乡镇领导班子及其成员实绩考核应把握的四种关系

在制定乡镇领导班子及其成员实绩考核方案时,如何根据农村农业的发展方向和乡镇目前社会、经济发展水平,来制定相应的实绩考核体系,是衡量一个考核方案是否科学、适用的重要因素。从实践中我们体会到,对乡镇领导班子及其成员实绩的考核,必需把握如下四种关系。 一、现实性和导向性的关系 一个完善的考核方案,不仅具有激励作用,同时还应具有导向作用。因此,在制定考核指标时。

下调Foxp3基因表达对人调节性T细胞功能的影响

目的利用RNA干扰技术下调Foxp3表达，观察其对人CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg）表型及功能的影响。方法利用Foxp3siRNA转染人CD4^＋CD25^＋Treg，荧光显微镜和流式细胞仪（FACS）检测转染效率，实时定量PCR和Western印迹分别鉴定Foxp3基因及Treg功能相关基因表达、Foxp3蛋白表达，细胞增殖实验检测Treg抑制功能，FACS测Treg表型标记，ELISA检测细胞因子表达。结果Foxp3siRNA转染人CD4^＋CD25^＋Treg效率为68％，与对照组相比，转染后的细胞Foxp3基因下调了61．4％（P〈0．01），Foxp3蛋白表达较低，Treg功能相关基因和主要表型标记也较对照组有改变，差异有统计学意义。功能试验提示无论是在异种还是同种抗原刺激的淋巴细胞反应中，Foxp3 siRNA转染的Treg与对照组相比，对效应性T细胞的抑制作用较弱（异种抗原组83％比48％，P〈0．05；同种抗原组65％比28％，P〈0．01），且主要抑制性和效应性细胞因子的表达下降，差异有统计学意义。结论Foxp3是人天然Treg维持其抑制性功能的核心细胞内标志。

人CD4^+CD25^+调节性T细胞的体外培养扩增

目的建立人CD4+CD25+Treg细胞的分离和体外扩增方法,并检测扩增细胞的表型及体外免疫抑制功能。方法免疫磁性分离(MACS)方法分离人CD4+CD25+Treg细胞,加入刺激因子与之共培养扩增,用台盼蓝染色法和流式细胞法检测细胞的活性和纯度,流式细胞法检测细胞主要表型标记,实时定量PCR检测Treg核心标记Foxp3的表达,混合淋巴细胞反应试验分析其免疫抑制功能,ELISPOT方法检测产生细胞因子的细胞数目。结果扩增2～3周的CD4+CD25+Treg细胞数目达到新鲜细胞的3500倍,活性>97%,纯度>96%;扩增的细胞与新鲜的细胞保持了相似的表型、Foxp3表达,其抑制功能略强于新鲜的CD4+CD25+Treg细胞,其差异具有统计学意义(71%vs51%,P<0.05),可能与其产生抑制性细胞因子的细胞数目增加有关。结论本实验室创建的分离和体外扩增人CD4+CD25+Treg细胞的方法,可以大量扩增出高纯度、有活力且不影响其抑制功能的Treg细胞,解决了CD4+CD25+Treg细胞数目少的问题。