线粒体基因表达的调控及其与某些疾病的关系

线粒体除作为细胞生成能量的场所,其基因组还编码参与线粒体氧化呼吸链组成的13条多肽链,22种tRNA分子和2种rRNA分子。线粒体基因表达受众多因素调控,其表达异常可影响细胞对氧的利用,与一系列病理生理过程密切相关。该文介绍近年来线粒体基因表达调控,及肿瘤等疾病过程中线粒体基因表达变化的研究进展。

大鼠肝再生早期线粒体介导的caspase-3激活的机制

目的:从线粒体介导的内源性途径分析大鼠肝再生早期肝细胞凋亡执行酶caspase-3激活的机制。方法:雄性SD大鼠35只,分成模型组15只(70%肝切除制作肝再生模型)、假手术组15只和正常对照组5只。模型组和假手术组根据时间分为术后3、6和24 h三个亚组,每个亚组5只。取各组大鼠肝组织,制备肝匀浆液。荧光法测肝组织凋亡酶caspase-3和caspase-9的活性;酶联免疫分析法测谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性;硝酸还原法测NO含量。结果:与假手术组相比,模型组凋亡酶caspase-3和caspase-9的活性在肝再生早期(术后3、6 h组)显著增高(P<0.01);GSH-Px水平显著降低,NO分泌量显著增高(P<0.01)。结论:肝再生早期,肝组织处于氧化应激状态,线粒体介导的内源性途径参与凋亡执行酶的激活。

研究生蛋白质组学理论及技术实验教学实践与体会

随着蛋白质组学技术在生命科学各个领域的广泛应用,为了提高研究生培养质量,国内已有多家高等医学院校开设了蛋白质组学专业课。结合教学实践,提出应用现代教学理念,通过建设网络教学平台、细化实验课考核指标、使用多媒体技术和加强双语教学等手段,提高教学效果。

大鼠肝再生早期枯否细胞介导的Caspase-3激活机制探讨

目的探讨大鼠肝再生早期枯否细胞介导的肝细胞凋亡执行酶Caspase-3的激活机制。方法制备肝再生模型,部分用肝枯否细胞的特异性抑制剂氯化钆(Gd)处理。计算肝再生度和再生指数,检测血清ALT、AST和TNF-α,检测肝组织Caspase-3、8活性。结果与未经Gd处理的模型组相比,Gd处理模型72h时肝再生度和再生指数降低,24h时血清ALT及AST水平升高,而TNF-α水平下降,3h和6h时肝组织Caspase-3、8活性下降。结论肝再生早期,枯否细胞通过Caspase-8等介导的外源性凋亡信号途径参与Caspase-3的激活。

药学专业本科生教研室实习带教体会

药学专业本科生实习包括教研室实习、药厂实习及药房实习等。教研室实习主要围绕课题研究展开，如何培养实习生的创新能力，帮助其具备科研素养是教研室实习面临的重要课题。教研室实习涉及选题、开题、实验、论文撰写及答辩等多个环节，由于实习时间较短及实习工作量大等问题。笔者就近年来教研室在实习生培养方面的经验进行总结和思考。

对高校药学专业开展第二课堂活动的思考

药学专业是一门实践性很强的学科,本科生在校学习阶段积极参与丰富多样的第二课堂活动,有助于激发学习兴趣、提高学习能力、开拓视野及增强对专业的理解等,是目前各大高校力求促进本科生培养质量进一步提高的重要途径.

把握学年规律 发挥军队院校本科生导师作用

军医大学实行本科生导师制,与主讲教员课堂教学、学员队教育管理一起,构成了一个完整的育人工作机制。为不断完善和发展本科生导师制,使之在军队院校实践中取得更好效果,笔者结合担任第二军医大学本科生导师的实践,就如何适应军队院校学年规律,更好地发挥本科生导师作用提出几点建议。

药学专业本科学员新药创新能力的培养

生物医药产业发展迅猛,竞争日趋激烈,对高等军事院校培养创新型人才提出了更高的要求。本文立足于第二军医大学药学院生化药学教研室培养新药创新人才的实践,就近年来教研室立足课堂、积极探索利用研究生教育资源培养本科学员新药创新能力等方面取得的经验进行总结,力求不断提高创新型军事人才培养水平。

大鼠肝再生过程中肝细胞caspase-3和caspase-8活性的变化

目的:研究大鼠肝再生过程中肝细胞caspase-3和caspase-8活性的变化规律。方法:雄性SD大鼠70%肝切除(PH),制作肝再生模型,制备肝匀浆液,经离心后用酶标仪分别测定肝再生过程中不同时期(共8个时间点),肝细胞的凋亡酶活性。结果:Caspase-3活性,与对照组相比,在PH后3、6、72、120和168 h时显著性增高(P<0.001);而整个过程中Caspase-8的活性除了在PH后168 h时高于对照组外(P<0.05),其余时间点没有明显增高。结论:肝再生过程中肝细胞凋亡酶Caspase-3活性的升高可能主要是由内源性线粒体途径引起的。

过氧化物酶增殖物激活受体-γ在大鼠肾脏组织衰老过程中的表达变化及其与氧化应激的关系

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在不同年龄大鼠肾组织中的表达与分布,并进一步探讨其与衰老过程中氧化应激的关系。方法:选用3个月龄、12个月龄、24个月龄自然衰老SD大鼠为模型,Western印迹分析PPARγ在不同年龄大鼠肾组织中的表达,通过测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性反映肾组织细胞抗氧化能力。结果:应用Western印迹检测肾脏PPARγ的蛋白表达,发现PPARγ蛋白在大鼠肾组织中表达随月龄下降,3月龄肾组织中PPARγ表达明显高于24个月龄大鼠(P<0.01);SOD、GSH-PX活性均随月龄增加明显下降(P<0.01),两者的活性均与PPARγ蛋白的表达呈明显正相关(r=0.900,r=0.890,P均<0.01)。结论:PPARγ在大鼠肾组织衰老过程中呈下降趋势,这种变化与肾脏组织抗氧化应激能力下降有关。

罗格列酮干预对老年SD大鼠氧自由基及相关生化指标的影响

目的:观察罗格列酮对衰老大鼠血液生化指标及氧自由基的影响,为将来抗衰老的实验研究提供一定的实验依据。方法:24个月龄(老年)自然衰老SD大鼠为模型,随机分为正常对照组、罗格列酮组、能量限制组,每组10只。罗格列酮组给予罗格列酮4mg/(kg·d)灌胃,能量限制组给予正常对照组饮食的60%,第12周治疗结束时处死所有动物并检测各组大鼠的血液生化指标及超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(DA)的酶活性。结果:各组大鼠血糖值(GLU)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)无明显差异,均在正常范围内。罗格列酮组血胆固醇(CH)较对照组出现下降,但无统计学差异。罗格列酮组及限食组血三酰甘油(TG)均较对照组出现了明显下降(P<0.05)。罗格列酮组及限食组血液SOD及MDA酶活性均较对照组有明显改善。结论:罗格列酮具有调节老年大鼠体内脂质代谢紊乱、减轻氧化损伤的作用,可能起到抗衰老的作用。

血小板活化因子乙酰水解酶融合蛋白的表达、纯化及鉴定

目的:获得血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)全长编码基因并在GST原核表达系统中表达。方法:通过RT- PCR方法,从正常人外周血单个核细胞(PBMC)中扩增出PAF-AH全长编码基因,将其克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-4T- 3,转化大肠杆菌BL21并诱导表达,采用GST蛋白纯化系统进行纯化。所得纯化蛋白以SDS-PAGE及Western印迹方法鉴定,并进行酶活性测定。结果:获得了PAF-AH基因,序列分析与GenBank数据库中序列一致。SDS-PAGE及Westem印迹结果显示,诱导表达出可溶性的融合蛋白,其相对分子质量与预期相符。纯化蛋白经Western印迹检测能够被特异性抗体所识别,具有免疫学活性;酶活性检测证实其具有特异的水解PAF的活性。结论:本实验在大肠杆菌表达系统中高效表达了有活性的PAF-AH蛋白。

α-肾上腺素受体在脊髓损伤大鼠血管高反应性中的作用

目的研究高位脊髓横切(SCT)慢性期大鼠腹主动脉离体血管环对α肾上腺素受体(αAR)激动剂的反应性及腹主动脉1αAR、α2AR各亚型mRNA的表达量,探讨其与腹主动脉高反应性的关系。方法取SCT 4周后大鼠的腹主动脉,利用离体血管环张力测定技术,以血管环对梯度浓度去氧肾上腺素(Phe)和可乐定的收缩力,反映血管环对α1AR、2αAR激动剂的反应性;通过实时定量聚合酶链反应(PCR)测定腹主动脉1αAAR、1αBAR、1αDAR、2αAAR、2αBAR和2αCAR的mRNA表达量改变,并与假手术组比较。结果与假手术组比较,SCT 4周组大鼠腹主动脉对可乐定反应性上升(P<0.05或P<0.01),对Phe反应性无明显改变;SCT组腹主动脉1αAAR和1αDAR的mRNA表达上调(P<0.05或P<0.01),而1αBAR mRNA表达未见明显改变(P>0.05),2αAAR、2αBAR和2αCAR的mRNA表达均上调(P<0.05或P<0.01)。结论在SCT慢性期,腹主动脉高反应性的机制可能为血管对2αAR激动剂敏感性上升,2αAR mRNA表达上调。虽然1αAR mRNA表达上调,但离体血管对Phe收缩力无明显改变,1αAR可能并不是引起SCT慢性期血管高反应性的原因。

课题式教学在基因工程药物教学中的应用

基因工程药物课程内容庞杂,理论体系复杂且实践性强,单纯采用传统课堂讲授式教学难以达到理想的教学效果。介绍了在基因工程药物教学中引入课题式教学法以提高教学质量的一些做法,不仅可以使学生更加深刻地理解基因工程药物相关的概念、原理,还可以提高获取知识的兴趣和能力,培养科学研究的思维和创新意识,增强交流沟通、团队合作等多方面的综合素质。

肝再生与线粒体蛋白释放的关系

在肝部分切除或创伤后,残存肝组织很快就进入复杂的再生过程。在肝再生过程中,线粒体发挥着重要的作用,不仅提供能量,而且参与细胞的信号转导等活动。近年来众多研究表明,在肝再生过程中线粒体透性转换有明显特征性的变化,并具有一定的规律性;同时发现,在肝再生早期有一些线粒体基质蛋白释放到胞液中,提示线粒体蛋白的释放可能与肝再生之间具有一定的关系。

核呼吸因子-1:细胞核调控线粒体功能的一种重要因子

核基因组和线粒体基因组之间的相互作用,以及它们调控呼吸链亚基表达的机制,一直是国内外学者研究的热点问题。核转录因子的发现,使细胞核调控线粒体呼吸链亚基表达机制的研究得到很大发展。核呼吸因子-1(nuclearrespiratoryfactor1,NRF-1)是一种由核基因组编码的,调控呼吸链亚基表达以及mtDNA转录和复制的核转录因子。该文就NRF-1的发现、调控呼吸链亚基表达、在胚胎期维持mtDNA稳定等功能作一介绍。

激肽系统活性产物

随着研究的不断深入,发现激肽释放酶-激肽系统参与了机体众多的生物学过程,除了对机体心血管系统、凝血系统、纤溶系统和肾功能等正常生理过程的调节作用外,在高血压、炎症、疼痛、血管生成、细胞增殖、凋亡和肿瘤发生等诸多的病理生理过程中也陆续发现有着不可替代的作用。有关激肽释放酶等上游活性物质的生理功能报道较多,本文从人激肽释放酶-激肽系统开始,重点对下游活性产物缓激肽、活性高分子量激肽原等在生理及病理过程中的作用和调节作一综述。

丙泊酚对大鼠脑缺血-再灌注损伤后水通道蛋白4表达的影响

目的丙泊酚具有脑保护作用,其分子机制尚不清楚。水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP-4)与脑损伤后脑水肿有关。文中探讨大鼠脑缺血-再灌注损伤后AQP-4基因的表达规律及丙泊酚的作用。方法雄性SD大鼠108只,体重(220±20)g,随机等分为3组,即假手术组:仅开颅,不做缺血再灌注处理;缺血再灌注损伤组(I/R组);丙泊酚组:I/R组、丙泊酚组经右股静脉置管后分别用微量泵持续给予等渗盐水2 ml/(kg.h)和丙泊酚20 mg/(kg.h),在大脑中动脉阻断前开始用药,至再灌注3 h后停止给药,各组又分为缺血2 h后再灌注0.5、1、3、6、12及24 h 6个亚组,每亚组6只大鼠。测定各组大鼠脑含水量,分别用RT-PCR和Western blot检测脑内各时相点AQP-4的mRNA和蛋白水平。结果再灌注后3 h开始,脑组织含水量即有增加。与I/R组相比,再灌注损伤后3、6、12及24 h丙泊酚组脑组织含水量均明显下降(P<0.05或0.01)。脑缺血-再灌注损伤后,脑组织AQP-4 mRNA表达升高(P<0.05或0.01),于12 h达峰值,而蛋白则于6 h达峰值。再灌注后24 h AQP-4 mRNA表达仍明显高于假手术组。与I/R组相比,丙泊酚组各点AQP-4 mRNA和蛋白的表达均明显下降(P<0.05或0.01)。结论丙泊酚可部分抑制脑缺血-再灌注损伤后AQP-4的表达,减轻脑水肿,可能是其脑保护作用机制之一。

冰冻保存鱿鱼体内氧化三甲胺脱甲基酶活性测定方法的建立

建立了冰冻保存鱿鱼体内氧化三甲胺脱甲基酶(TMAOase)活性的测定方法,初步探索了鱿鱼体内甲醛的产生机理。根据TMAOase可在体外催化TMAO生成甲醛,后者可用乙酰丙酮法定量,并结合酶促反应动力学的原理,建立针对冰冻保存鱿鱼体内TMAOase活性的检测方法。建立的活性检测方法可用于检测冰冻保存的鱿鱼体内TMAOase的活性;冰冻鱿鱼体内TMAOase的活性随保存时间延长而增高。该方法简便易行,重复性较好,对深入研究TMAOase生物学特性具有一定的应用价值;在冰冻保存过程中,鱿鱼体内TMAOase活性是造成甲醛含量增高的重要原因。

肝癌SMMC-7721细胞受X线照射后线粒体DNA部分编码区断裂损伤状况

目的:研究肝癌SMMC-7721细胞受不同剂量的X线照射后线粒体DNA编码区的断裂损伤状况。方法:对SMMC-7721细胞照射不同剂量(0、20、30、50 Gy)的X线,根据人线粒体DNA编码区的序列设计引物,用接头介导的PCR (LM—PCR)以及基因扫描技术来检测其断裂位点及程度。结果:通过基因扫描的方法,发现经不同剂量X线照射后SMMC- 7721细胞线粒体DNA编码区存在对X线敏感的位点,断裂损伤的程度和辐照剂量呈正相关,并且这些位点的分布是非随机的;在SMMC-7721细胞线粒体DNA编码区中,重链的损伤程度较轻链高。结论:SMMC-7721细胞受不同剂量的X线照射后线粒体DNA编码区有明显的断裂损伤,线粒体DNA的变化对肿瘤的临床治疗有一定的指导价值。