甲醛致淋巴细胞DNA交联作用的体内外实验研究

目的 研究甲醛对小鼠胸腺淋巴细胞DNA的交联作用 ,探讨甲醛的遗传毒性作用及机制。方法 分别以γ射线及紫外线作为标准断裂剂 ,用单细胞凝胶电泳技术对不同浓度甲醛诱导的小鼠胸腺淋巴细胞DNA交联作用进行体内及体外实验研究。结果 体内和体外研究均显示 ,甲醛可以引起小鼠胸腺淋巴细胞DNA的交联作用 ;体外研究还发现 ,随着甲醛浓度的增加 ,交联作用加强 ,彗星细胞率分别为10 0 % ,76 % ,2 % ,平均尾长分别为 15 32 ,9 79,5 0 2 μm。结论 甲醛是一种DNA交联剂 ,具有诱导小鼠胸腺淋巴细胞DNA交联的作用。

氯化镉的体外毒性及锌的拮抗作用

目的 观察镉与锌体外对中国仓鼠肺成纤维细胞 (V79)增殖的影响 ,初步探讨镉毒性机制。方法 采用MTT法及3 H TdR掺入法 ,研究不同浓度氯化镉 (CdCl2 )单独或与生理浓度氯化锌 (ZnCl2 ,10 μmol/L)同时染毒对V79细胞增殖的影响 ,并采用等离子体光谱仪测定细胞内Cd2 + 、Zn2 + 含量。结果 CdCl2 对于V79细胞的增殖有抑制作用 ,且呈剂量依赖性。采用MTT法和3 H TdR掺入法所得CdCl2 染毒2 4h后 5 0 %抑制浓度 (IC50 )分别为 13 73μmol/L和 13 6 0 μmol/L。随着CdCl2 染毒浓度的增加 ,细胞内Cd2 + 含量也增加。而同时给予锌则对镉的增殖抑制效应在一定程度上具有明显的拮抗作用 ,锌可使细胞内Cd2 + 含量降低。结论 在本实验条件下 ,CdCl2 对V79细胞增殖具有抑制作用 。

苯与甲醛致小鼠睾丸细胞DNA损伤联合作用

目的探讨苯与甲醛致小鼠睾丸细胞DNA联合损伤效应。方法采用单细胞凝胶电泳方法,分别检测苯染毒(剂量为50,200,800 mg/kg)、甲醛染毒(剂量分别为0.3,1.2,4.8 mg/kg)和苯+甲醛复合染毒后小鼠睾丸细胞DNA损伤情况。结果在受试剂量范围内,小鼠睾丸细胞彗星率随苯或甲醛染毒剂量增加而增加(P<0.01),其彗星尾长随苯染毒剂量增加而延长(P<0.01),随甲醛染毒剂量增加而缩短,尤其高甲醛染毒组(P<0.01);复合染毒组中彗星尾长随联合染毒中苯染毒剂量增加而延长(P<0.01),随联合染毒中甲醛染毒剂量增加而缩短(P<0.01)。苯+甲醛联合作用经析因素分析存在相加作用(P<0.01)。结论苯和甲醛均能彼此增强各自所致的睾丸细胞DNA损伤效应。

甲醛致V79细胞DNA交联作用的体外研究

目的研究甲醛对V79细胞DNA的交联作用,探讨甲醛的基因毒作用及可能的形成机制。方法中国仓鼠肺细胞(V79)分别暴露于浓度为75,150,300,600,1200μmol/L的甲醛溶液中1,2,4h,以紫外线照射作为标准断裂剂,用单细胞凝胶电泳技术对不同浓度、不同暴露时间甲醛诱导的V79细胞DNA-交联作用进行体外实验。结果在本研究所用的剂量范围内,除75μmol/L组外,其它4个浓度组3个染毒时间点甲醛均可引起显著的V79细胞DNA的交联作用,彗星尾长和彗星细胞率显著低于紫外线照射的对照组(P<0.01),随着甲醛浓度的增加,交联作用加强,彗星尾长存在明显剂量效应关系(P<0.01)。且细胞暴露在甲醛中4,2h;150,300,600μmol/L浓度组彗星尾长和彗星细胞率显著低于暴露于1h的相应浓度组(P<0.01)。结论甲醛是一种DNA交联剂,具有诱导V79细胞DNA交联的作用,并有明显的剂量、时间效应关系。

氢醌致V79细胞DNA损伤的体外实验研究

目的研究苯的主要代谢产物氢醌(HQ)对V79细胞DNA的损伤作用。方法分别用0.15,0.30,0.60,1.20,2.40mmol/L的HQ染毒V79细胞2h,用单细胞凝胶电泳方法检测DNA损伤情况。结果在本研究所用剂量范围内,HQ可引起V79细胞DNA的明显损伤,低剂量组(0.15mmol/L)彗星细胞率为69%,彗星尾长(42.20±3.18)μm,高剂量组(2.40mmol/L)彗星细胞率为91%,彗星尾长(49.05±4.31)μm,但无明显的剂量-效应关系。结论HQ可致V79细胞DNA损伤,产生遗传毒性作用。

甲醛和苯联合染毒对小鼠淋巴细胞DNA、RNA合成的影响

目的研究甲醛和苯联合染毒对小鼠脾脏、胸腺淋巴细胞DNA和RNA合成的影响。方法采用3H胸腺嘧啶(3HTdR)、14C尿嘧啶(14CUR)掺入技术,检测不同剂量甲醛和苯经腹腔注射联合染毒对小鼠脾脏、胸腺淋巴细胞DNA和RNA合成的影响。结果甲醛和苯联合染毒时,小鼠脾脏、胸腺淋巴细胞3HTdR和14CURdpm相对百分数显著低于甲醛、苯单独染毒时3HTdR和14CURdpm相对百分数(P<0.05)。结论甲醛和苯对小鼠脾脏、胸腺淋巴细胞DNA和RNA合成影响有联合作用。

三氧化二砷诱导人脑胶质瘤细胞抑制与活性氧水平的关系

目的研究三氧化二砷(As_2O_3)对人脑胶质瘤SHG44细胞活性氧浓度及60Coγ射线照射联合As_2O_3对细胞DNA损伤中的影响。方法用2,7-二氢二氯荧光素(DCFH)标记细胞内活性氧(ROS),激光共聚焦显微镜扫描检测细胞内荧光强度;用单细胞凝胶电泳法检测DNA彗星尾长及尾部DNA百分含量,比较As_2O_3、γ线照射单独及联合作用对细胞DNA的损伤程度。结果(1)As_2O_3可明显提高SHG44细胞内ROS水平,其ROS水平的改变随As2O3作用浓度的增加而升高。(2)60Coγ射线与As_2O_3联合作用诱导SHG44细胞DNA的损伤,其损伤程度随照射剂量的增加彗星尾长、尾部DNA百分比递增。两者联合作用后彗星尾长、尾部DNA百分比分别大于相应剂量的单独照射和As2O3组(P<0.01)。结论As2O3可明显抑制SHG44细胞的增殖,增强细胞的辐射敏感性,其抑制机制与诱导细胞内ROS水平提高具有相关性。

氯化镉对DNA修复的影响及机制的体外研究

目的通过体外实验,了解氯化镉(CdCl2)对过氧化氢(H2O2)引起的V79细胞DNA损伤后修复过程的影响及其相关机制。方法采用MTT法了解CdCl2对于V79细胞的毒性;以单细胞凝胶电泳实验分析软件中的几个评价指标,同时观察无细胞毒性浓度的CdCl2对H2O2所引起的V79细胞DNA损伤后修复所产生的影响;以生理浓度的氯化锌(ZnCl2)作为拮抗剂,与CdCl2同时作用后,观察对DNA修复影响的变化。结果MTT实验中,CdCl2对V79细胞的毒性随染毒浓度增加而增强,呈线性关系;在碱性单细胞凝胶电泳实验中,无细胞毒性浓度的CdCl2未明显增强H2O2V79细胞DNA的损伤,却明显地抑制了由H2O2所致的V79细胞DNA损伤后的修复过程,并以0.1μmol/L CdCl2浓度最为明显;生理浓度的锌可有效拮抗CdCl2的DNA修复抑制作用。结论在本实验条件下,无细胞毒性浓度的CdCl2对H2O2的DNA损伤效应无协同作用,却明显抑制DNA损伤后的修复过程;锌在一定程度上可以拮抗CdCl2的DNA修复抑制效应。

氯化镉对V79细胞hprt基因位点突变频率的影响及锌的作用

目的了解氯化镉(CdCl2)对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79细胞)hprt基因位点突变频率的影响及锌的拮抗作用,探讨镉的遗传毒性机制。方法采用克隆形成法了解CdCl2对V79细胞的慢性毒性作用;在此基础上采用克隆法研究不同浓度CdCl2对V79细胞hprt基因位点突变频率的影响,并采用生理浓度的氯化锌(ZnCl2)与CdCl2同时作用后,观察锌对于镉致突变效应的影响。同时观察不同浓度CdCl2预先染毒24 h后,对过氧化氢(H2O2)所致hprt基因位点突变效应的影响及锌的拮抗作用。结果克隆形成实验中,CdCl2对V79细胞的毒性随染毒浓度增加而增高,呈线性关系;CdCl2可以引起V79细胞hprt基因位点突变频率增加,在0.1和8μmol/L染毒浓度处分别有两个峰值。CdCl2与H2O2联合作用表现为协同效应。ZnCl2可以拮抗这种效应。结论在本实验条件下,CdCl2可以导致V79细胞hprt基因位点突变,并可使其他致突变物的致突变性增强,而锌可以拮抗此效应。

石杉碱甲对乙酰胆碱酯酶活性的抑制作用

目的研究石杉碱甲抑制乙酰胆碱酯酶活性的基本特点，为将石杉碱甲用于预防有机磷神经毒剂中毒提供依据。方法以浓度为0，0．2，0．5，0．7，1．0，1．5，2．0，3．0，5．0，10，0mg／kg的石杉碱甲给大鼠灌胃染毒，求得石杉碱甲对大鼠全血、前皮质、小脑、海马乙酰胆碱酯酶活性抑制的剂量～效应曲线；以2mg／kg的石杉碱甲给大鼠灌胃，分别于染毒后0．5，1，2，4，8，12，24h测定乙酰胆碱酯酶活力，求得乙酰胆碱酯酶抑制的时间-效应曲线。结果染毒30min后乙酰胆碱酯酶活性抑制达到高峰，24h后全血及脑组织乙酰胆碱酯酶活力基本恢复正常；0．5～3．0mg／kg石杉碱甲染毒后可获得较合适的预防有机磷神经毒剂中毒的乙酰胆碱酯酶抑制率。绪论石杉碱甲为可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂，可以通过血脑屏障，可能对有机磷类神经毒剂中毒具有预防作用。

彗星试验检测甲醛对V79细胞的DNA交联作用

目的 研究甲醛对V79细胞DNA的交联作用 ,探讨甲醛的遗传毒性及机制。方法 以紫外线照射作为标准断裂剂 ,用彗星试验检测不同浓度、不同暴露时间甲醛诱导的V79细胞DNA的交联作用。结果 除 75 μmol/L组外 ,在其它 4个浓度组、3个染毒时间点 ,甲醛均可引起显著的DNA交联作用 ,彗星尾长和彗星细胞率显著低于仅紫外线照射的对照组 (P <0 0 1) ,且彗星尾长具有明显剂量 -反应关系 (P <0 0 1)。细胞暴露在甲醛中 2、4h ,15 0、3 0 0、60 0 μmol/L浓度组彗星尾长和彗星细胞率显著低于暴露在 1h的 (P <0 0 1)。结论 甲醛是一种DNA交联剂 ,具有诱导V79细胞DNA交联的作用 。

氯化镉所致DNA损伤及锌的拮抗效应的研究

目的通过体外实验,了解氯化镉(CdCl2)对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79细胞)的直接DNA损伤作用及锌的拮抗作用,初步探讨镉的遗传毒性机制及预防措施。方法采用甲基四唑法(MTT法)了解CdCl2对于V79细胞的毒性,通过碱性单细胞凝胶电泳常用的几个评价指标,研究CdCl2体外对于V79细胞DNA的断裂损伤,并采用生理浓度ZnCl2(10μmol/L)加以拮抗。结果MTT试验中,CdCl2对于V79细胞的毒性随染毒剂量增加而增高,呈线性关系,线性方程为:y=-0.009 4x+94.472;在碱性单细胞凝胶电泳中,CdCl2单独染毒,随着染毒剂量增加,DNA损伤加重,而锌具有明显的拮抗作用。结论本实验条件下,CdCl2能造成V79细胞DNA损伤,生理浓度的锌可以拮抗镉的DNA损伤效应。

醋酸铅体外诱发人外周血淋巴细胞HPRT基因位点突变的研究

目的 了解醋酸铅对人外周血淋巴细胞HPRT基因位点的影响 ,以探讨铅的致突变性。方法 采用多核细胞法体外研究醋酸铅对人外周血淋巴细胞HPRT基因位点的影响及突变频率。结果 0 2 5mmol/L醋酸铅即可诱发人外周血淋巴细胞HPRT基因位点突变 ,且突变频率随着染毒浓度的增加而升高 ,突变频率Y (1 0 -3 )与醋酸铅浓度C (mmol/L)之间存在一定的剂量 -效应关系 ,直线方程分别为 :Y =1 0 5 6 6 +0 1 6 6 1C (r=0 95 82 )和Y =1 0 76 2 +0 1 987C (r =0 94 34)。结论 在一定条件下 ,醋酸铅对人外周血淋巴细胞HPRT基因位点及突变频率有影响 。

低浓度氯化汞对小鼠脾淋巴细胞DNA损伤及修复的研究

目的 探讨DNA损伤在汞免疫毒理学中的意义。方法 常规制备小鼠脾淋巴细胞 ,用 0 5 ,2 5 ,5 0 ,10 0和 2 0 0 μmol/L氯化汞体外染毒 1 5h ,采用单细胞凝胶电泳 (singlecellgelelectrophoresis,SCGE)试验研究不同浓度氯化汞对小鼠脾淋巴细胞DNA损伤及其修复作用。结果 各染毒组淋巴细胞DNA平均彗星细胞尾长明显增长 ,与阴性对照组比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1) ,在实验浓度范围内存在明显的剂量 -效应关系 (P <0 0 1) ;5 ,2 0 μmol/L两个浓度组去除氯化汞后孵育 15min ,DNA损伤开始修复 ,12 0min时基本接近正常。结论 低浓度氯化汞能导致小鼠脾淋巴细胞DNA损伤 。

石杉碱甲预防有机磷神经毒剂中毒的研究

目的研究石杉碱甲预防有机磷神经毒剂中毒的效果,确定最佳预防用药剂量。方法分别以0.5,1.0,2.0,5.0 mg/kg的石杉碱甲(H)给大鼠预防用药,30 min后以2.7 mg/kg的对氧磷(P)进行染毒,观察各组动物的死亡时间、死亡率、染毒后不同时间的胆碱能中毒症状,并与对照组比较;分别以0.5,1.0,2.0,3.0 mg/kg的石杉碱甲给大鼠预防用药,30 min后给予3.6 mg/kg的对氧磷进行染毒,观察各组死亡时间、死亡率,并与对照组比较。结果预防给予1.0 mg/kg石杉碱甲,1.0 mgH+2.7 mgP组无论是对氧磷染毒后0.5 h或1.0 h,动物的胆碱能中毒症状均最轻,不自主运动(IM)及流涎、流泪、排尿、排便(SLUD)评分均低于对照组(P<0.05),动物死亡率为14.28%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);1.0 mgH+3.6 mgP组动物平均存活时间最长(22.8±13.7)min,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论石杉碱甲可有效地预防有机磷神经毒剂中毒;1.0 mg/kg是石杉碱甲预防大鼠有机磷神经毒剂中毒的最佳剂量。

甲醛对V79细胞DNA、RNA合成影响的体外实验研究

目的 研究甲醛对V79细胞DNA和RNA的损伤作用 ,探讨甲醛遗传毒性的分子机制。方法 中国仓鼠肺细胞 (V79)分别暴露于浓度为 75 ,15 0 ,30 0 ,6 0 0 μmol/L的甲醛中 ,1h、2h、4h ,采用3 H -胸腺嘧啶核苷 ( 3 H -TdR)、14 C -尿嘧啶核苷 ( 14 C UR)掺入技术检测甲醛致V79细胞DNA和RNA损伤情况。结果 所有 4个浓度组甲醛均明显影响细胞DNA和RNA的合成 ,3 H TdR和14 C UR掺入计数每分衰变数 (dpm值 )显著低于对照组 (P <0 .0 1) ,并有明显的剂量 -效应关系 (P <0 .0 1)。细胞暴露在甲醛中 4h ,各浓度组3 H TdR和14 C UR掺入dpm值显著低于暴露于 1h和 2h各浓度组的dpm值 (P <0 .0 1)。 结论 甲醛可以影响V79细胞DNA和RNA合成 。

甲醛对CHL细胞DNA和RNA合成影响的体外实验研究

目的 研究甲醛对中国仓鼠肺细胞 (CHL细胞 )DNA和RNA的损伤作用 ,探讨甲醛遗传毒性的分子机制。方法 CHL细胞分别暴露于浓度为 75 ,15 0 ,30 0 ,6 0 0 μmol/L的甲醛中 1,2 ,4h ,采用3 H-胸腺嘧啶 (3 H TdR)、 14 C -尿嘧啶 (14 C UR)掺入技术 ,检测甲醛对CHL细胞的DNA和RNA合成的影响。结果 所有 4个浓度组甲醛均明显影响CHL细胞DNA和RNA的合成 ,3 H TdR和14 C UR掺入计数dpm值显著低于对照组 (P <0 0 1) ,并有明显的剂量 -反应关系 (P <0 0 1)。CHL细胞暴露在甲醛中 4h ,各浓度组3 H TdR和14 C UR掺入dpm值显著低于暴露于 1h和 2h的各浓度组 (P <0 0 1)。结论 甲醛可以影响CHL细胞DNA和RNA合成 ,这对进一步研究甲醛遗传毒性的分子机制有重要意义。

石杉碱甲与吡啶斯的明预防有机磷神经毒剂效果的比较

目的研究石杉碱甲预防有机磷神经毒剂的效果,并与溴化吡啶斯的明作用进行比较。方法以1.0 mg/kg石杉碱甲、5.82 mg/kg溴化吡啶斯的明分别给大鼠灌胃,30 min后以2.7 mg/kg的对氧磷进行染毒,观察各组死亡率、死亡时间、胆碱能中毒症状,并与对照组比较。结果预防给予石杉碱甲或溴化吡啶斯的明,石杉碱甲预防组死亡率为10.00%,溴化吡啶斯的明预防组死亡率为15.00%,对照组死亡率为54.54%,两预防组0.5 h及1.0 h的不自主运动(IM)和流涎、流泪、排尿、排便(SLUD)评分均低于对照组,预防组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。两预防组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论石杉碱甲对有机磷神经毒剂具有良好的预防作用,达到了与溴化吡啶斯的明同样的预防效果。

锌对镉致淋巴细胞DNA损伤的保护作用

目的探讨锌对镉致淋巴细胞DNA损伤的保护作用。方法小鼠经腹腔同时注射1.25,2.50,5.00 mg/kg硫酸锌和2.50 mg/kg氯化镉水溶液,染毒24 h和48 h后分别取外周血和胸腺,采用单细胞凝胶电泳(single cell gel eletrophoresis,SCGE)技术观察不同浓度锌对镉致小鼠外周血和胸腺淋巴细胞DNA损伤的保护作用。结果与阴性对照组比较,镉组的淋巴细胞DNA平均迁移长度明显增加,且差异有显著性(P<0.05)。不同剂量的锌和镉同时作用时,无论染毒24 h还是48 h,外周血和胸腺淋巴细胞的DNA平均迁移长度明显下降,与镉组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论锌对镉致淋巴细胞DNA损伤有保护作用。

1,2-二氯乙烷致小鼠血淋巴细胞遗传毒性研究

目的研究1,2-二氯乙烷(1,2-DCE)对小鼠血淋巴细胞DNA和骨髓细胞染色体的损伤作用,探讨1,2-二氯乙烷的遗传毒性。方法采用单细胞凝胶电泳和微核试验方法,分别检测1,2-DCE不同染毒剂量(50,100,200,400 mg/kg)小鼠外周血淋巴细胞DNA和骨髓细胞染色体损伤情况。结果除50 mg/kg剂量组外,小鼠血淋巴细胞的彗星细胞率及尾长、骨髓细胞微核率随1,2-DCE染毒剂量的增加而增加(P<0.01)。其中,400 mg/kg剂量组彗星细胞率、平均尾长、微核率分别为45.5%,(37.24±3.17)μm,12.0‰,显著高于阴性对照组和50 mg/kg剂量组(P<0.01)。染毒剂量与彗星细胞率、平均尾长、微核率之间存在着剂量-反应关系(R彗星率=0.980 2,R彗尾长=0.976 6,R微核率=0.975 1,P<0.01)。结论1,2-DCE可导致小鼠血淋巴细胞DNA损伤和骨髓细胞染色体异常。表明1,2-DCE具有细胞遗传毒性。