应用实时荧光PCR快速检测血培养标本中的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌

目的应用实时荧光PCR(RT-PCR)技术进行血培养标本中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的快速检测。方法挑取细菌纯菌落配制成菌悬液,吸取菌悬液分别加入血培养瓶制备梯度细菌浓度的模拟血培养标本,放入血培养仪孵育,分别提取仪器报阳培养液中的细菌DNA。应用RT-PCR技术扩增和检测肺炎克雷伯菌Khe基因和4种碳青霉烯酶基因(KPC、NDM、VIM、IMP)。进行灵敏度试验、特异度试验和重复性试验。结果使用RT-PCR方法检测耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌18株和非肺炎克雷伯菌30株,试验特异度为100%(48/48),最低检测限为0.5 cfu/mL,3次重复试验结果一致。从18株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分离株中检出7株(38.9%)携带KPC酶基因,9株(50.0%)携带NDM酶基因,1株(5.6%)同时携带KPC酶基因和NDM酶基因。结论应用RT-PCR技术可快速检测血培养标本中的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌,为该类细菌相关血流感染的早期诊治提供依据。

野战快速检验系统(A型)生化模块检测性能及野战适用性评价

目的对野战快速检验系统（POCT,A型）生化模块急诊项目检测性能及野外复杂条件下的适用性进行评价。方法根据美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS）标准对野战POCT（A型）检测白蛋白（ALB）、总胆红素（TBIL）、丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、血尿素氮（BUN）、肌酐（CREA）、血尿素（UA）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、葡萄糖（GLU）的精密度及抗干扰能力进行系统分析;使用野战POCT（A型）与Coulter Beckman AU2700型全自动生化分析仪分别检测随机选取的22例临床血清标本,并对检测结果进行一致性分析;通过调节温湿度模拟野战环境,对不同环境下混合血清检测结果进行比较。结果野战POCT（A型）上述10项指标的总精密度变异系数分别为3.34%、6.54%、6.01%、4.80%、3.95%、5.59%、3.33%、6.19%、7.40%、4.56%（水平Ⅰ）;3.08%、4.47%、4.02%、4.31%、3.76%、4.22%、2.93%、5.25%、6.39%、4.35%（水平Ⅱ）。当甘油三酯浓度为21 mmol/L时,所有项目干扰率均〈10%;胆红素浓度为120μmol/L时,ALT、AST、CREA干扰率分别为-33.33%、-22.99%、20.00%（水平Ⅰ）,-22.13%、-14.55%、8.70%（水平Ⅱ）;胆红素浓度为240μmol/L时,UA两水平干扰率分别为-16.67%、-24.69%;血红蛋白（Hb）浓度为170 mg/dl时,TBIL、LDH干扰率分别为20.00%、99.26%（水平Ⅰ）,15.38%、40.79%（水平Ⅱ）,Hb为340 mg/dl浓度时,ALT、AST干扰率分别为9.84%、13.79%（水平Ⅰ）,12.30%、12.27%（水平Ⅱ）,Hb为510 mg/dl浓度时,水平ⅠCREA、UA、CK干扰率分别为26.67%、16.67%、11.74%。与AU2700型全自动生化分析仪检测结果比较各项目直线回归R2分别为0.961、0.995、0.989、0.995、0.990、0.989、0.989、0.963、0.978、0.993。在气温35℃时仪器超出温度范围无法进行检测,在10~30℃或相对湿度（RH）70%~90%时与常温常湿（20℃,RH 50%）各项目检测结果差异无统计学意义（P〉0.05）,在高温高湿环境（30℃,RH 90%）ALT和CK结果显著增高（P〈0.001,P=0.011）。结论野战POCT（A型）生化模块与常规大型生化仪检测结果相关性好,精密度符合临床实验室要求,但黄疸及溶血标本对个别项目检测有不同程度干扰,仪器能基本满足野战温湿度条件下的准确检测,但应尽量避免将其置于极端环境下工作。