,促进雄性鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞方向分化,结果为雄性生殖细胞的体外诱导研究提供试验参考,为进一步研究雄性生殖细胞发生和调控机制提供理论基础。 展开更多
关键词 鸡胚胎干细胞 雄性生殖细胞 分化 BMP4
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血清免疫球蛋白检测在急性白血病患者中的临床意义 被引量:7
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作者 施青青 孙幸 +5 位作者 吴蔚 倪军 方悦之 朱淼 孙梅 顾健 《检验医学与临床》 CAS 2020年第20期2975-2977,2981,共4页
目的探讨血清免疫球蛋白(Ig)在急性白血病(AL)患者中的水平及与临床特征和感染指标的关系。方法收集2016—2018年在该院初诊的AL患者123例,所有患者按照初诊时的疾病类型分为急性早幼粒细胞白血病(APL)组20例、急性非淋巴细胞白血病(AN... 目的探讨血清免疫球蛋白(Ig)在急性白血病(AL)患者中的水平及与临床特征和感染指标的关系。方法收集2016—2018年在该院初诊的AL患者123例,所有患者按照初诊时的疾病类型分为急性早幼粒细胞白血病(APL)组20例、急性非淋巴细胞白血病(ANLL)组(除APL外)66例、急性淋巴细胞白血病(ALL)组37例,对照组为同期50例健康体检者。采用酶联免疫吸附试验检测各组血清IgG、IgA、IgM、kappa轻链(κ)、Lambda轻链(λ)水平,分析其表达与患者临床特征[性别、年龄、外周血白细胞计数(WBC)、血红蛋白(Hb)、血小板计数(PLT)]以及感染指标[C反应蛋白(CRP)和降钙素原(PCT)]的关系。结果ANLL组患者IgG、IgA、λ水平显著高于对照组(P<0.05)。ALL组IgG水平显著高于对照组(P<0.05)。当外周血WBC>10×109/L或PLT>300×109/L时,各项Ig水平均高于WBC、PLT在其他范围时的Ig水平。当PCT≥0.5 ng/mL或CRP≥10.0 ng/L时,IgG水平显著升高(P<0.05)。发生感染患者的各项Ig水平均高于未感染患者(P<0.05)。结论AL患者血清Ig水平与外周血WBC和PLT以及感染指标存在一定相关性,可为初诊AL患者的临床诊断和感染评估提供依据。 展开更多
关键词 急性白血病 免疫球蛋白 感染 C反应蛋白 降钙素原
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鸡胚原始生殖细胞生物学特性鉴定及相关基因表达研究 被引量:2
7
作者 施青青 孙敏 +4 位作者 郑蒙蒙 王丹 黄晓梅 张亚妮 李碧春 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期23-28,共6页
采用酶消化法分离鸡胚原始生殖细胞(PGCs),纯化后进行体外培养,传至5~6代时,通过对阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)免疫荧光标记、碱性磷酸酶检测等方法联合鉴定其基本生物学特性,同时以RT-PCR方法检测其特异基因的表达。结果表明:体外... 采用酶消化法分离鸡胚原始生殖细胞(PGCs),纯化后进行体外培养,传至5~6代时,通过对阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)免疫荧光标记、碱性磷酸酶检测等方法联合鉴定其基本生物学特性,同时以RT-PCR方法检测其特异基因的表达。结果表明:体外培养的PGCs维持未分化状态,碱性磷酸酶阳性、免疫荧光检测其特异标志物SSEA-1阳性。鸡胚PGCs表达减数分裂前标志基因Dazl、Nanog和GDF3,生殖细胞分化后期基因CVH,原始生殖细胞标志基因Blimp-1以及干细胞多能性相关基因Oct-4,不表达减数分裂启动基因Stra8。提示所获得的鸡胚PGCs,其生物学特性稳定,表达相关特异基因,为鸡胚PGCs的体外培养及鉴定提供理论依据。 展开更多
关键词 胚胎原始生殖细胞 体外培养 生物学特性 鉴定
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定量检测WT-1基因在急性白血病病人中的表达及临床意义 被引量:7
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作者 施青青 吴蔚 +4 位作者 孙幸 方悦之 朱淼 顾健 倪军 《蚌埠医学院学报》 CAS 2020年第1期14-17,共4页
目的:研究Wilms基因(WT-1)在急性髓系白血病(AML)病人骨髓细胞中的表达,并分析其表达与临床疗效的关系。方法:收集AML病人66例,其中急性早幼粒细胞白血病(APL)组8例,急性非淋巴细胞白血病(ANLL,除APL)组58例。对照组20名为健康体检者。... 目的:研究Wilms基因(WT-1)在急性髓系白血病(AML)病人骨髓细胞中的表达,并分析其表达与临床疗效的关系。方法:收集AML病人66例,其中急性早幼粒细胞白血病(APL)组8例,急性非淋巴细胞白血病(ANLL,除APL)组58例。对照组20名为健康体检者。采用实时定量PCR法检测骨髓细胞中WT-1表达,并以WT-1的中位表达水平作为界值,将初诊AML病人(APL除外)分为WT-1高表达组和低表达组,并分析其表达与病人性别、年龄、骨髓原幼细胞比例、外周血白细胞数、血红蛋白、血小板数、乳酸脱氢酶(LDH)、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、完全缓解(CR)率及复发率的关系,以揭示WT-1基因表达水平与AML预后的关系。结果:病例组与对照组相比WT-1表达率差异有统计学意义(χ^2=29.34,P<0.01)。各组WT-1表达水平相比差异有统计学意义(F=7.206,P<0.05),与对照组相比,APL病人和ANLL中M1的病人的WT-1表达水平均较高(P<0.05)。ANLL病人各亚型间相比差异有统计学意义(F=4.981,P<0.05),与M1组病人相比,M2组和M3组病人的WT-1表达水平相对较低(P<0.05);与WT-1低表达组相比,WT-1高表达组中骨髓原幼细胞比例、外周血白细胞数显著升高(P<0.05);而性别、年龄、血红蛋白、血小板数、LDH、CRP、PCT差异无统计学意义(P>0.05),2组病人预后水平差异无统计学意义(P>0.05);AML病人WT-1高表达组CR率低于低表达组(P<0.05)。结论:WT-1在AML病人骨髓细胞中表达水平可作为临床评估疾病的预后、疗效的指标。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 WT-1基因 实时定量PCR
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干扰PD-L1表达对小鼠B细胞淋巴瘤的抑制作用
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作者 施青青 朱淼 +4 位作者 孙幸 倪军 孙梅 顾健 吴蔚 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期771-777,共7页
目的:探讨干扰PD-L1(programmed death 1-ligad)的表达对抑制小鼠B细胞淋巴瘤的作用。方法:针对C D274(PD-L1)靶基因序列,设计3个RNA干扰靶点序列,连接到pGMVL-SC5干扰载体,瞬时转染293T细胞。RT-q PCR检验各靶点对PD-L1的干扰效率,将... 目的:探讨干扰PD-L1(programmed death 1-ligad)的表达对抑制小鼠B细胞淋巴瘤的作用。方法:针对C D274(PD-L1)靶基因序列,设计3个RNA干扰靶点序列,连接到pGMVL-SC5干扰载体,瞬时转染293T细胞。RT-q PCR检验各靶点对PD-L1的干扰效率,将干扰效率最佳的shRNA载体进行慢病毒包装,转染A20细胞,获得稳定低表达PD-L1的A20淋巴瘤细胞株(CD274-sh A20),将A20细胞株和CD274-sh A20细胞株以等数体外培养48 h,MTT法比较体外增殖的差异;同时使用2株细胞分别对免疫功能正常的BALB/c小鼠进行荷瘤,对照组皮下注射等体积PBS缓冲液;通过活体荧光成像评估成瘤情况,记录各组小鼠生存期。结果:CD274-sh A20细胞体外增殖速率显著低于PD-L1高表达的A20细胞(P<0.05)。与普通A20细胞荷瘤组相比,PD-L1干扰荷瘤组小鼠外观及活体荧光成像均可见其瘤体显著缩小。小鼠解剖后称取瘤重,测量瘤体积,结果显示,瘤重及瘤体积明显缩小(P<0.05)。小鼠生存期也较PD-L1高表达组有一定延长。结论:PD-L1在淋巴瘤的发生发展中起到重要作用,干扰其表达能抑制细胞的体外增殖,对于瘤体的生长有一定的抑制作用。 展开更多
关键词 PD-L1 RNA干扰 B系淋巴瘤
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一例肾动脉射频消融术护理报道
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作者 施青青 《世界中医药》 CAS 2015年第A01期743-744,共2页
随着现代生活水平的不断提高,不良饮食习惯导致高血压的人群日夜剧增,尤其是顽固性高血压的患者越来越多.顽固性高血压患者长期预后较差,无有效的降压治疗措施.肾脏交感神经的激活与原发性高血压的发生和维持紧密相关,故在肾动脉局部采... 随着现代生活水平的不断提高,不良饮食习惯导致高血压的人群日夜剧增,尤其是顽固性高血压的患者越来越多.顽固性高血压患者长期预后较差,无有效的降压治疗措施.肾脏交感神经的激活与原发性高血压的发生和维持紧密相关,故在肾动脉局部采用射频消融技术毁损肾脏交感神经可以降低体循环血压,有研究验证肾动脉射频消融术治疗顽固性高血压的疗效,但临床未广泛应用. 展开更多
关键词 射频消融术 肾动脉 顽固性高血压 高血压患者 护理 不良饮食习惯 原发性高血压 射频消融技术
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芽孢杆菌1259制剂对生长肥育猪生产性能及猪粪氨气产生量的影响 被引量:27
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作者 霍永久 张艳云 +3 位作者 施青青 陈香凝 戴承镛 戴怡 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第2期159-160,161,共3页
研究了芽孢杆菌BM1259制剂对生长肥育猪生产性能与猪粪氨气产生的影响。选择40头健康、体重相近的三元杂交(大约克×长白×淮猪)生长肥育猪,按体重与日龄随机分为对照组(20头)和试验组(20头),对照组仅喂基础日粮,试验组在基础... 研究了芽孢杆菌BM1259制剂对生长肥育猪生产性能与猪粪氨气产生的影响。选择40头健康、体重相近的三元杂交(大约克×长白×淮猪)生长肥育猪,按体重与日龄随机分为对照组(20头)和试验组(20头),对照组仅喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加0.04%的芽孢杆菌制剂,试验期49 d,试验开始与结束时称重,饲养期间采集粪样,连续测定粪样6 d产生氨气的浓度。结果表明,试验组平均日增重和料重比与对照组相比有提高的趋势(P>0.05)。试验组猪干物质和蛋白质的消化率显著高于(P<0.05)对照组。试验组猪粪产生的氨气浓度极显著(P<0.01)低于对照组。结果提示:BM1259制剂可以提高日粮粗蛋白和干物质的消化率,同时可减少氨气的产生,在一定程度上可改善猪舍空气环境。 展开更多
关键词 生产性能 芽孢杆菌 氨气
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睾丸注射Mx基因生产抗病转基因鸡初探 被引量:6
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作者 孙敏 倪黎刚 +4 位作者 施青青 阴彦辉 傅德智 高波 李碧春 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期14-18,共5页
采用脂质体转染法,将线性化pcDNA3.0-MMx质粒随机打点注射入18周龄青年公鸡睾丸内,术后观察公鸡日常活动、常规检测精子;采集转染后25、50、75 d公鸡精液,并于转染70 d后人工采精,授精于正常母鸡,产生F1后代,采用常规PCR检测技术,检测... 采用脂质体转染法,将线性化pcDNA3.0-MMx质粒随机打点注射入18周龄青年公鸡睾丸内,术后观察公鸡日常活动、常规检测精子;采集转染后25、50、75 d公鸡精液,并于转染70 d后人工采精,授精于正常母鸡,产生F1后代,采用常规PCR检测技术,检测证实外源Mx基因的整合情况,探讨外源Mx基因在鸡体内稳定整合和遗传的能力。结果表明:手术法转染外源基因过程对公鸡的生殖功能未造成明显影响;PCR检测证实外源Mx基因已整合到精子基因组,且能通过体外受精传递给后代,后代PCR检测的阳性率为27.27%(6/22)。证明外源Mx基因能稳定整合到基因组上,睾丸内注射法可能是一种切实可行、易于推广的制备抗病转基因鸡的方法。 展开更多
关键词 睾丸注射法 MX蛋白 转基因鸡
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急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块形成严重程度与血脂水平的关系 被引量:24
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作者 于芳苹 赵迎春 +5 位作者 顾彬 胡钧 施青青 高丹宇 王宏 杨永益 《脑与神经疾病杂志》 2014年第5期363-367,共5页
目的探讨急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块严重程度与血脂水平的关系。方法 253例急性脑梗死患者,根据颈动脉彩色多普勒超声检查结果分为无斑块组、内膜增厚组、轻度狭窄组、中度狭窄组及重度狭窄-闭塞组。检测患者血清总胆固醇(TC)、... 目的探讨急性脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块严重程度与血脂水平的关系。方法 253例急性脑梗死患者,根据颈动脉彩色多普勒超声检查结果分为无斑块组、内膜增厚组、轻度狭窄组、中度狭窄组及重度狭窄-闭塞组。检测患者血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、脂蛋白(LP)(a)、载脂蛋白(Apo)A-Ⅰ及(Apo)B水平。比较各组患者脂蛋白、载脂蛋白及各血脂水平的差异,分析各组颈动脉粥样硬化斑块形成严重程度与脂蛋白、载脂蛋白及各血脂水平之间的相关性。结果组间比较各组患者血清TC、LDL-C、LP(a)、ApoB、ApoA-Ⅰ及ApoB/ApoA-Ⅰ水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。血清TC、LDL-C、LP(a)、ApoB、ApoB/ApoA-Ⅰ水平与颈动脉狭窄呈正相关。(r=0.15,P<0.05,r=0.24,r=0.29,r=0.37,r=0.50,P<0.01),血清ApoA-Ⅰ水平与颈动脉狭窄程度呈负相关(r=-0.21,P<0.01)。逐步回归分析显示,TC、ApoB/ApoA-Ⅰ水平与急性脑梗死患者颈动脉狭窄呈正相关(P<0.05)。结论急性脑梗死患者的颈动脉狭窄程度与血清TC、ApoB/ApoA-Ⅰ水平密切相关。ApoB/ApoA-Ⅰ水平是预测缺血性脑卒中的重要危险因素。 展开更多
关键词 急性脑梗死 高脂血症 颈动脉狭窄 动脉粥样硬化斑块
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视黄酸及Stra8基因联合作用对雄性鸡胚胎干细胞分化的影响 被引量:3
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作者 张振韬 王丹 +8 位作者 施青青 ELSAYED A K 张亚妮 韦光辉 朱睿 左其生 李东 刘堃 李碧春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期38-45,共8页
旨在研究视黄酸(All-trans retinoic acid,RA)及Stra8(Stimulated by retinoic acid gene 8)基因联合作用对雄性鸡胚胎干细胞(Chicken embryonic stem cells,cESCs)分化的影响。选用PCR方法鉴定雄性cESCs为研究对象,转染Stra 8基因,对St... 旨在研究视黄酸(All-trans retinoic acid,RA)及Stra8(Stimulated by retinoic acid gene 8)基因联合作用对雄性鸡胚胎干细胞(Chicken embryonic stem cells,cESCs)分化的影响。选用PCR方法鉴定雄性cESCs为研究对象,转染Stra 8基因,对Stra8基因阳性cESCs使用RA进行12d连续诱导,同时设立Stra8基因转染组、RA诱导组及空白组对照,各组均进行3次重复试验。细胞形态学、qRT-PCR检测RA及Sira8基因对cESCs分化的影响。结果表明。转染Stra8基因进行RA诱导,在诱导12d后,出现精原干细胞样的圆形小克隆,其他组cESCs出现类胚体或解体;qRT-PCR鉴定发现各组中干细胞标记基因表达量随着培养时间的延长逐渐下降,同时检测到生殖细胞相关基因表达,转染Stra8基因并使用RA诱导组中表达量均高于对照组(P<0.01),6d表达量达到最高,然后逐渐下降。Stra8基因和RA的联合作用能够促进cESCs向着生殖细胞方向的分化,不仅改变了原有细胞形态,同时出现了生殖相关基因的表达。通过该方法可以在体外建立一个。ESCs诱导分化模型,将为生殖细胞的发生、增殖、分化及调控机理的研究和人类不孕不育症的治疗奠定良好的基础。 展开更多
关键词 cESCs Stra8基因 RA 联合作用 分化 基因表达
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猪精原干细胞体外分离培养及诱导分化的研究 被引量:4
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作者 陈庭锋 王霄燕 +8 位作者 李东 施青青 张蕾 邱峰龙 刘志永 庄勋 卞桂华 宋成义 李碧春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1104-1112,共9页
本研究旨在建立猪精原干细胞(Porcine spermatogonial stem cells,pSSCs)体外分离和诱导分化,并探索pSSCs定向分化及分化过程中关键基因的表达情况。采用差速贴壁法分离pSSCs和支持细胞(Sertoli),采用生化和免疫学方法鉴定其干细胞特性... 本研究旨在建立猪精原干细胞(Porcine spermatogonial stem cells,pSSCs)体外分离和诱导分化,并探索pSSCs定向分化及分化过程中关键基因的表达情况。采用差速贴壁法分离pSSCs和支持细胞(Sertoli),采用生化和免疫学方法鉴定其干细胞特性;传至3代后通过添加不同诱导剂,诱导SSCs向脂肪细胞、神经元样细胞和成骨细胞分化,并通过生化染色、qRT-PCR和免疫细胞化学检测诱导效果。结果表明:分离得到的pSSCs在饲养层上生长良好,碱性磷酸酶(AKP)及SOX2、integrinα6、SSEA1、Dazl抗体鉴定均呈阳性,表明SSCs处在未分化状态。诱导8d后,甲苯胺蓝染色及NSE抗体鉴定成阳性,成功诱导SSCs为神经元样细胞;诱导16d后,ALP、Von Kossa染色及Collagon l抗体鉴定均呈阳性,诱导SSCs为成骨细胞;诱导22d后,油红O染色可见脂滴被染成红色,诱导SSCs成为脂肪细胞。在SSCs诱导过程中,qRT-PCR结果显示,Nestin和β-tubulin在6d左右表达量最高,Cbfα1和Osterix在12d左右表达量最高,PPARγ和C/EBPα在18d左右表达量最高。本研究成功分离获得pSSCs,并且pSSCs可分别定向诱导分化为成骨细胞、神经元样细胞和脂肪细胞,表达细胞特有标记基因。 展开更多
关键词 精原干细胞 体外培养 诱导分化 基因表达
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鸡胚ESC和SSCs特定基因表达差异的研究 被引量:3
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作者 孙敏 施青青 +3 位作者 傅德智 阴彦辉 张亚妮 李碧春 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期16-19,共4页
目的:探讨鸡胚胎干细胞(ESC)和精原干细胞(SSCs)在基因表达水平上的差异。方法:传至二代的ESC和SSCs,采用免疫荧光和碱性磷酸酶检测法联合鉴定其干细胞特性,RT-PCR方法检测两者相关基因的表达差异。结果:两种处于未分化状态时的干细胞... 目的:探讨鸡胚胎干细胞(ESC)和精原干细胞(SSCs)在基因表达水平上的差异。方法:传至二代的ESC和SSCs,采用免疫荧光和碱性磷酸酶检测法联合鉴定其干细胞特性,RT-PCR方法检测两者相关基因的表达差异。结果:两种处于未分化状态时的干细胞基因表达存在差异:未分化的ESC表达基因GDF3基因和Nanog基因;SSCs表达特定基因c-kit、Cvh和Stra8基因。结论:两种干细胞在基因表达水平上有差异,为ESC与SSCs在基因水平上的鉴定提供参考依据。 展开更多
关键词 鸡胚胎干细胞 鸡精原干细胞 基因表达 鉴定
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1例慢性粒细胞白血病治疗后出现NK细胞增多的报道 被引量:3
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作者 孙幸 王红 +5 位作者 吴蔚 倪军 施青青 沈连军 姜扬文 顾健 《检验医学与临床》 CAS 2019年第1期135-137,共3页
慢性粒细胞白血病(CML)是一种造血干细胞克隆性骨髓增殖性肿瘤,其发病机制主要为9号染色体和22号染色体易位形成Ph,从而产生BCR-ABL融合基因。该融合基因编码产生的BCR-ABL融合蛋白具有高酪氨酸激酶活性[1]。针对CML分子发病机制的小分... 慢性粒细胞白血病(CML)是一种造血干细胞克隆性骨髓增殖性肿瘤,其发病机制主要为9号染色体和22号染色体易位形成Ph,从而产生BCR-ABL融合基因。该融合基因编码产生的BCR-ABL融合蛋白具有高酪氨酸激酶活性[1]。针对CML分子发病机制的小分子酪氨酸激酶抑制剂(TKI)将CML的治疗带入了分子靶向治疗阶段,显著延长了患者的生存时间。目前临床常用的TKI类药物有伊马替尼、尼洛替尼、达沙替尼。关于TKI靶向治疗的不良反应主要有骨髓抑制、体液潴留、腹泻、头痛、呼吸困难、皮疹、乏力、恶心和出血等[2]。但少有报道出现NK细胞增高,最近本研究发现1例CML患者应用TKI治疗后出现NK细胞增多。报道如下。 展开更多
关键词 慢性粒细胞白血病 酪氨酸激酶抑制剂 NK细胞
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鸡Dazl基因的克隆及其亚细胞定位研究 被引量:2
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作者 郑蒙蒙 李伟 +3 位作者 施青青 王丹 黄晓梅 李碧春 《中国家禽》 北大核心 2013年第6期8-12,共5页
为克隆鸡Daz(lDeleted in azoospermia-like,Dazl)基因CDS序列,通过构建eGFP标记的DAZL真核表达载体,实现该基因产物的亚细胞定位以探究其生物信息学功能。提取1日龄鸡睾丸总RNA,通过巢式PCR方法扩增出Dazl基因的CDS,构建真核表达载体pE... 为克隆鸡Daz(lDeleted in azoospermia-like,Dazl)基因CDS序列,通过构建eGFP标记的DAZL真核表达载体,实现该基因产物的亚细胞定位以探究其生物信息学功能。提取1日龄鸡睾丸总RNA,通过巢式PCR方法扩增出Dazl基因的CDS,构建真核表达载体pEGFP-C1-DAZL。采用LipofectaminTMLTX介导重组表达载体pEGFP-C1-DAZL转染CEF细胞,48h后于荧光倒置显微镜下观察其表达定位,同时利用RT-PCR和Western-blot进一步鉴定eGFP-Dazl和蛋白水平的表达情况。结果表明:克隆出Dazl基因的完整CDS,长度870bp,共编码289个氨基酸,与公布的鸡Dazl基因(GenBank登陆号:NM_204218)CDS区同源性达99%,编码氨基酸完全一致。酶切鉴定和序列分析均表明真核表达载体pEGFP-C1-DAZL构建成功。转染48h后,RT-PCR和Western-blot分别检测到949bp特异条带和59.7ku的融合蛋白。荧光显微镜观察显示,融合蛋白(eGFP-Dazl)主要分布于细胞核。 展开更多
关键词 DAZL 真核表达载体 绿色荧光蛋白 亚细胞定位
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鸡Stra8基因真核表达载体构建及亚细胞定位的研究 被引量:2
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作者 王丹 张振韬 +7 位作者 施青青 黄晓梅 朱才业 郑蒙蒙 李伟 徐剑蓉 王克华 李碧春 《中国家禽》 北大核心 2013年第8期10-13,共4页
试验旨在克隆苏禽黄鸡视黄酸激活基因8(Stra8)的cDNA序列,构建pEGFP-C1-Stra8载体并制备鸡Stra8抗体。通过RT-PCR克隆苏禽黄鸡Stra8基因cDNA,构建pEGFP-C1-Stra8和pcDNA3.1(+)-Stra8重组质粒,分别转染NIH-3T3细胞和免疫小鼠制备抗体,间... 试验旨在克隆苏禽黄鸡视黄酸激活基因8(Stra8)的cDNA序列,构建pEGFP-C1-Stra8载体并制备鸡Stra8抗体。通过RT-PCR克隆苏禽黄鸡Stra8基因cDNA,构建pEGFP-C1-Stra8和pcDNA3.1(+)-Stra8重组质粒,分别转染NIH-3T3细胞和免疫小鼠制备抗体,间接免疫荧光法检测抗体效价以及在细胞中的分布。结果显示,苏禽黄鸡Stra8基因cDNA全长645bp,共编码214个氨基酸,提交至GenBank获得登录号为JX204292.1;成功制备Stra8多克隆抗体,pEGFP-C1-Stra8融合蛋白在NIH-3T3细胞质中表达。该结果为深入探讨禽类Stra8生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 Stra8基因 质粒DNA免疫 多克隆抗体 亚细胞定位
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神经氨酸酶基因联合抗黏液病毒基因的抗病毒作用 被引量:1
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作者 傅德智 张亚妮 +6 位作者 陈昊 李伟 郑蒙蒙 王丹 张振韬 施青青 李碧春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期78-86,共9页
拟构建神经氨酸酶(NA)基因和抗黏液病毒(Mx)基因双基因真核共表达载体,并检测基因表达以及转染鸡成纤维(CEF)细胞后的抗病毒效果。克隆了NA基因和突变型Mx基因的cDNA;分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2中,酶切和测序鉴定双基因... 拟构建神经氨酸酶(NA)基因和抗黏液病毒(Mx)基因双基因真核共表达载体,并检测基因表达以及转染鸡成纤维(CEF)细胞后的抗病毒效果。克隆了NA基因和突变型Mx基因的cDNA;分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2中,酶切和测序鉴定双基因共表达载体pVITRO2-Mx-NA的正确性。用pVITRO2-Mx-NA转染NIH-3T3细胞,通过RT-PCR和间接免疫荧光(IFA)方法检测目的基因的表达。随后用pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞,利用RT-PCR及微量细胞病变抑制法测定重组蛋白抗新城疫病毒(NDV)的效果。结果:酶切和测序分析表明成功构建了双基因真核共表达载体pVITRO2-Mx-NA,在转染后的NIH-3T3和CEF细胞中同时检测到了NA和Mx基因的表达。联合基因表达的重组蛋白可保护CEF细胞在孵育的72h内免受NDV的感染,而转染了突变型Mx或者NA单基因真核表达载体的CEF细胞在孵育的48h内亦未受到NDV的侵染;与单基因转染组相比,联合基因转染组明显延迟NDV感染CEF细胞的时间,差异显著(P<0.05)。构建的双基因真核表达载体pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞后,其表达的重组蛋白Mx-NA在细胞水平上具有协同延缓NDV感染的能力,且优于单个基因。 展开更多
关键词 NA MX 双基因表达载体 抗病毒活性 抗NDV
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