索拉非尼辅助治疗中晚期肝细胞癌的可行性及安全性

目的研究索拉非尼辅助治疗中晚期肝细胞癌的可行性及安全性。方法选取我院2015年1月到2018年1月间收治的中晚期肝细胞癌患者60例,随机分为观察组和对照组,每组30例。对照组采用单纯TACE治疗,观察组加用索拉非尼治疗。比较两组患者疗效、随访期间不良反应情况及AFP、ALT、AST、ALB、TBiL水平。结果观察组治疗有效率为53.33%,显著高于对照组36.67%(P<0.05);治疗前,两组AFP、ALT、AST、ALB、TBiL无明显差异(P<0.05),治疗后观察组患者AFP、ALT、AST、TBiL水平低于对照组,ALB水平高于对照组(P<0.05);观察组不良反应发生率为20.00%低于对照组33.33%(P<0.05)。结论索拉非尼辅助TACE治疗中晚期肝细胞癌能够明显改善患者的肝脏功能,减少不良反应的发生,提高治疗疗效,安全可行,值得临床推广。

5-氮杂-2’-脱氧胞嘧啶对乳腺癌细胞CDH4启动子去甲基化的作用

背景与目的:钙黏素(cadherin,CDH)是一类重要的细胞黏附分子,CDH4在恶性肿瘤中表达下降的重要机制之一是基因启动子区的异常甲基化。本研究旨在探讨5-氮杂-2’-脱氧胞嘧啶(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)诱导人乳腺癌细胞株MCF-7中CDH4基因启动子去甲基化后该基因恢复表达情况及功能状态。方法:5-Aza-CdR作用MCF-7细胞后,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法检测5-Aza-CdR对MCF-7细胞CDH4启动子甲基化的影响,RT-PCR检测5-Aza-CdR作用前后MCF-7细胞中CDH4的表达,MTT法检测MCF-7细胞的存活率,并通过划痕试验检测5-Aza-CdR处理前后MCF-7细胞迁移力的变化。结果:5-Aza-CdR逆转了MCF-7细胞CDH4的甲基化状态,CDH4 mRNA表达恢复,且恢复表达程度与5-Aza-CdR药物浓度呈正比,经不同浓度(10、20和40μmol/L)处理后,MCF-7细胞的增殖速度明显减慢,与5-Aza-CdR浓度为0μmol/L的对照组比较,各处理组细胞存活率差异有统计学意义(P<0.05),明显抑制了MCF-7细胞的迁移力。结论:CDH4启动子甲基化导致细胞株MCF-7中CDH4表达沉默,5-Aza-CdR能重新激活乳腺癌细胞株MCF-7细胞中CDH4的表达,抑制MCF-7细胞增殖和迁移,这可能是其引起乳腺癌细胞株MCF-7生物学行为改变的机制之一。

结肠癌并发肠梗阻的外科治疗分析

目的探讨结肠癌并发急性肠梗阻的外科治疗方法。方法对78例接受手术治疗的患者临床资料进行回顾性分析。结果 78例患者均接受手术治疗,其中一期手术治疗57例(73.07%),分期手术21例(26.93%),单纯结肠造瘘5例(6.41%)。其中出现术后并发症15例(19.23%),无病人手术中死亡。结论手术切除是结肠癌并肠梗阻治疗的首选方法,重视术前准备,术中选择合适的术式,是减少并发症、提高疗效的关键。

腹腔镜肝切除术治疗肝内胆管结石37例疗效分析

目的探讨腹腔镜肝切除术治疗肝内胆管结石的可行性与临床疗效。方法 86例肝内胆管结石患者随机分为两组,腹腔镜组37例,开腹组49例,对比两组的手术情况、结石清除率、手术并发症发生率及术后复发率。结果腹腔镜组与开腹组在手术时间、术中出血量、手术效果(优良率)、一期结石清除率、结石复发率比较,差异无统计学意义(P>0.05);但腹腔镜组术后禁食时间、下地活动时间与住院时间、术后并发症发生率均低于开腹组(P<0.05)。结论在严格控制手术适应证与禁忌证的前提下实施腹腔镜肝切除术治疗肝内胆管结石安全可行,能够获得与传统开腹手术相当的临床疗效,且创伤较小、术后恢复较快,并发症较少,值得推广应用。

肝胆外科患者手术部位感染病原菌分布与危险因素分析

目的探讨肝胆外科手术患者术后手术部位感染病原菌特点及相关危险因素,为降低肝胆外科患者术后感染提供依据。方法回顾性分析2010年1月-2014年12月医院肝胆外科收治的860例手术住院患者临床资料,分析其病原菌分布特点,单因素及多因素logistic回归分析术后患者发生手术部位感染的相关危险因素。结果 860例肝胆外科手术患者术后感染125例,感染率为14.53%;标本主要来源于胆汁、血液、腹腔引流液,共检出病原菌154株,其中革兰阴性菌、革兰阳性菌、真菌分别为97、50、7株,各占62.99%、32.47%、4.54%;单因素分析显示,手术时间>240min、术中出血量>800ml、切口类型、留置引流管、腹部手术史是肝胆外科术后患者发生感染的危险因素(P<0.05);多因素非条件logistic回归分析显示,手术时间、术中出血量、切口类型等因素是肝胆外科术后手术部位感染的独立危险因素(P<0.05)。结论需采取相应措施、缩短手术时间、减少术中出血量,以降低肝胆外科术后感染率。

OCT4基因在胃癌细胞系中的表达及其意义

目的检测八聚体结合蛋白-4(octamer-binding protein-4,OCT4)基因在不同分化程度的胃癌细胞株(MKN-28、SGC-7901、BGC-823)及正常胃黏膜细胞株GES-1中的表达情况,研究OCT4基因表达水平与胃癌细胞分化程度和侵袭力的相关性。方法 RT-PCR确定GES-1、MKN-28、SGC-7901、BGC-823中OCT4基因的表达水平,OCT4siRNA转染BGC-823细胞,分别通过荧光定量PCR和Western blot检测干扰OCT4基因表达的效果,并利用Transwell小室法研究OCT4在BGC-823细胞侵袭力中的作用。结果正常人胃黏膜细胞中未检测到OCT4的表达,人胃癌细胞系分化程度越低,OCT4基因表达量越高,低分化人胃癌细胞系BGC-823中OCT4基因表达最高,转染OCT4siRNA的BGC-823细胞内的OCT4mRNA和OCT4蛋白表达量明显下降(P<0.05)。干扰胃癌细胞BG-823中OCT4基因的表达,穿膜细胞数量减少(P<0.05),侵袭力下降。结论 OCT4基因表达量与胃癌细胞的分化程度有关,OCT4基因可能在胃癌细胞的分化中起重要作用,影响胃癌细胞的侵袭能力,其表达程度有望成为胃癌患者恶性度预测的参考指标之一。

hUC-MSCs下调HIF-1α及VEGF表达对NAFLD大鼠肝脏损伤的作用

目的探讨脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)介导HIF-1α/VEGF通路对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝脏损伤的作用。方法 SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、模型对照组(MC组)和MC+hUC-MSCs组。每组鼠数为7只,分别喂食不同饲料和治疗8周。检测大鼠谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。光镜观察大鼠肝脏组织病理改变,计算NAFLD活动度积分(NAS);Western Blot法检测大鼠肝脏组织HIF-1α和VEGF蛋白表达。组间比较采用单因素方差分析、相关分析选用pearson。结果 (1)治疗末,NC组ALT、AST和HOMA-IR分别为(41.1±5.9)U/L,(51.7±5.2)U/L,(1.93±0.22) U/L低于MC组(153.9±7.1)U/L,(169.8±15.9)U/L,(23.20±2.63)U/L差异具有统计学意义(P <0.05);与MC组比较,MC+hUC-MSCs组大鼠ALT、AST和HOMA-IR降低分别为(90.7±8.1) U/L,(110.0±13.1)U/L,(8.43±1.39)U/L差异具有统计学意义(P <0.05)。(2)光镜下NC组肝细胞形态正常;MC组肝细胞呈现脂肪变性,较多细胞核变形,肝小叶排列不齐伴炎症细胞浸润;以上肝组织病理改变在MC+hUC-MSCs组明显改善。与NC组比较,MC组大鼠NAS积分增高;与MC组比较,MC+hUC-MSCs组大鼠NAS积分降低[(0.42±0.23)分vs(9.15±0.41)分、(5.15±0.29)分]。(3)Western Blot法检测肝脏组织HIF-1α和VEGF蛋白表达改变:与NC组比较,MC组大鼠HIF-1α和VEGF蛋白表达均增高(P均<0.05);与MC组比较,MC+hUC-MSCs组大鼠HIF-1α和VEGF蛋白表达均降低(P均<0.05)。单因素相关分析显示大鼠肝脏组织HIF-1α表达与HOMA-IR指数呈正相关(P均<0.05)。而且,大鼠肝脏组织NAS评分与肝脏组织HIF-1α、VEGF表达亦呈正相关(r值分别为0.901、0.874,P均<0.05)。结论 hUC-MSCs对高糖高脂饲料喂养诱导的NAFLD大鼠受损肝脏功能具有改善作用,其机制与其下调HIF-1α/VEGF通路相关。

脐带间充质干细胞介导TLR4/NF-κB炎症通路及氧化应激改善NAFLD大鼠肝脏损伤作用研究

目的探讨脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠肝脏损伤的作用及其与TLR4/NF-κB炎症通路和氧化应激的关系。方法 SD大鼠随机分为3组:正常对照组(NC组)、模型对照组(MC组)和hUC-MSCs治疗组(MC+hUC-MSCs组)。每组大鼠均为10只,分别喂食常规或高糖高脂饲料并给予相应治疗8周,其中MC+hUC-MSCs组每两周尾静脉注射含5×106个hUC-MSCs。检测各组肝指数、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。光镜和电镜观察大鼠肝脏组织病理改变,评估NAFLD活动度积分(NAS);Western Blot法检测大鼠肝脏组织超氧化物歧化酶(SOD)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB (NF-κB)蛋白表达。组间比较采用单因素方差分析。结果干预结束后,(1)NC组TG(0.96±0.29) mmol/L、TC(2.23±0.37)mmol/L、LDL(0.71±0.18)mmol/L、HDL(2.95±0.27)mmol/L,与MC组TG(5.79±0.68)mmol/L、TC(6.08±0.79)mmol/L、LDL(6.06±0.31)mmol/L、HDL(0.75±0.18) mmol/L比较差异具有统计学意义(均P <0.05);与MC组比较,MC+hUC-MSCs组上述指标差异具有统计学意义(均P <0.05)。(2)光镜下NC组肝细胞形态正常;MC组出现肝细胞脂肪变性、肝小叶排列不齐及炎症细胞浸润;而MC+hUC-MSCs组肝组织病理改变明显好转。与NC组比较,MC组肝组织NAS升高;与MC组比较,MC+hUC-MSCs组NAS降低[(0.36±0.16)分vs(8.72±0.35)分、(4.78±0.51)分,P <0.05]。电镜下亦观察到与MC组比较,MC+hUC-MSCs大鼠肝细胞脂肪变性、胞核变形、内质网和线粒体形态异常明显改善。(3)与NC组比较,MC组大鼠TNF-α、IL-6、8-OHdG、TLR4和NF-κB蛋白表达均增高(均P <0.05),SOD降低(P <0.05);与MC组比较,MC+hUC-MSCs组大鼠上述指标改善(P <0.05)。结论 hUC-MSCs通过抑制氧化应激和TLR4/NF-κB而保护NAFLD大鼠肝脏功能。

脐带间充质干细胞对内毒素血症诱发的大鼠急性肝功能损伤的影响

目的评价脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)对内毒素血症诱发的大鼠急性肝功能损伤的影响及其与凋亡机制的关系。方法 6周龄雄性SD大鼠18只,随机分为3组,分别是对照组(C组)、内毒素血症组(M组)和内毒素血症+hUC-MSCs治疗组(M+cells组),每组6只。大鼠腹腔注射5 mg/kg脂多糖(LPS)诱导内毒素血症模型,并经尾静脉注射含20×106个hUC-MSCs。4 h时检测血清谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT),ELISA方法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6),HE常规染色鉴定肝脏组织病理,Western Blot法检测肝脏组织抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax、凋亡信号调节激酶1(ASK1)、应激活化蛋白激酶即JUN氨基末端激酶(JNK)蛋白的表达。多组间比较采用单因素方差分析,相关分析选用pearson。结果(1)C组AST、ALT、TNF-α和IL-6浓度分别为(74.66±6.39)U/L、(40.07±6.07)U/L、(37.74±3.08)ng/L和(0.42±0.07)ng/L;与M组比较(310.75±9.13)U/L、(107.04±10.04) U/L、(160.32±4.88)ng/L和(0.90±0.09)ng/L,差异具有统计学意义(P?均?<0.05),M组AST、ALT、TNF-α、IL-6浓度分别为(310.75±9.13)U/L、(107.04±10.04) U/L、(160.32±4.88) ng/L和(0.90±0.09)ng/L,与M+cells组比较(204.49±15.36) U/L、(71.24±7.34) U/L、(117.61±9.37) ng/L和(0.60±0.10)ng/L,差异具有统计学意义(P?均?<0.05)。(2) C组大鼠肝细胞形态正常,可见肝小叶结构清晰,肝汇管区无炎性细胞浸润,M组大鼠肝小叶散在点状坏死肝细胞伴炎性浸润,肝细胞间隙散布增生的Kuffer细胞,M+cells组大鼠肝小叶炎性细胞浸润及肝细胞间隙Kuffer细胞浸润改善。(3)与C组比较,M组大鼠肝脏组织JUN、ASK1和Bax蛋白表达均增高(P?均?<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P <0.05);与M组比较,M+cells组大鼠肝脏组织JUN、ASK1和Bax蛋白表达降低(P?均?<0.05),Bcl-2蛋白增加(P <0.05)。(4)单因素相关分析显示大鼠血清ALT、AST与TNF-a指数呈正相关(r值分别为0.9580、0.9865,P均<0.05),大鼠血清ALT、AST与IL-6指数呈正相关(r值分别为0.9892、0.9630,P?均?<0.05),大鼠血清ALT、AST分别与BAX、ASK1、JNK指数均呈正相关(r值分别为0.9993、0.9851、0.7901、0.9864、0.9557、0.7128,P?均?<0.05),大鼠血清ALT、AST分别与BCL-2指数均呈负相关(r值分别为-0.8824、-0.9338,P?均?<0.05),大鼠血清TNF-α分别与BAX、ASK1、JNK指数均呈正相关(r值分别为0.9466、0.8958、0.6025,P均<0.05),大鼠血清TNF-α与BCL-2指数呈负相关(r=-0.6025,P?均?<0.05),大鼠血清IL-6分别与BAX、ASK1、JNK指数均呈正相关(r值分别为0.9941、0.9997、0.8679,P均<0.05),大鼠血清IL-6与BCL-2指数呈负相关(r=-0.8078,P?均?<0.05)。结论 hUC-MSCs具有减轻内毒素血症大鼠急性肝功能损伤的作用,其机制与抑制肝脏细胞凋亡相关。

癌胚抗原启动子驱动双自杀基因对裸鼠大肠癌移植瘤的作用

目的探讨癌胚抗原启动子（cp）驱动的双自杀基因系统Cp-CDglyTK对裸鼠大肠癌移植瘤的治疗作用。方法pcDNA3．1（-）Cp—CDglyTK质粒转染癌胚抗原阳性的SW480细胞和癌胚抗原阴性的HeLa细胞，反转录PCR检测目的基因的表达；给予不同浓度的前体药物5氟胞嘧啶（5-FC）及更昔洛韦（GCV）处理，用四甲基偶氮唑盐（MTr）法评估杀伤效应和旁观者效应。96只裸鼠在右侧腋窝皮下移植SW480细胞，72只移植HeLa细胞，建立大肠癌移植瘤模型。前体药物治疗实验中，取SW480和HeLa移植瘤裸鼠各48只，各分4组（I-Ⅳ，V～Ⅷ组，n=12），分别瘤体注射磷酸盐缓冲液（PBS）、GCV联合5-FC，腹腔注射PBS、GCV联合5-FC。自杀基因联合前体药物治疗实验中，余下48只SW480移植瘤裸鼠分为Ⅸ～Ⅻ组（n=12），24只HeLa移植瘤裸鼠分为ⅪIl～Ⅲ组（n=12），均经瘤体注射脂质体Lipofectamine@和质粒Cp—CDglyTK，再由腹腔注射药物（Ⅸ组：PBS，X组GCV，XI组：5-Fc，Ⅻ组：GCV联合5．FC，Ⅻ组：PBS，m组：GCV联合5-FC）。记录肿瘤体积、最终肿瘤重量和生存时间，比较分析各组裸鼠的治疗效果。结果转染质粒的SW480细胞有CDglyTK基因的表达，GCV联合5-FC对转染质粒的SW480细胞的抑制率（59．87％4-0．21％）明显高于HeLa细胞（9．90％±0．09％，P〈0．01），GCV与5-Fc联合用药对转染质粒的SW480细胞的生长抑制率和旁观者效应大于单一使用GCV或5-Fc（均P〈0．05）。II、IV、VI、Ⅷ组分别与对照组I、Ⅲ、V、Ⅶ组比较，肿瘤体积、最终瘤重和生存期差异均无统计学意义（均P〉0．05）。Ⅻ组最终肿瘤体积和最终瘤重均小于Ⅸ组、X组和Ⅺ组[（150．0±3．2）比（522．5±1．9）、（256．8±10．4）和（260．7±2．2）mm，（54．1±10．4）比（682．0±12．O）、（251．8±15．1）和（271．6±17．7）mg，均P〈0．05]；Ⅻ组的肿瘤生长抑制率和生存时间大于X组和Ⅺ组[92．1％比63．1％、60．2％，（25．7±0．8）比（21．8±0．5）、（18．0±0．9）d，均P〈0．05]。Ⅲ和）皿组肿瘤体积、最终瘤重和生存时间差异均无统计学意义（均P〉0．05），刖组的肿瘤生长抑制率仅为0．9％。结论Cp．CDglyTK在荷瘤裸鼠体内通过脂质体的介导，能靶向作用于癌胚抗原阳性的大肠癌细胞，并通过前体药物显著抑制裸鼠大肠癌移植瘤。