纤维素酶的二步分离纯化新工艺

以普通定性滤纸为底物 ,经碱处理后 ,研究其对纤维素酶的亲和吸附作用。结果表明 ,普通定性滤纸对纤维素酶具有比较强的特异性吸附作用 ,能够从粗酶液中分离出纤维素酶 ,再经POROS 2 0HQ阴离子交换柱纯化后即可得到电泳纯的纤维素酶。该法大大简化了传统的纤维素酶纯化工艺 ,所得的纤维素酶活力极高 ,比活达 35 0U/mg以上 ,滤纸一步吸附后纤维素酶的纯化倍数为 9 5 5 ,活性回收率在 10 %左右。纯化后的纤维素酶为内切 β 葡聚糖酶 ,相对分子质量为 6 0 0 0 0 ,最佳 pH为 4 0 ,最佳温度为 70℃。

阴阳离子交换色谱串联分离纯化苦瓜籽核糖体失活蛋白

将阴阳离子交换色谱柱在灌注色谱工作站上串联,使苦瓜籽粗提液中未被阴离子色谱柱吸附的蛋白质直接在阳离子色谱柱上吸附,用盐线性梯度洗脱从阳离子色谱柱上分离出两个具有抗真菌活性的蛋白。两个抗真菌蛋白经鉴定都达到了电泳纯,相对分子质量均为30000左右,N 端氨基酸序列分别为DVSFRLSGADPRSYGMFI与DVNFDLSTATAK,表明所得到的两种蛋白为苦瓜籽中的2个Ⅰ型核糖体失活蛋白α 苦瓜素(α MMC)和β 苦瓜素(β MMC)。抗菌实验表明,α MMC对香蕉枯萎菌和果腐霉菌均具有较强的抑制作用,β MMC对果腐霉菌有较强的抑制作用,而α MMC和β MMC对白绢菌的抑制活性均不明显。采用串联色谱,α MMC和β MMC的质量回收率分别为13 8%和8 0%。

采用高效离子交换色谱分离分析动物肠道菌群方法初探

报道了利用高效离子交换色谱直接分离动物粪便肠道菌群的有关研究结果.人与兔的粪便样品稀释后经离心分离岀细菌,通过DEAE弱阴离子交换色谱(30cm×2cmi.d)进一步除去杂物,将所得细菌的完整细胞样品直接上样高效液相阴离子交换色谱进行分离.色谱柱采用TSKgelSuperQ-TOYOPEARL650C强阴离子交换树脂,平衡缓冲液为0.02mol/L的哌嗪-HCl缓冲液(pH8.0),吸附于色谱柱上的细菌完整细胞用0～1mol/LNaCl线性梯度进行洗脱,洗岀液由260nm紫外吸收与光散射强度检测器检测.人与兔粪便细菌样品分别获得8个与5个组分,经镜检与培养实验确认为细菌,并且光散射仪洗脱峰峰面积同细菌计数结果具有线性相关性.实验表明,高效离子交换色谱能够应用于肠道菌群这样的复杂细菌体系的分离分析.

高效离子交换色谱法研究植酸酶对小猪肠道微生物的影响

植酸酶作为一种饲料酶制剂,可以通过催化水解将磷酸盐从植酸中释放出来,因而可以提高饲料中磷的利用率,降低环境的磷污染,但是,植酸酶作为一种饲料酶制剂,是否对动物肠道微生物产生影响,并通过改变肠道菌群的生理平衡来影响动物的消化与吸收,这一问题尚没有明确的答案。本研究植酸酶在仔猪的玉米-豆粕型日粮中添加植酸酶,并利用色谱的手段对对照组和试验组小猪肠道微生物色谱行为进行表征,并分析了各菌群的糖苷酶及蛋白酶的活力分布,发现添加植酸酶可以促进糖苷酶分泌型细菌的生长,这一数据对植酸酶在体内的作用机理提出了新的思路。

大黄鱼源腐败菌的黏附特性与生物膜特性分析

以分离纯化自冰鲜大黄鱼的3株希瓦氏菌(MA1-5、MA1-7、MA1-13)和3株假单胞菌(R3-1、R3-2、R3-5)为供试菌株,研究鱼源腐败菌的表面疏水性、自凝聚能力、生物膜和腐败菌对鱼体(鱼肠、鱼鳃和体表)黏液的黏附能力,探明黏附特性与不同部位黏附能力的相关性,并进一步研究生物膜在不同因素下的形成特性。研究表明,希瓦氏菌具有更强的表面疏水性和自凝聚能力,对鱼体黏液的黏附性强,并具有更强的生物膜形成能力。主成分分析和聚类分析说明黏附能力在属间存在差异性,属内具有相似性。腐败菌对鱼肠和鱼鳃的黏附能力与自凝聚能力和生物膜形成能力具有较高的相关性,对体表黏附能力只与生物膜形成能力有关。腐败菌生物膜的形成受初始菌浓度、培养时间、温度、pH值、盐含量等多种环境因素影响。希瓦氏菌在初始菌浓度106 CFU/mL以上、37℃、pH 7~8、0.8%NaCl时形成的生物膜量最多;生物膜在12~24 h期间快速形成,并在36 h达到峰值后,随培养时间延长而逐渐下降。经鱼体黏液包被后,生物膜形成量受到显著影响,鱼鳃黏液促进生物膜形成,鱼肠黏液抑制生物膜形成。

枯草芽孢杆菌BS08复合抗热保护剂的工艺配方优化

旨在生产高活菌数、高稳定性的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BS08微生态活菌制剂。采用喷雾干燥技术,通过单因素实验从蛋白质类、碳水化合物类、亲水胶体类保护剂中筛选较优壁材进行复配联用,并以菌粉活菌数和稳定性为指标,研究抗热保护剂的包埋顺序对枯草芽孢杆菌保护效果的影响;最后,采用响应面优化技术对复合抗热保护剂配方进行了优化。结果表明,以明胶-阿拉伯胶-海藻糖的从内而外的包埋顺序复配成保护剂,能有效保护微胶囊中的枯草芽孢杆菌,且通过稳定性评估,产品在4℃环境中贮藏1年,预计活菌数可保持在10以上,数量级不变。经过响应面的优化,当明胶质量分数为26%,阿拉伯胶质量分数为24%,海藻糖质量分数为24%,枯草芽孢杆菌微生态制剂的活菌数最高可达5.98×10CFU/g。

腐竹副产物豆渣固态发酵生产益生菌工艺优化

研究旨在将低值的腐竹副产物豆渣转化为富含益生菌的生物发酵饲料。以腐竹生产过程的副产物——豆渣为固态发酵主培养基,通过复配其他辅助组分后,接种枯草芽孢杆菌进行固态发酵。实验通过单因素和正交实验研究了豆渣麸皮比、接种量、发酵pH值、发酵温度、发酵时间等指标对发酵效果的影响。结果表明:最佳复配比例为豆渣:麸皮为8:2,枯草芽孢杆菌发酵液接种量为15%,发酵温度为35℃,发酵初始pH值为6.8,发酵时间为3d。发酵后的豆渣营养价值和风味品质得到一定程度的提高,活性芽孢数达1.25×10^10cfu/g,胰蛋白酶抑制因子活性极显著下降(P<0.01)。

红曲废渣发酵制备枯草芽孢杆菌微生态制剂

本研究通过单因素和响应面分析优化红曲废渣制备枯草芽孢杆菌微生态制剂的条件,对发酵过程中可溶性糖和可溶性蛋白质的含量进行追踪,以分析菌体增长的限制因素,并对该微生态制剂的储藏稳定性和体外抗氧化性进行评估。结果表明,当发酵条件为:红曲废渣浓度100 g/L,枯草芽孢杆菌接种量为10%(5 lg CFU/mL),摇床转速为220 r/min时,在37℃条件下发酵48 h可获得枯草芽孢杆菌最高产量为(9.3±0.3)lg CFU/mL。红曲废渣中可溶性葡萄糖的含量是限制枯草芽孢杆菌生长的主要因素。当可溶性糖含量较低时,枯草芽孢杆菌的生长基本停止。根据加速保存实验可计算出微生态制剂在20℃下保存3个月后的活菌数为8.7 lg CFU/mL,高于应用标准。微生态制剂具有较强的抗氧化性,其DPPH自由基清除能力为0.25 mg/mL(IC_(50)),羟自由基的清除能力为0.69 mg/mL(IC_(50))。本研究证明红曲废渣可作为原料制备枯草芽孢杆菌微生态制剂,为微生物发酵废渣的可持续性绿色加工提供了实践依据。

不同种类微生物组合对豆粕固态发酵的差异化研究

本试验研究了三种微生物组合方案对豆粕固态发酵后组分变化的差异．分别是A、枯草芽孢杆菌5×10^8CFU／g，酿酒酵母和嗜酸乳杆菌各2×10^7CFU／g；B、酿酒酵母5×10^8CFU／g，枯草芽孢杆菌和嗜酸乳杆菌各2×10^8CFU／g；C、嗜酸乳杆菌3×10^8CFU／g，酿酒酵母和枯草芽孢杆菌各2×10’CFU／g，研究的主要目的是考察不同种类微生物对豆粕固态发酵之后功能性小分子蛋白的含量差异。结果表明，方案A的豆粕发酵程度最高．小分子含量最高，可达8．75％，并极大提高了必需氨基酸的含量。尤其是赖氨酸和蛋氨酸分别提高24．18％和42．98％，同时，方案A在降解植酸方面效果也最为明显，植酸降解率为75．86％。本试验表明，在进行豆粕发酵时，应选择以芽孢为主的复合微生物菌株，并适当复配一定量的乳酸菌类和酵母类，可使发酵豆粕营养价值获得大幅提升。

高稳定性乳酸菌饲料制剂生产工艺及其应用效果的研究

采用喷雾干燥技术生产乳酸菌活菌饲料制剂,并对产品的应用效果进行研究。首先,通过单因素实验和正交实验确定壁材和喷雾干燥的最佳工艺条件;然后,对产品的活菌数和热稳定性进行研究;最后,以断奶仔猪为研究对象,考察产品的应用效果。结果发现,阿拉伯胶和麦芽糊精的组合作为壁材,包埋率可达72.18%的最佳包埋保护效果;在进口温度160℃、进料速度400 ml/h的条件下喷雾干燥,乳酸菌制剂的活菌数可达8.69logCFU/g,且产品在室温(25℃)环境中贮藏30d,活菌数可保持在6logCFU/g以上;喂食乳酸菌活菌饲料制剂4周,断奶仔猪的腹泻率和死亡率相比于对照组分别下降了57.55%和40.03%,肠道中乳酸菌数量增加了14.23%,大肠杆菌数量降低了11.25%。

复合菌固态发酵木薯渣的工艺探索

本研究以木薯渣为主要原料进行固态发酵。以嗜酸乳杆菌、酿酒酵母和地衣芽孢杆菌三种益生菌作为复合发酵菌株。首先通过单因素试验。确定了最佳的发酵工艺为：葡萄糖0．5％、硫酸铵2．0％、含水量50％、发酵温度32℃。随后考察了三株益生菌的不同组合对木薯渣发酵前后粗蛋白、可溶性蛋白、粗纤维、总酸含量的变化，确定了最佳的组合方案。本研究中木薯渣经过复合菌固态发酵后。按干物质计算，粗纤维含量为17．21％，降低了12．15％；总蛋白含量为20．65％，提高了13．59％，其中可溶性蛋白含量1．63％，较原来提高38．14％：总酸含量达到3．64％，益生菌总数超过20亿CFU／g以上。发酵后的木薯渣营养价值更高，适口性更好，有助于在畜禽养殖中广泛应用。

发酵木薯渣对生长猪生产性能、氮平衡及其肠道微生物菌群的影响

本试验考察了发酵木薯渣对生长猪生产性能、氮平衡及其肠道微生物菌群的影响。试验选取300头体重在40千克左右的杜长大三元杂交生长猪，随机分为4个组，分别饲喂对照组日粮、A组（发酵木薯渣替代20％豆粕来源的蛋白质组）、B组（发酵木薯渣替代30％豆粕来源的蛋白质组）和C组（发酵木薯渣替代40％豆粕来源的蛋白质组）。结果表明：A组和B组猪的生产性能优于对照组，C组生产性能低于对照组。A组的可消化氮比对照组高17．4％，差异显著（P〈0．05），沉积氮、氮表观消化率和氮生物学价值均高于对照组。B组的可消化氮沉积氮略高于对照组6．3％和6．8％，氮排放减少了13．7％。C组在沉积氮方面比对照组低了18．6％．可消化氮显著低于对照组12．6％（P〈0．05），氮排放高了3．3％。在空肠中，各组的细菌数差异不显著（P〉0．05）。在回肠中，双歧杆菌和乳酸菌数量也没有明显差异，但对照组的大肠杆菌数高于其他各组，且随着替代量的增加，大肠杆菌数有降低的趋势，盲肠中各组的双歧杆菌和乳酸菌数量也没有明显差异，但对照组的大肠杆菌数高于其他各组，且随着发酵产品添加量的提高，大肠杆菌数有降低的趋势。综上所述，在使用发酵木薯渣替代30％豆粕来源的蛋白质添加量时，可以提高生长猪的生产性能、提高氮利用率和降低肠道大肠杆菌数量。

新型嗜硫膜亲和纯化鸡传染性法式囊卵黄抗体研究

以普通定性滤纸为基质 ,经碱处理 ,二乙烯砜活化和巯基乙醇偶联后 ,制备成嗜硫膜 (thiophilic -mem brane ,TM) ,考察了其对鸡传染性法式囊 (IBD)卵黄抗体 (IgY)的特异性亲和吸附作用 .卵黄经醋酸钠 -醋酸缓冲液 10倍稀释于 4℃自然沉降脱脂后 ,所得上清液 (WSF)经嗜硫膜亲和吸附分离 ,可一步纯化得到SDS-PAGE电泳纯的卵黄抗体 .IgY在嗜硫膜上的吸附速度随着流速的增加而增大 ,吸附量则随着流速的增加而减少 .

苦瓜籽中一种抗胰蛋白肽的分离及抗真菌作用观察

利用凝胶过滤层析Sephadex G-75、强阳离子交换色谱SP-650M,从苦瓜籽中分离纯化出一种活性多肽.该多肽在Tricine-SDS-PAGE上显示为单一的谱带,分子量约为6.8 kDa.在经还原剂二硫苏糖醇(DTT)处理后的电泳结果表明该多肽不含有分子间的二硫键.此多肽是一种胰蛋白酶抑制剂,同时具有抗植物致病菌活性,是一种具有双功能作用的多肽.

苦瓜籽中抗真菌蛋白MAP13的分离纯化与表征

将苦瓜籽粗提液分别经阴离子色谱柱、阳离子色谱柱交换后,得到一个具有抗真菌活性的蛋白MAP13.该蛋白经鉴定达到电泳纯,相对分子量为12.7 kDa.经还原剂处理后,电泳结果表明该蛋白由分子量分别为7和6 kDa的两个亚基组成,亚基之间通过二硫键连接.体外抑菌实验表明该蛋白对苹果轮纹病菌、瓜果腐霉病菌和棉花枯萎病菌具有较强的抑制作用.

固态发酵橄榄渣制备枯草芽孢杆菌微生态制剂研究

以橄榄汁生产过程的副产物橄榄渣为培养基,添加尿素作为氮源后,接种枯草芽孢杆菌进行固态发酵.通过单因素及正交试验研究了发酵温度、料液比、发酵时间和接种量对菌落数的影响,结果表明,最佳发酵条件为:温度36℃,料液比1∶2,发酵时间48 h,接种量6%.在此条件下,橄榄渣中的总膳食纤维含量由81.5%下降至74.5%,真蛋白含量由4.52%提高至5.06%,单宁含量由0.14%下降至0.04%,提高了微生态制剂的营养价值和橄榄渣的附加值.