基于微滴式数字PCR的KRAS基因外显子2密码子12/13突变检测方法的建立

目的 应用微滴式数字PCR技术(ddPCR)建立鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)外显子2密码子12/13多种突变类型一次性检测。方法 采用位点-参考探针法设计探针及引物,建立KRAS基因外显子2密码子12/13多位点突变反应体系,优化反应条件及退火温度,分析所建立方法的灵敏度和特异度,并进行实例验证。结果 成功建立KRAS基因多位点突变一次性检测的方法,并确立最佳退火温度为63℃。该方法特异度良好,灵敏度分析示最低检测限为0.5%,实例验证可应用于组织样本检测。结论 成功建立基于ddPCR技术KRAS基因外显子2密码子12/13突变检测方法,实现多位点突变一次性检测,其中仅需两类探针和一对PCR引物。