微生物检验标本不合格原因分析及质量控制对策

随着微生物检验技术的不断发展,新的检验设备以及检验方式也发展迅速,这种情况下如何保障微生物检验的质量,为食品业的发展提供可靠的依据是一个亟待解决的问题,本文将就微生物检验标本不合格原因进行分析,并对如何控制质量的措施进行了相关探讨。

2005-2007年《预防医学情报杂志》载文和引文分析

目的通过对《预防医学情报杂志》载文和引文分析,客观评价该刊在预防医学领域中的整体水平及影响,为提高办刊质量提供依据。方法应用《中国医院数字图书馆》中的《CHKD期刊全文数据库》,采用文献计量学方法,对该刊2005-2007年刊登的全部论文和引用文献进行统计分析。结果该刊2005-2007年共刊登文献968篇,分别为368、306、294篇,其中论著分别为53、62、108篇;作者以疾病预防控制机构最多(70.35%);基金项目资助论文66篇(6.82%);834篇有引文(引文率86.16%),共引用文献5972条,3年分别为1661、1950、2361条。结论该刊文献质量逐年提高,载文篇数逐年减少,论著及引文数量均逐年增加。

一起沙门氏菌食物中毒的溯源分析及药敏检测

目的对一起由沙门氏菌污染鸡爪引起的食物中毒进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型溯源和耐药分析,为查明这起食物中毒的源头及临床治疗提供相关理论依据。方法对6例患者进行流行病学调查,采集可疑食品和患者粪便等标本,根据国家标准进行实验室检测,经增菌后挑取可疑菌落进行生化鉴定,对检出的7株沙门氏菌株采用标准诊断血清进行血清凝集试验,菌株DNA经限制性内切酶XbaⅠ酶切后进行PFGE分子分型,所得结果用BioNumerics软件进行聚类分析,最后利用微量肉汤稀释法对7株沙门氏菌株进行耐药性检测。结果6例患者均有不同程度的腹痛、腹泻和发热等症状;从鸡爪中检出沙门氏菌1株,患者粪便标本中检出沙门氏菌6株,通过生化仪鉴定和血清凝集试验显示7株沙门氏菌的血清型同为福尔斯布特尔血清型,PFGE显示7株沙门氏菌株同源性为100.0%,药敏结果显示这7株菌株均对四环素类药物(四环素、米诺环素)、大环内酯类药物(阿奇霉素)耐药。结论该起群体性腹泻、发热、腹痛事件为一起由沙门氏菌引起的食物中毒事件。有关部门应加大对食品安全知识的宣传普及,提高大众的食品安全意识;大众食用购买的熟食前应尽量加热处理后再食用,这是预防沙门氏菌食物中毒的重要措施;同时,建议监管部门加强对食品小作坊、饭店等生产经营场所的监管,预防类似事件的发生。

改良真空冷冻干燥技术在消毒剂杀菌试验菌片制备中的应用

目的研究一种运用改良真空冷冻干燥技术改进消毒剂杀菌试验中菌片制备的方法。方法使用改良真空冷冻干燥技术将大肠杆菌和白念珠菌固定在载体上制备真空冻干菌片,采用保存有效期监测试验、稳定性模拟试验及载体定量杀菌试验,对该真空冻干菌片保存有效期、稳定性以及是否影响消毒效果进行评价。结果-20℃保存条件下,载体类型为布片、钢片时,大肠杆菌和白念珠菌菌片保存有效期均为3个月;-80℃保存条件下,大肠杆菌和白念珠菌布片保存有效期为4个月,钢片稳定性最好,保存有效期为6个月。运输温度不高于25℃、运输时间不超过4h以及中和剂浸泡温度不高于25℃、浸泡时间不超过4h,真空冻干菌片的回收菌量仍能满足试验要求。分别使用常规干燥法和真空冻干法制备菌片,使用有效氯含量为150g/L的84消毒液作用3min,两种菌片制备方法中大肠杆菌的杀灭对数值均>3.00;使用有效氯含量为150g/L的84消毒液作用5min,两种菌片制备方法中白念珠菌的杀灭对数值均>3.00;使用过氧乙酸含量为100g/L的消毒液作用1min,两种菌片制备方法中大肠杆菌的杀灭对数值均>3.00;使用过氧乙酸含量为100g/L的消毒液作用3min,两种菌片制备方法中白念珠菌的杀灭对数值均>3.00。结论改良后的真空冻干技术可明显延长真空冻干菌片的保存时间,且能保持良好的稳定性。

山东省济南市公共场所集中空调冷却塔水军团菌污染状况调查

目的了解2013-2022年山东省济南市公共场所集中空调冷却塔水的军团菌污染状况,分析菌株毒力基因携带情况,为军团菌污染防控提供科学数据。方法参照《公共场所集中空调通风系统卫生规范》,2013-2022年对山东省济南市113家公共场所集中空调冷却塔水进行军团菌分离,通过生化培养及飞行时间质谱对疑似菌株进行鉴定。使用诊断血清对嗜肺军团菌进行分型。采用PCR方法扩增菌株的毒力基因lvh和rtxA,产物通过毛细管电泳判读。结果2013-2022年采集山东省济南市113家公共场所集中空调冷却塔水样216份,47份分离到军团菌,检出率为21.8%(47/216)。获得军团菌81株,其中嗜肺军团菌占90.1%(73/81)。73株嗜肺军团菌中,有84.9%(62/73)同时携带lvh和rtxA两种毒力基因,1.1%(8/73)仅携带一种毒力基因。其余3株嗜肺军团菌及8株非嗜肺军团菌均未检出lvh和rtxA。结论济南市公共场所集中空调冷却塔水军团菌污染较为严重,存在公共卫生危害。分离的嗜肺军团菌大多数均携带lvh和rtxA两种毒力基因,可能导致军团菌病。

引起一起食物中毒的副溶血性弧菌病原学检测和分子分型溯源研究

目的对引起一起食物中毒的副溶血性弧菌进行实验室鉴定,分析菌株间的相关性。方法按照国标GB4789和有关规范对采自患者的粪便肛拭标本及砧板涂抹标本进行肠道致病菌检测,同时采用实时荧光PCR对耐热直接溶血素(TDH)毒力基因进行鉴定。提取副溶血性弧菌分离株基因组DNA,经限制性内切酶SfiⅠ酶切后进行脉冲场凝胶电泳(PFGE),获得指纹图谱,利用BioNumerics6.6软件进行聚类分析。结果从病人和砧板标本共分离出8株O1血清型副溶血性弧菌,其TDH毒力基因为阳性。聚类分析显示,分离自中毒病人和砧板的8株副溶血性弧菌的指纹图谱相似性高达100%。结论引起该起食物中毒的病原菌为携带TDH毒力基因的O1血清型副溶血性弧菌,且来自同一污染源。

空肠弯曲菌防治策略研究概况

空肠弯曲菌被认为是目前世界范围内导致食源性腹泻的首要原因。欧洲每年患空肠弯曲菌病的病例数已经超过了沙门菌感染的病例数,发展中国家更不容乐观。对家禽尤其鸡,从农场到餐桌的空肠弯曲菌预防控制已经提上日程。本文就国内外空肠弯曲菌的常规和生物拮抗防治策略进行综述。

济南市肉鸡生产链沙门菌污染监测及分析

目的了解肉鸡孵化、养殖、屠宰加工和配送分销各环节的沙门菌污染状况,确定易受污染的环节和样品类别,为预防和控制由沙门菌引起的食源性疾病提供科学依据。方法按照随机抽样的原则,在济南市肉鸡孵化场、养殖场、屠宰场(点)和配送分销点设置16个监测点,按不同的季节和环节定期随机采集监测样本。检验方法按照《2012年全国食源性致病菌监测工作手册》执行。结果监测17种样品共1 204份,13种样品检出沙门菌202株,总检出率为16.78%。除1种不可分型外,其他分属4群28种血清型,以印第安纳血清型沙门菌最多(37.13%);4个环节中,以屠宰加工环节沙门菌检出率最高(23.14%);四个季度中,以第二季度沙门菌检出率最高(21.74%);17种样品中,以屠宰环节的褪毛后整禽样本沙门菌检出率最高(42.19%)。结论济南市肉鸡相关行业的沙门菌交叉污染严重,应加强肉鸡生产链全过程的监管和监测,并针对各污染环节和工序,确定不同的关键控制点,制定相应的操作程序,以减少沙门菌的交叉污染。

市场销售食品食源性致病菌污染情况分析

随着饮食文化呈现多元化趋势，随之而来的便是备受关注的食品安全问题。食源性致病菌是食源性疾病的首要原因，据统计，在全世界所有爆发的食源性疾病案例中，66％以上为致病性细菌所致[1]。最近一项食源性疾病主动监测显示，我国每年平均6个半人中就有1人次罹患食源性疾病。为了解济南市主要食品中食源性致病菌的污染状况，及时发现食品安全隐患并进行风险预警，按照国家食源性致病菌监测网的要求，2010-2011年根据食品的特征，对市售的15类食品进行了有针对性的致病菌种类监测。

阪崎肠杆菌的特征及分类研究进展

阪崎肠杆菌具有产生黄色素、α-葡萄糖苷酶阳性、吐温80酯酶阳性等特征,说明其具有分类学特异性。随着分子生物技术的应用,阪崎肠杆菌分类地位由早期的黄色阴沟肠杆菌演变为独立的阪崎肠杆菌种,而近期Iversen C等学者又提议建立一个新属阪崎肠杆菌。

一起发生在商务酒店的副溶血性弧菌食物中毒调查

目的确定腹泻病暴发疫情的性质与发生原因。方法对2011年7月发生在济南市某商务酒店的一起腹泻病暴发事件进行调查。结果 2011年7月20日18:00至21日8:00,在济南市某商务酒店培训就餐的120人中有41人出现腹痛、腹泻,罹患率为37.14%,怀疑系食用20日午餐食品所致。从酒店厨房的1份菜板样中检出副溶血性弧菌,从3份接种有病人粪便标本的碱性蛋白胨水和4份病人粪便(肛拭)样本中检出副溶血性弧菌,8株副溶血性弧菌耐热直接溶血素基因(TDH)均为阳性。结论这是1起由副溶血性弧菌引起的食物中毒,引起中毒的食物及其污染来源未能查清。

以改良半固体Rappaport-Vassiladis培养基为基础的毛细管培养法检测鸡肉中的沙门氏菌

目的设计以改良半固体Rappaport-Vassiladis(MSRV)培养基为基础的毛细管培养法(简称改良培养法),评价该法对鸡肉样本中沙门氏菌的检测效能。方法将载有MSRV培养基的毛细管插入样本预增菌液或增菌液,筛检样本中的沙门氏菌。以129株沙门氏菌和58株非沙门氏菌评估改良培养法的敏感性和特异性;以ISO6579∶2002食品和饲料沙门氏菌检测基准方法(简称国际标准法)为参比标准,评价改良培养法对鸡肉样本中沙门氏菌的检测能力。结果改良培养法对沙门氏菌的敏感性为96.9%(125/129),对非沙门氏菌的特异性为96.6%(56/58)。改良培养法和国际标准法对鸡肉样本中沙门氏菌的检出率分别为33.3%(20/60)和35.0%(21/60),两者无统计学差异(P>0.05)。与国际标准法相比,改良培养法筛检出91.7%(33/36)的阴性样本,不需要进一步分离和鉴定;初筛时间早至36 h,比原时间缩短一半。结论改良培养法对鸡肉中沙门氏菌的检测效能与国际标准法无统计学差异,具有节约人力物力和省时快速的特点。

改良半固体四硫磺酸钠煌绿培养基用于鸡肉中沙门菌的检测

目的使用改良半固体四硫磺酸钠煌绿(MSTT)培养基对鸡肉样品中的沙门菌进行初筛,作为附加步骤对ISO 6579.2002方法进行改良,以节约人力物力和时间。方法将MSTT培养基经虹吸法装入玻璃毛细管,插入预增菌液或增菌液类液体培养基,使半固体培养基和液体培养基相结合,预增菌或增菌过程同动力增菌过程同步进行。此外对使用MSTT培养基改良ISO 6579.2002方法分为纯菌种组和自然鸡肉样品组分别试验,并对结果进行评估。结果应用改良ISO 6579.2002方法,沙门菌株检出率纯菌种组为98%(126/129),自然污染的沙门菌阳性鸡肉样品检出率为92%(35/38),而原ISO 6579.2002方法对自然污染的沙门菌阳性鸡肉样品检出率为87%(33/38),低于改良法;与原方法相比,72%(264/367)的阴性样品不需要进一步分离和鉴定试验。结论应用MSTT培养基改良后的ISO 6579.2002方法能够应用于鸡肉中沙门菌的检测,且优势明显。

Cronobacter新属(阪崎肠杆菌)检测分型方法的研究进展

本文对Cronobacter新属的以VRBG琼脂、NA+α-MUG、DFI、ESIA或ESPM等选择性分离培养基进行分离培养的传统培养方法和基于16SrRNA序列、基因组重复序列、16S-23SrDNA ITS、tRNA-glu和23SrDNA之间DNA序列、gluA、rpsU与dnaG及ompA等目标区域的分子生物学检测分型方法进行了综述。

应用PFGE、MLST和MALDI-TOF-MS方法对克罗诺杆菌分型的研究

目的分别应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MLST)和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对克罗诺杆菌分型并进行比较分析。方法不同来源的克罗诺杆菌82株分别用PFGE、MLST和MALDI-TOF-MS进行分型,采用BioNumerics和SARAMIS软件进行聚类分析。结果 82株克罗诺杆菌用PFGE法经XbaⅠ和SpeⅠ酶切后得到81个指纹图谱,相似度55.5%～100%;MLST法得到68个ST型、5个大群分别对应5个种;MALDI-TOF-MS法得到82张不同的图谱,相似度为61%～89%,分群结果同MLST法一致。结论 MALDI-TOF-MS法的鉴定速度和分辨率较高,可反映出PFGE和MLST不能分辨出的细微差别,但对菌株鉴定的准确性易受图谱库容量和其他因素影响;PFGE能区分不同菌株,但不能对菌株进行种的鉴定;MLST法能准确鉴定不同种的克罗诺杆菌,但其分型分辨率低于PFGE法,且同样存在方法繁琐耗时等缺点。因此可通过完善MALDI-TOF-MS图谱数据库以提高对克罗诺杆菌鉴定的准确性,同时联合PFGE和MLST法以提高对克罗诺杆菌快速鉴定并准确分型的能力。

一起疑似食物中毒暴发事件的病原学分析

目的 阐明一起疑似由蜡样芽胞杆菌污染奶源引起的食物中毒暴发事件的病原学特征,为查明暴发源头和临床治疗提供依据。方法 对198例患儿进行流行病学调查,采集可疑奶制品和病例标本,进行菌株分离和鉴定。分离到的蜡样芽胞杆菌菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型、全基因组测序以及毒力基因分析。采用微量肉汤稀释法进行药物敏感性测定。结果 流行病学调查显示198例患儿均有不同程度的腹痛、腹泻和发热等症状,符合食源性疾病暴发定义。共分离到25株蜡样芽胞杆菌(5株来自奶制品,20株分离自病例标本)。PFGE分型分析显示,13株病例标本菌株与5株奶源性菌株条带具有高度相似性。25株蜡样芽胞杆菌对环丙沙星、万古霉素、四环素、氯霉素、庆大霉素和亚胺培南均敏感,但对氨苄西林、青霉素完全耐药。结论 该起食物中毒暴发事件疑似由蜡样芽胞杆菌污染引起,应加大食品安全知识的宣传普及,提高食品安全意识,预防类似事件的发生。

宏基因组学技术对1起志贺菌暴发的病原学研究

目的采用宏基因组学联合其他检测技术对1起志贺菌暴发事件进行病原学分析,为探索快速精准的暴发病原检测提供依据。方法对采集的8份粪便样本进行核酸提取,进行宏基因组学二代测序,用CLC Workbench软件进行质控和生物信息学分析,对样本进行食源性致病菌多重聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测、细菌分离培养、脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分子分型、全基因组SNP(whole genome single nucleotide polymorphism,wgSNP)聚类分析。结果8份粪便样本经宏基因组学测序分析均检出宋内志贺菌,与分离培养结果相一致。多重PCR检出7份粪便样本志贺菌条带呈阳性,均未检出其他病原。经PFGE和wgSNP聚类分析后可知此次暴发事件是由宋内志贺菌引起。结论宏基因组学技术可用于食源性疾病暴发事件病原调查,与传统检测方法相比具有独特的优势。

米氏克雷伯菌合并白色念珠菌感染致不明原因发热一例并文献复习

目的:探讨联合应用宏基因组学和培养组学技术对米氏克雷伯菌合并白色念珠菌感染所致不明原因发热患者的病原检测、分离和治疗措施。方法:分析济南市疾病预防控制中心联合山东大学齐鲁医院对2019年7月1日收治的1例米氏克雷伯菌合并白色念珠菌感染导致的不明原因发热患者的诊疗过程,并复习相关文献。结果:该患者主动脉层术后持续间断发热,经抗真菌治疗后效果不佳,经宏基因组学测序联合培养组学技术分离病原提示疑似米氏克雷伯菌合并白色念珠菌感染,调整使用头孢哌酮钠舒巴坦钠联合卡泊芬净抗感染治疗后,患者发热症状消失,实验室指标恢复正常后出院。结论:米氏克雷伯菌感染较少见,且易误诊为其他克雷伯菌,应用宏基因组学联合培养组学技术可尽早明确该病原所致感染,以进行针对性的抗感染治疗。