ATP和钾离子对肌动蛋白与前纤维蛋白结合的影响及其在植物肌动蛋白纯化中的应用

根据ATP和钾离子影响肌动蛋白聚合及肌动蛋白与前纤维蛋白结合的实验结果 ,通过对以往报道的利用多聚脯氨酸_琼脂糖亲和柱层析法纯化植物肌动蛋白过程中ATP及钾离子浓度的改变 ,不需加外源前纤维蛋白 ,可得到较大量高纯度具活性的花粉肌动蛋白。SDS凝胶电泳、免疫印迹、电镜负染及紫外检测表明 ,所得肌动蛋白在纯度、聚合特性等方面均与原方法所得结果相同。肌动蛋白产率为原方法的 73.5 % ,而整个肌动蛋白提纯过程所需时间缩短了 1/3,节省了纯化重组前纤维蛋白所需的费用 ,消除了外源前纤维蛋白的使用对一些实验室的限制 ,而且同时得到了大量纯化的花粉前纤维蛋白。

前纤维蛋白影响花粉肌动蛋白体外聚合分析

利用超速离心沉淀及紫外分光光度测定等技术 ,研究了不同比例的玉米 (ZeamaysL .)花粉内源前纤维蛋白对玉米 (ZeamaysL .)花粉肌动蛋白 (前纤维蛋白与肌动蛋白摩尔数比分别为 2∶1,1.5∶1,1∶1,0 .5∶1,0 .1∶1)聚合与解聚的影响。初步实验结果显示 ,前纤维蛋白在各种比例下均可与Mg_ATP_肌动蛋白结合并抑制肌动蛋白的聚合作用。这种抑制作用随着前纤维蛋白比例的增加而增大。其解离常数值 (Kd)为 (1.30± 0 .33) μmol/L。在本实验条件下尚未见到有前纤维蛋白促进植物肌动蛋白聚合的作用 ,表明玉米花粉前纤维蛋白具有螯合G_肌动蛋白的作用。