中国汉族人群P-选择素基因多态性的研究

目的研究P-选择素(P-selectin)C-2123G、T-1817C、G-1969A、Thr715Pro基因多态性在中国湖北地区健康汉族人群中的分布,比较种族间的基因型及等位基因频率分布差异。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的分析方法,检测200名健康者P-selectin基因C-2123G、T-1817C、G-1969A、Thr715Pro的基因型并计算其基因型频率及等位基因频率。结果中国汉族人群P-selectin C-2123G位点基因型以GG型频率最高,CG型次之,CC型最少,这种基因多态性分布在男女间无显著性差异(P>0.05)。与德国和英国比较,该位点基因型分布及等位基因频率均存在显著差异(P均<0.001)。P-selectin G-1969A位点基因型以GG型频率最高,GA型次之,未检测到AA型,男女间无显著性差异(P>0.05)。与德国和英国比较,该位点基因型分布及等位基因频率均存在显著差异(P均<0.001)。P-selectin T-1817C位点基因型以TT型频率最高,TC型次之,CC型最少,男女间也无显著性差异(P>0.05)。与英国比较,该位点基因型分布及等位基因频率均存在显著差异(P<0.01)。本次实验中未检测到Thr715Pro基因多态性。结论中国湖北地区汉族人群存在P-selectin启动子区C-2123G、G-1969A、T-1817C基因多态性,这种多态性在同种族男女间无差异,在种族间存在着较大的差异。但不存在Thr715Pro基因多态性。

核酸扩增技术在广州市献血员血液筛查中的应用价值

【目的】评价核酸扩增技术（NAT）在广州市献血员血液筛查的应用价值。【方法】收集22139名无偿献血员血样，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、梅毒螺旋体（TP）和人免疫缺陷病毒（HIV），并检测谷丙转氨酶（ALT）水平。对四项ELISA检测阴性和ALT≤40U／L者血样，用COBASs201系统进行HBVDNA、HCVRNA、HIVRNA检测。NAT反应性样本、HBV、HCV和HIVELISA检测阳性血样以COBASAmpliScreen试剂盒鉴定。【结果】22139名献血员中，21776例双试剂血清免疫学检测阴性，其中19例为NAT反应阳性，检出率0．087％（19／21776），后经NAT鉴定检测，HBV、HCV和HIV反应阳性检出率分别为0．051％（11／21776）、0．028％（6／21776）和0．009％（2／21776）。126例HBsAg阳性样本中，25例NAT阴性，其中15例HBsAg中和试验阳性，为低水平慢性感染携带者。50例anti‐HCV阳性血样，4例为NAT阴性，补充ELISA检测为anti‐HCV阴性。16例anti‐HIV阳性样本中，7例为NAT阴性，其单样品核酸检测（ID‐NAT）和补充ELISA检测均为anti‐HIV阴性。【结论】NAT血液筛查对HBV、HCV和HIV经ELISA检测阴性样本的检出率较高，在该地开展NAT血液筛查，对于降低输血残余危险有重大意义。少量HBsAg阳性的低水平感染慢性携带者，汇集核酸检测（MP‐NAT）阴性，HBsAg筛查依然是必不可少的筛查手段。

中国广东地区汉族人群P选择素糖蛋白配体-1Met62Ile基因多态性与冠心病的相关性探讨

目的探讨P选择素糖蛋白配体-1(P-selectin glycoprotein ligand-1,PSGL-1)Met62Ile(M62I)基因多态性在中国广东地区汉族人群中的分布特点及其与冠心病(coronary heart disease,CHD)的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction restrictionfragment length polymorphism,PCR-RFLP)分析方法检测200名该地区冠心病患者和200名汉族健康人群PSGL-1 M62I基因型,计算并比较各组基因型频率及等位基因频率。结果 200名冠心病组中P选择素PSGL-1 M62I基因型以Met/Met(M/M)型发生频率最高(73.0%),Met/Ile(M/I)型次之(27.0%),未检测到Ile/Ile(I/I)型;M、I各型等位基因频率分别为86.5%、13.5%,该位点基因多态性分布在男女间无显著性差异(P>0.05)。200名正常对照组中P选择素PSGL-1 M62I基因型以M/M型发生频率最高(69.0%),M/I型次之(31.0%)未检测到I/I型;M、I各型等位基因频率分别为84.5%、15.5%,该位点基因多态性分布在男女间无显著性差异(P>0.05)。两组人群间各基因型及等位基因分布无显著性差异(P>0.05)。结论中国广东地区冠心病患者和健康人群PSGL-1 M62I基因多态性在男女之间均无较大的差异。PSGL-1 M62I位点可能不是冠心病的易感基因。

中国湖北地区汉族人群P-选择素基因-2123C/G多态性分布的研究

目的:探讨P-选择素(P-selectin)基因启动子-2123位点多态性在中国湖北地区汉族正常人群中的分布特点。方法:采用聚合酶链反应(PCR)及限制性片断长度多态性(RFLP)方法检测中国湖北地区170名汉族人群P-选择素基因启动子-2123位点多态性,探讨其基因型及等位基因分布特点。结果:中国湖北地区人群P-选择素基因启动子-2123位点各基因型频率CC型8.20%,CG型37.60%,GG型54.10%。等位基因频率C为27.10%,G为72.90%。与欧洲国家人群相比,该位点多态性存在显著差异(P<0.01)。结论:P-选择素基因启动子-2123位点多态性有明显的种族差异。

中国广东地区汉族人群P-选择素启动子区C-2123G基因多态性的研究

目的探讨P-选择素(P-selectin)启动子区C-2123G基因多态性在中国广东地区健康汉族人群中的分布特点及其在不同种族间的分布差异。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析方法检测240名该地区汉族人P-选择素基因C-2123G的基因型并计算其基因型频率及等位基因频率。结果P-选择素C-2123G基因型以GG型发生频率最高,各位点各基因型频率:CC型8.33%,CG型42.5%,GG型49.17%;C,G各等位基因频率分别为29.58%,70.42%,这种基因多态性分布在男女间无显著性差异(P>0.05)。与德国、英国和泰国人群比较,发现不同种族间P-选择素C-2123G基因型分布及等位基因频率均存在显著差异(P<0.01和P<0.05);而与中国成都和湖北地区人群比较差异无显著性(P>0.05)。结论中国广东地区汉族人群中存在P-选择素启动子区C-2123G基因多态性,在不同种族间存在着较大的差异,这种差异可能是导致某些疾病在不同种族间的发病率和临床表现存在显著不同的因素之一。

P-选择素启动子区C-2123G、T-1817C基因多态性的研究

目的研究P-选择素(P-selectin)基因启动子区C-2123G、T-1817C多态性在中国湖北地区健康汉族人群中的分布,同时比较不同种族间基因型及等位基因频率分布差异。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的分析方法,检测200名健康者P-selectin基因启动子区C-2123G、T-1817C的基因型并计算其基因型频率及等位基因频率。结果中国湖北地区健康人群P-selectin C-2123G基因各基因型频率:CC型8.0%,CG型40.5%,GG型51.5%;C,G各等位基因频率分别为28.2%,71.8%,这种基因多态性分布在男女间无显著性差异(P>0.05)。与德国和英国比较,发现不同种族间P-selectin C-2123G基因型分布及等位基因频率均存在显著差异(P<0.001,P<0.001)。P-selectin T-1817C基因各基因型频率:TT型65.5%,TC型28.5%,CC型6.0%;T,C各等位频率分别为79.75%,20.25%,这种基因多态性分布在男女间无显著性差异(P>0.05)。与英国比较,发现不同种族间P-selectin T-2123基因型分布及等位基因频率均存在显著差异(P<0.001)。结论中国湖北地区汉族人群中存在P-selectin启动子区C-2123G、T-1817C基因多态性,这种多态性在同种族男女间无差异,在各族间存在着较大的差异。

临床实验室HBV DNA检测室内质量控制的评价

HBV DNA定量测定主要是用于乙型肝炎患者治疗的动态观察及疗效判断.目前,临床实验室多采用荧光定量PCR方法检测,该法敏感度高,特异性强,但影响因素也较多,其结果易受模板浓度及扩增反应体系批间差异和标本处理过程等多方面因素的影响[1-2],为了解PCR实验室本年度HBV DNA结果的精密度和准确度及试剂批间差异对结果的影响情况,现对五个批号试剂的相关实验数据进行分析,结果报道如下.

黄连素对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道炎症的影响

目的探讨不同剂量黄连素对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠气道炎症的影响。方法 50只清洁级雄性Wistar大鼠随机分为生理盐水对照组、COPD模型组和低剂量(25 mg/kg)、中剂量(50 mg/kg)、高剂量(100 mg/kg)黄连素组,每组各10只。通过气管注射内毒素加熏香烟方法建立大鼠COPD模型。采集左肺支气管肺泡灌洗液,利用瑞氏-吉姆萨染色法行中性粒细胞(PMN)、肺泡巨噬细胞(AM)计数;ELISA法检测IL-8、IL-10、IL-17含量。结果 COPD模型组大鼠支气管肺泡灌洗液中的PMN、AM计数及IL-8、IL-17含量显著高于生理盐水对照组(P<0.01);IL-10含量显著低于生理盐水对照组(P<0.01)。而不同剂量黄连素干预后PMN、AM计数,IL-8、IL-17水平有不同程度下降(P<0.01),IL-10水平有不同程度升高(P<0.01),且黄连素剂量越高,此效应越明显。结论不同剂量黄连素均可抑制COPD模型大鼠的气道炎症,其机制可能与黄连素下调炎症因子IL-8、IL-17水平,增强抗炎因子IL-10水平这一途径有关,且此效应与黄连素剂量呈正相关。

两种荧光定量法检测HCV RNA结果的比较

目的建立双探针荧光定量HCV RNA检测方法,分析其定量检测HCV RNA的灵敏度和特异性以及HCV RNA含量与患者病情的相关性。方法选取100例抗HCV抗体阳性患者,包括慢性肝炎患者45例、肝硬化患者30例、肝癌患者25例的样本,用双探针荧光定量法和两种商品荧光定量试剂方法进行HCV RNA检测,另观察近期196例抗HCV抗体阳性和48例抗HCV抗体阴性样本荧光定量PCR HCV RNA含量与肝功能的相关关系。结果荧光定量双探针法阳性率为93%(93/100);两种商品荧光定量试剂方法阳性率分别为84%(84/100)和79%(79/100),经卡方检验差异有统计学意义(P<0.05)。196例中抗HCV与HCV RNA阳性一致率为57.1%(116/196),其中伴肝功能改变49.0%(96/196)。HCV RNA含量与AST和ALT异常程度无显著相关性(P>0.05),相关系数分别为0.4293及0.3899。HCV RNA高拷贝数患者肝功能异常率为85.2%(69/81),低拷贝数者肝功能异常率为40.9%(47/115),经卡方检验,χ2=38.63,差异有统计学意义(P<0.001)。结论双探针荧光定量提高了HCV RNA检测的灵敏度和特异性,HCV RNA含量与患者肝功能损伤程度无明显相关性。

HBV-DNA与HBV PreS1 Ag、HBeAg应用价值的探讨

目的探讨HBV-DNA、HBV PreS1 Ag和HBeAg3指标在提示乙型肝炎病毒复制、病情转归以及疗效观察等方面的作用。方法采用荧光定量PCR法检测HBV-DNA,以<5.0×102拷贝/mL为阴性。采用ELISA法检测"乙肝两对半"和HBV PreS1 Ag。结果151例乙肝病人中有58例HBeAg阳性标本,HBV-DNA与HBeAg、HBV PreS1 Ag阳性符合率分别为96.6%、87.9%。71例接受抗病毒治疗和80例未接受抗病毒治疗病人HBV-DNA与HBV PreS1 Ag阳性一致率分别为84.5%和46.6%,差异有统计学意义(χ2=20.944,P<0.01)。结论HBeAg阳性仍是现阶段乙型肝炎病毒复制监测的理想指标,HBV PreS1 Ag可作为HBV感染及既往或现症病毒复制的支持性指标,但不适于作为抗病毒治疗监测指标。

老年慢性阻塞性肺疾病合并2型糖尿病患者T细胞免疫状况及免疫干预

目的探讨老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并2型糖尿病(T2DM)患者T细胞免疫功能的变化及其影响因素,并观察免疫干预治疗的作用。方法选取64例老年COPD合并T2DM住院患者为研究对象,并随机分为免疫干预组和非免疫干预组各32例,选取老年单纯COPD组35例、老年健康组30例为对照。患者入院后均行常规检查治疗,老年COPD合并T2DM免疫干预组给予非特异免疫促进药胸腺五肽,各组分别于治疗前1 d、治疗30 d后用流式细胞仪检测患者外周血CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+的变化,同时观察患者临床症状的改善。结果老年COPD并T2DM组患者治疗前的T细胞亚群与老年单纯COPD组及老年健康对照组比较,CD4+降低,CD8+升高,CD4+/CD8+倒置,差异有统计学意义(均P<0.05)。老年COPD并T2DM干预组治疗前CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+值分别为62.52±10.21、23.75±5.36、36.51±8.41、0.70±0.35,治疗30 d后分别为66.89±11.35、35.38±8.71、26.64±9.88、1.33±0.51,差异有统计学意义(均P<0.01)。干预组住院时间(17.2±6.8)d,费用(12 386±5 862)元,与非干预组、老年单纯COPD组比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论老年COPD并T2DM患者细胞免疫功能下降,应用免疫促进剂胸腺五肽,可改善其细胞免疫功能,提高临床疗效从而减少住院时间及费用。

FQ-PCR测定HBV DNA与ELISA检测HBV-M相关性分析

目的探讨HBV DNA含量与HBsAg S/CO值之间的相关性。方法分别用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测100例乙肝患者的HBV DNA含量和乙肝两对半,并记录HBsAg S/CO值。结果100例乙肝患者HBV DNA含量对数值为(4.28±1.89),HBsAg S/CO值为(15.09±6.64),两指标间作相关性分析,r=-0.0156,P>0.05,无相关性。结论HBV DNA是判断乙肝病毒复制的较准确、较直接的抗乙肝病毒疗效观察指标,而HBsAgS/CO值的高低与疾病的严重程度及疗效无关。

老年冠心病患者L-选择素P213S基因多态性研究

目的探讨L-选择素P213S基因多态性在老年冠心病患者和正常人群中的分布及与冠心病的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性技术对汉族116例老年冠心病患者及108例正常人L-选择素基因P213S多态性位点进行研究,同时检测血脂和L-选择素水平。结果L-选择素P等位基因频率在老年冠心病和正常人群中分别为77.6%和67.1%,S等位基因频率分别为22.4%和32.9%。冠心病患者PP基因型频率和P等位基因频率均明显高于正常对照组(P<0.05)。结论L-选择素P213S位点多态性与老年冠心病呈相关性。P等位基因可能是老年冠心病的易感性标志。

高龄患者医院获得性肺炎的病原菌构成及耐药性分析

目的探讨高龄患者医院获得性肺炎(HAP)常见病原菌构成及其耐药情况。方法对2011年1月～2012年4月本院综合病房收治的198例高龄HAP患者痰标本中分离出的病原菌进行细菌鉴定,采用Kirby-Bauer法检测其耐药性。结果分离出病原菌共308株,革兰阴性细菌187株(60.71%),革兰阳性细菌94株(30.52%),其中MRSA 34株,占所分离金黄色葡萄球菌的73.91%,真菌27株(8.77%)。前4种病原菌分别为铜绿假单胞菌(21.75%)、金黄色葡萄球菌(14.94%)、大肠埃希氏菌(12.66%)和肺炎克雷伯菌(11.04%),且普遍呈现多重耐药。结论高龄患者HAP病原菌以革兰阴性菌为主,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)及条件致病菌的分离率及耐药率有增加趋势,建立细菌耐药预警机制,早期、规范使用抗生素意义重大。

两种实时荧光定量核酸检测试剂盒测定TB DNA结果比较

目的探讨两种国产实时荧光定量PCR(FQ-PCR)试剂盒快速诊断肺结核病的准确性和可行性。方法选取60例活动期肺结核患者样本及正常对照样本、标准品和质控品,使用两种国产实时荧光定量核酸检测试剂盒分别进行TBDNA检测。结果两种试剂阴阳结果符合率为100%,均未出现假阳性和假阴性结果;两种试剂在TBDNA载量为104～107IU/mL范围内线性关系良好,重现性试验显示变异系数均小于4%;60例阳性标本中湖南某公司TBDNA定量结果高于广州某公司结果45例,低于广州某公司结果15例;两组资料TBDNA定量比较,P<0.01;相应地其CT结果均低于广州某公司试剂,CT相差值的波动范围在(3.44±1.66)之间。结论两种国产实时荧光定量PCR试剂盒能快速、有效地诊断肺结核病,其特异性较高,能够满足结核早期诊断的要求。

两种核酸提取法对不同程度溶血标本HBV-DNA检测结果的比较

目的探讨一步核酸提取法和两步核酸提取法对不同程度溶血标本乙型肝炎病毒（HBV）DNA检测结果影响的差异。方法收集22例临床随机患者全血标本,离心并于当天用一步和二步核酸提取法试剂检测HBV-DNA含量后,将全血标本放4℃冰箱保存,每隔2~3 d取出分别用两种试剂检测HBV-DNA的含量。结果 22例标本随着存放时间和溶血程度的增加,其HBV-DNA含量有下降趋势;一步法在标本存放3 d后结果显著低于首次检测结果（t3d=3.981,P〈0.01）;二步法在标本存放19 d后结果显著低于首次检测结果（t3d=3.642,P〈0.01）;标本于4℃存放3天后一步法HBV-DNA的检测结果显著低于二步法（t3d=4.91,P〈0.001）。结论溶血标本对二步核酸提取法试剂检测HBV-DNA含量的影响作用远低于一步法,对于临床由于特殊原因无法及时获得合格血标本时,可考虑使用二步核酸提取法试剂检测HBV-DNA的含量。

L-选择素P213S基因多态性与心绞痛的相关性研究

目的探讨L-选择素P213S基因多态性与心绞痛的相关性。方法用聚合酶链反应．限制性片段长度多态性（PCR．RFLP）技术检测138例心绞痛病患者和156例正常对照者L-选择素基因型，结合血脂水平探讨两者之间的相关性。结果L-选择素基因型PP、Ps和SS频率在心绞痛组和对照组间分别为60．1％、36．3％、3．6％和44．9％、48．1％、7．0％；等位基因P、S频率在心绞痛组和对照组分别为78．3％、21．7％和68．9％、31．1％，两组和对照组间差异均有显著性（P〈0．05）。P等位基因患心绞痛的风险是S等位基因的1．624倍（OR=1．624，95％CI：1．118～2．359）。结论L．选择素P213S基因多态性与心绞痛的发病有相关性，P等位基因可能是心绞痛发病的危险因素之一。

一种免核酸提取HBV-DNA荧光定量PCR试剂盒临床应用价值的评估

目的评估一种全新的免核酸提取的荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA的临床应用价值。方法通过随机检测62例临床血清样品,比较免核酸提取和核酸提取两种试剂HBV-DNA扩增结果的一致性、灵敏度和相关性。结果两种HBV-DNA荧光定量试剂阴阳结果符合率为100%;HBV-DNA定量结果无显著差异(t=1.006,P>0.05);免核酸提取法不同浓度梯度相关系数r=-0.9999(P<0.001);灵敏度为4×102IU/ml,CV<6%。结论该免核酸提取HBV-DNA荧光定量PCR试剂扩增效率、线性关系和重现性良好,具有潜在的临床应用价值和发展前景。

黄连素对COPD大鼠气道炎症和粘液高分泌的调控作用研究

目的探讨黄连素对COPD大鼠气道炎症和粘液高分泌的影响及研究其相关分子机制。方法清洁级雄性Wistar大鼠随机分为生理盐水对照组、COPD模型组和黄连素组各10只,通过熏香烟加气管注内毒素方法建立大鼠COPD模型。采集支气管肺泡灌洗液用ELISA法检测中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)、IL-10含量。采集支气管-肺组织标本用免疫组织化学法(SP法)检测NF-κB、粘蛋白Muc5ac表达,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Muc5ac mRNA表达。结果 COPD模型组大鼠BALF细胞总数、中性粒细胞数(PMN)、巨噬细胞数(AM)、NE较正常对照组显著升高(P<0.01),IL-10水平显著下降(P<0.01)。黄连素组BALF细胞总数、PMN、AM较COPD组显著降低(P<0.01),L-10水平升则高(P<0.05)。COPD模型组大鼠气道黏膜上皮NF-κB、Muc5ac mRN及蛋白表达较正常对照组显著升高(P<0.01)。黄连素组气道黏膜上皮NF-κB、Muc5ac mRN及蛋白表达较COPD组显著下降(P<0.01)。结论黄连素可负向调节气道炎症和粘液高分泌,其机制可能与黄连素抑制NE、NF-κB炎症因子,促进抗炎因子IL-10,下调粘蛋白Muc5ac表达有关。

中国湖北地区汉族人群L-选择素基因P213S多态性研究

目的:了解中国湖北地区汉族人群L-选择素基因第六外显子P213S多态性分布,并与其它地区的分布进行比较。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,检测206名健康者L-选择素基因P213S多态性基因型和等位基因频率分布。结果:L-选择素各基因型频率分别为PP型(45.63%)、PS型(49.03%)和SS型(5.34%)。P、S等位基因频率分别为70.15%和29.85%,这种基因多态性分布无性别差异(P>0.05)。湖北地区汉族人群L-选择素基因型和等位基因频率分布与英国及日本人有显著性差异(P<0.05)。结论:湖北地区汉族人群中存在L-选择素基因多态性,与其它地区分布比较有明显的差异。