广西巴马小型猪GHR基因克隆及部分序列的PCR-SSCP分析

为了探讨广西巴马小型猪矮小的分子机理,以广西巴马小型猪肝脏RNA为模板,扩增巴马小型猪生长激素受体(GHR)基因的全序列,将该扩增片段连接到pMD18-T载体后经过转化测序。采用PCR-SSCP方法,对4个品种120头猪的第10外显子的部分序列进行多态性分析。结果表明,克隆的广西巴马小型猪GHR基因全长为1917bp(GenBank登录号为EF041823),与GenBank(X54429)的序列同源性为99%,且第10外显子部分序列SSCP检测没有多态性。经序列比对后,发现广西巴马小型猪生长激素受体胞内域编码区发生7处突变,导致相应氨基酸发生置换,这有可能影响生长激素的胞内运输和生长激素受体的下游信号转导,但经SSCP检测发生突变的位点并没有引起单核苷酸构象的改变。该结论为进一步研究广西巴马小型猪的矮小机理与GHR基因的关系奠定了基础。

广西巴马小型猪脂联素受体1和受体2cDNA的克隆及序列分析

[目的]克隆并分析广西巴马小型猪脂联素受体1(AdipoR1)和脂联素受体2(AdipoR2)编码基因的cDNA全序列。[方法]利用RT-PCR法,以骨骼肌总RNA为模板,分别扩增AdipoR1和AdipoR2全长cDNA序列,纯化后连接pMD 18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆体,鉴定后测序,并与其他物种AdipoR1和AdipoR2 cDNA序列进行同源性比较。[结果]RT-PCR扩增得到大小与AdipoR1和AdipoR2基因编码序列大小相同的片段,片段长度为1 128和1 161 bp。同源性比较分析发现,广西巴马小型猪AdipoR1和AdipoR2cDNA序列与GenBank中已报道的家猪脂联素受体同源性分别高达99.8%、99.7%,分别有1处和3处发生了碱基错义突变。[结论]该试验成功克隆了广西巴马小型猪AdipoR1和AdipoR2基因的cDNA,为进一步研究AdipoR基因的生物功能及设计以AdipoR为靶标的新型药物奠定了基础。

广西巴马小型猪脂联素cDNA的克隆及序列分析

为了克隆广西巴马小型猪脂联素基因的cDNA全序列及序列分析,试验利用引物悬挂延伸PCR法,以基因组总DNA为模板,先分别扩增得到编码脂联素的第2外显子和第3外显子的序列,再以这2个外显子为模板,进行第2轮PCR,纯化连接pMD 18-T载体后转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆体,鉴定后测序。结果表明:经PCR产物测序证明,得到大小与脂联素基因编码序列大小相同的片段,此片段长度为732 bp;同源性比较分析发现,广西巴马小型猪脂联素cDNA序列与GenBank中已报道的家猪脂联素同源性高达99.7%,有2处发生了碱基错义突变。

主动免疫猪活化素重组融合蛋白疫苗对巴马小型猪生长性能的影响研究

以含有巴马小型猪活化素成熟肽基因的重组质粒pRSETA-ACTA和pRSETA-ACTB的重组融合蛋白疫苗,对60日龄的巴马小型猪进行免疫,以探讨活化素免疫调控动物生长性能的作用机理。结果表明:主动免疫重组融合蛋白疫苗ACTA对巴马小型猪的日增重无显著影响(P>0.05);而主动免疫重组融合蛋白疫苗ACTB后1～28d、29～56d、1～56d,试验组日增重比对照组分别提高了5.3%(P>0.05)、17.4%(P<0.05)和14.2%(P<0.05)。ELISA检测结果发现,试验猪主动免疫ACTA或ACTB重组融合蛋白疫苗后均能显著产生抗活化素抗体(P<0.05);主动免疫ACTB重组融合蛋白疫苗极显著地提高了血清中卵泡抑制素(FS)的浓度(P<0.01)。可见,该研究制备的ACTB重组融合蛋白疫苗可有效促进巴马小型生长猪的生长、提高血清中FS的浓度。

广西巴马小型猪脂联素受体1和受体2 cDNA的克隆及序列分析(英文)

该试验根据GenBank中普通猪脂联素受体（AdipoR）mRNA序列，利用RT—PCR法对广西巴马小型猪AdipoR基因进行克隆，与NCBI中发表的猪AdipoR序列进行同源性比较，分析广西巴马小型猪AdipoR的cDNA及氨基酸序列结构特点，为进一步从分子水平上对广西巴马小型猪的生长发育提供理论依据，也为日后构建真核表达载体，研究AdipoR基因的生物功能奠定基础。

食蟹猴上肢取食执行时间的随龄变化及其与^(99m)Tc-TRODAT-1摄取率的相关关系研究

目的研究食蟹猴随年龄增长伴随的用上肢取食执行时间的变化及其与纹状体99mTc-TRODAT-1〔锝99-2β-[N,N'-双(2-巯乙基)乙撑二胺基]甲基,3β-(4-氯苯基)托烷〕摄取率之间的相关关系。方法选取4、10和15岁3个年龄组的健康食蟹猴共30只,利用改良的运动活动平板定量测定上肢取食执行时间,各年龄组分别选取4只动物用多巴胺转运体(dopamine transporter,DAT)配体99mTc-TRODAT-1结合的单光子发射体层摄影术(single-photon emission computed tomography,SPECT)显像观察脑内纹状体多巴胺转运体放射性摄取率(99mTc-TRODAT-1摄取率)的变化。结果随着年龄的增长,食蟹猴用上肢取食执行时间逐渐延长,纹状体99mTc-TRODAT-1放射性摄取率呈逐渐减低的趋势,直线回归分析结果显示食蟹猴上肢取食执行时间与年龄呈统计学相关关系,且与纹状体99mTc-TRODAT-1放射性摄取率亦呈统计学的相关关系。进一步的独立于年龄的部分相关分析表明年龄增长驱动2者的相关。结论正常食蟹猴随年龄增长脑内99mTc-TRODAT-1摄取率的减少是造成食蟹猴上肢取食执行时间延长的关键因素之一。

食蟹猴年龄相关的运动功能减退及其与纹状体多巴胺转运体的关系

目的研究食蟹猴老化过程中运动行为和脑内纹状体多巴胺系统功能变化及两者之间的相关关系。方法选取4岁、10岁和15岁3个年龄组的健康食蟹猴共29只,利用计算机化的网络摄像头视频检测系统和行为分析软件连续采集和分析每个动物8h随意运动活动总量,各年龄组分别选取4只动物用多巴胺转运体(DAT)配体99mTc-TRODAT-1结合单光子发射体层摄影术(SPECT)显像观察脑内纹状体多巴胺转运体放射性摄取率的变化。结果在4岁、10岁和15岁年龄组,8h随意运动活动总量(×106)分别为5·00±1·93,3·28±1·02,2·79±0·67,在10岁和15岁较之4随年龄组分别降低了34·50%和55·71%(P<0·05,P<0·01),但此两个年龄组运动活动总量无显著差异(P>0·05);纹状体99mTc-TRODAT-1放射性摄取率分别为2·98±0·08,2·56±0·12和2·27±0·35,10岁和15岁较之4随年龄组分别降低了14·00%和25·60%,但仅4岁与15岁年龄组存在显著相关关系(P<0·01)。二者均随着年龄的增长呈逐渐减低的趋势,直线回归分析显示两者分别与年龄呈负相关关系(r=-0·57,P=0·001;r=-0·86,P<0·01)。8h随意运动活动总量与纹状体99mTc-TRODAT-1放射性摄取率呈显著的正相关关系(r=0·70,P<0·05)。结论正常食蟹猴老化过程中,脑内多巴胺神经系统功能的减退伴随着运动行为的减少,两者之间的相关关系进一步佐证了运动功能的减退可能是由于纹状体内多巴胺神经元功能减退所致。