非洲猪瘟的流行现状及防控措施

非洲猪瘟于1921年在肯尼亚首次发现,由非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的非洲猪瘟病毒(ASFV)感染引起的,仅1个血清型,但可分为24个基因型,ASFV基因组为双股线性DNA,大小为170~190kb,该病毒在自然环境中抵抗力较强,室温干燥条件或冰冻数年均能存活,是对全世界家猪和野猪最具毁灭性的疾病病原之一。

一株猪源化脓隐秘杆菌的分离鉴定及对促炎细胞因子分泌的影响

检测了重庆市璧山区一起屠宰猪肉中出现化脓性病变样本的病原菌,并研究其药物敏感性、毒力基因分布及其对巨噬细胞分泌IL-6和TNF-α的影响.从样本中分离获得一株具有极强溶血性的菌株(BS-1株),其16S rRNA序列与GenBank中的猪化脓隐秘杆菌序列(LC500012.1)相似度最高,为97.26%.系统发育分析显示BS-1株与其他化脓隐秘杆菌处于同一分支.药敏试验显示BS-1株除对克拉霉素和罗红霉素中度敏感外,对青霉素G、庆大霉素、万古霉素、诺氟沙星、氯霉素、米诺环素(甲)和阿莫西林等耐药.毒力基因检测发现BS-1株含有Plo,NanH,NanP,FimA基因,无CbpA和FimC基因.细胞因子检测证实BS-1株能诱发巨噬细胞IL-6和TNF-α分泌水平显著增加.试验结果表明:该猪肉中出现化脓性病变的病原菌为化脓隐秘杆菌,该菌携带了多种毒力基因,对常见抗菌药物耐药性严重.

伪结核棒状杆菌pld基因无痕缺失株构建及其生物学特性及致病性研究

伪结核棒状杆菌是一种可以感染多种动物和人的兼性胞内寄生病原,主要引起被感染动物慢性化脓性炎症反应。【目的】为进一步评价磷脂酶D基因(pld)在伪结核棒状杆菌感染致病中的作用。【方法】本研究采用同源重组技术,在不引入外源基因情况下,构建伪结核棒状杆菌pld无痕缺失株。通过比较pld缺失株和野生株的菌落形态及生长曲线、体外对巨噬细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放及其在胞内的繁殖情况以及体内感染小鼠致死率及促炎细胞因子分泌水平,研究pld与该病原感染致病之间的关系。【结果】无痕缺失pld对伪结核棒状杆菌的菌落形态及生长无明显影响。与野生株ATCC19410和XH02相比,ATCC19410Δpld和XH02Δpld失去了与马红球菌ATCC6939的协同溶血功能,所感染巨噬细胞的LDH释放水平显著下降,胞内细菌数量显著降低;体内试验发现ATCC19410Δpld对小鼠的致死率、肝脏和脾脏载菌量以及腹水及脏器促炎细胞因子水平均低于ATCC19410。【结论】成功构建了伪结核棒状杆菌pld无痕缺失株。证实pld在该病原体外感染引发巨噬细胞死亡以及体内感染小鼠致病中具有重要作用。

伪结核棒状杆菌感染影响巨噬细胞IL-1α表达、成熟及分泌的机制研究

【目的】伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis,Cp)感染动物常引起内脏和体表淋巴结脓肿,以被感染部位炎性细胞因子大量增加为特征。研究Cp感染小鼠巨噬细胞对IL-1α成熟分泌的影响及机制。【方法】采用荧光定量PCR、ELISA和Western blotting等方法,首先检测Cp(ATCC19410、XH02)及其磷脂酶D基因(pld)缺失株(ATCC19410Δpld、XH02Δpld)感染巨噬细胞对IL-1α表达及成熟分泌的影响,进而以Ca^(2+)螯合剂(EDTA、EGTA+Mg^(2+)和BAPTA-AM)、calpain抑制剂(calpain inhibitorⅢ、calpain inhibitorⅣ和EST)处理巨噬细胞,观察对Cp感染介导IL-1α成熟分泌的影响。【结果】Cp感染巨噬细胞后,IL-1αmRNA表达及分泌显著增加,与ATCC19410、XH02感染巨噬细胞相比,ATCC19410Δpld、XH02Δpld感染细胞IL-1α表达及分泌显著下降。Cp感染引起巨噬细胞内Ca^(2+)浓度显著增加,calpain活性增强,而缺失pld的Cp感染巨噬细胞内Ca^(2+)浓度显著下降,calpain活性降低。EDTA、EGTA+Mg^(2+)、BAPTA-AM、calpain inhibitorⅢ、calpain inhibitorⅣ处理Cp感染的巨噬细胞,巨噬细胞的IL-1α表达及分泌显著下降。【结论】Cp感染可激活巨噬细胞IL-1α表达和成熟分泌,磷脂酶D参与Cp感染巨噬细胞介导的IL-1α成熟分泌。Cp感染巨噬细胞介导IL-1α成熟与分泌与胞内Ca^(2+)浓度增加、激活钙蛋白酶有关。