日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗抗生殖免疫的研究

目的 探讨日本血吸虫组织蛋白酶ＢＤＮＡ疫苗的保护。方法 分别用Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫昆明鼠和ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠，攻击感染后６ｗ 计数成虫负荷及粪便和组织内虫卵数。结果 用构建的Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫小鼠可影响成虫发育，肝组织减卵率为５９－３％～６５－０％ ，肠组织减卵率为５７－６％ ～６２－１％ ，粪便减卵率为８６－５％ 。结论 Ｓｊ３１ＢＩＮ 可诱导小鼠产生抑制雌虫生殖的免疫力。

日本血吸虫铁蛋白基因的筛选、克隆与表达

采用Ｓｊ未成熟虫卵抗原超免疫兔血清（ＲＡＳｊＩＥＡ）对Ｓｊ成虫ｃＤＮＡ文库进行筛选，并对可能具有抗日本血吸虫生殖／卵胚发育潜能的抗原分子进行克隆、表达。常规法免疫筛选Ｓｊ成虫文库，获得单个阳性克隆，ＰＣＲ扩增后琼脂糖电泳测定基因大小，ＤＮＡ测序，基因库搜索，找出同源基因。共鉴定出６个不同的基因克隆。选择其中的铁蛋白（ＳｊＦｅｒ）基因亚克隆于ｐＧＭＣ载体。重组蛋白以ＧＭＣＳＦ（粒细胞巨噬细胞集落刺激因子）－ＳｊＦｅｒ融合蛋白的形式在细菌中高效表达。表达产物仅溶于８Ｍ尿素溶液中，分子量为４０ｋＤ。

日本血吸虫病循环抗原检测的合作研究(英文)

１９９３年５月，在湖南省寄生虫病防治研究所（湖南岳阳）举行了一次有关日本血吸虫循环抗原检测的联合测试研讨会，来自全国流行省（市）的８个单位派员及携带自己在过去几年中研制的检测系列（包括试剂和技术方法）参加了此项研究，在同一时间和地点，对同一批５７０份血清样本（包括正常人、现症病人、治后不同时期及其他常见寄生虫病人血清）进行了双盲法检测。结果表明：假阳性率除检测系统Ｂ为２％以外，其余７个系统的假阳性率在１４％—４６％之间；敏感性在急性病例为９５％—１００％，慢性病例的检出率在检测系统Ａ及Ｆ分别为７３．３％及７２．７％，其余在７０％以下；各系统测试治后１年内血清的转阴率未超过１／３，２年内转阴率除系统Ｅ为６０％以外，其余未超过５０％（系统Ｈ因敏感性太低除外）。以上说明，参加合作研究的８个测试系统尚需从提高特异性和／或敏感性两个方面进行改进。至于疗效考核不满意的原因，除与试验的特异性不高和治疗效果差有关外，需作进一步分析。

KLH与日本血吸虫抗原交叉性的研究

已证明钥孔(?)血兰蛋白(KLH)与曼氏血吸虫童虫表面抗原中的38KD分子具有相同的抗原决定簇,本文进一步证明,与KLH共同的抗原决定簇亦存在于日本血吸虫尾蚴表膜或/及分泌物、虫卵抗原的可溶性成份而不存在于成虫抗原中。抗KLH血清引起阳性的尾蚴膜反应但不引起阳性的环卵沉淀试验,与可溶性虫卵抗原的交互抑制试验结果表明二者的抗原性部份交叉。

曼氏血吸虫童虫表面抗原单克隆抗体的制备和特性分析

目的制备抗曼氏血吸虫童虫表面抗原的单克隆抗体。方法采用活的５小时龄童虫和童虫排泄分泌物经静脉或腹腔注射免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠一次，免疫后取脾细胞与骨髓瘤细胞融合，用间接荧光抗体技术（ＩＦＡ）筛选阳性克隆；用琼脂双扩散试验鉴定单抗类别；用免疫沉淀反应结合ＳＤＳ—ＰＡＧＥ分析单抗所识别的靶抗原分子；用ＩＦＡ分析单抗的阶段和种的特异性。结果获得２５株杂交瘤细胞株，对其中５株（Ｍ４２，Ｍ４３，Ｍ４４，Ｍ４５，Ｍ６７）的特性进行了分析，４株属ＩｇＭ，１株属ＩｇＧ２ａ。５株单抗均识别童虫表面抗原中的２００ｋＤ和２０ｋＤ的两个分子。５株单抗除Ｍ４２外，其余４株单抗没有阶段和种特异性。结论该研究成功地制备了抗曼氏血吸虫童虫表面抗原的单克隆抗体，提供了一种简便、快速及节约抗原的单抗制备法。

血吸虫疫苗的研究进展

人畜共患的血吸虫病的危害是人所共知的.长期以来,人们一直在寻找能够控制与消灭血吸虫病的有效途径.血吸虫疫苗的研究,给人类带来了新的曙光,疫苗的研究仍然是当前的研究热点与难点.湘雅医学院血吸虫病研研室在疫苗的研究方面取得了可喜的成绩,30多个新基因的发现,及对部分新的基因的进一步研究,为血吸虫疫苗的研制提供了大量的科学依据.下面主要从核酸疫苗、表位疫苗和蛋白质疫苗三方面来阐述该研究室血吸虫疫苗的研究进展.……

东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库

东方田鼠 (Microtusfortis ,Mf)对日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)感染具有抗性 .为探讨Mf感染Sj后是否产生针对虫体某些特异抗原分子的免疫应答 ,用Mf感染血清对Sj成虫cDNA文库进行免疫筛选 .经初筛和复筛 ,共筛选出 12个阳性克隆 .这些阳性克隆经辅助噬菌体自动剪切后PCR扩增显示 ,插入的SjcDNA片段大小在 3 0 0bp至 1 8kb之间 ,其中 1 8kb片段 5个 ,1kb片段 1个 ,3 0 0bp片段6个 .经DNA测序分析 ,鉴定出 3个未曾报道过的Sj新基因 ,分别命名为Sj Mf1、Sj Mf2和Sj胞质氨基肽酶 ,并在GenBank登记注册 .结果说明 ,Mf感染血清可识别Sj的特异性抗原分子 ,这些抗原分子的免疫保护作用值得进一步研究 .

日本血吸虫二价DNA疫苗的免疫保护效果研究

目的 观察本课题组所构建日本血吸虫大陆株二价 DNA疫苗 VR10 12 - Sj GST- Sj31和VR10 12 - Sj GST- Sj32的免疫保护效果。方法 用纯化质粒免疫昆明鼠 :6 0只小鼠分为 5组 ,2个对照组的小鼠分别于股四头肌注射生理盐水 10 0μl或空质粒 VR10 12 10 0μg,3个实验组的小鼠则同法分别注射 VR10 12 - Sj GST、VR10 12 - Sj GST- Sj31和 VR10 12 - Sj GST- Sj32各 10 0 μg,每隔 3周免疫1次 ,共免疫 3次 ,以间接免疫荧光法观察 VR10 12 - Sj GST- Sj31、VR10 12 - Sj GST- Sj32在肌肉组织中的表达后 ,每只鼠经腹部感染 10条尾蚴 ,4 5 d后剖杀计数各小鼠成虫数及肝卵数 ,并用 EL ISA分析小鼠血清中的抗体。结果 EL ISA分析表明 ,第 3次免疫后小鼠出现特异性 Ig G抗体。与生理盐水组比较 ,3个实验组的减虫率分别为 33.90 %、33.90 %及 2 7.14 % (P <0 .0 1) ,减卵率分别为6 1.86 %、74 .88%及 6 8.87% (均为 P<0 .0 1) ,每雌肝减卵率分别为 4 4 .6 7%、5 9.4 0 %、5 4 .32 % (P<0 .0 1)。与 VR10 12 - Sj GST组相比 ,VR10 12 - Sj GST- Sj31和 VR10 12 - Sj GST- Sj32组的减卵率分别为34.19% (P<0 .0 1)、18.5 1% (P<0 .0 1) ,每雌肝减卵率为 2 6 .6 2 %、17.4 6 % (P<0 .0 1)。结论 DNA疫苗 VR10 12 -

重组日本血吸虫铁蛋白粘膜免疫诱导小鼠保护力的研究

目的 探讨重组日本血吸虫铁蛋白 (r Sj Fer)粘膜免疫诱导小鼠抗血吸虫的保护性免疫。 方法 实验鼠分为 8组 ,每组 10只 ,包括 r Sj Fer、霍乱毒素 B亚单位 (CTB)和 r Sj Fer+CTB灌胃免疫组 ,以及 r Sj Fer、CTB和r Sj Fer+CTB滴鼻免疫组 ,PBS灌胃及滴鼻对照组。在第 3次免疫后 2 wk,经腹部感染日本血吸虫尾蚴 4 0± 1条 ,4 5d后解剖观察减虫率和减卵率。在免疫前和感染前尾静脉采血和取粪样 ,EL ISA检测血清 Ig A、Ig G及粪内 s Ig A水平。 结果 灌胃及滴鼻各组减虫率依次为 3.98%、3.77%、2 5 .5 7%及 7.6 9%、4 .5 0 %、33.35 % ,每克肝减卵率依次为3.76 %、2 .4 6 %、34.75 %及 4 .4 0 %、0 .0 6 %、6 0 .10 %。 结论 r Sj Fer粘膜免疫能诱导小鼠产生抗血吸虫的保护性免疫。

抗日本血吸虫生殖及卵胚发育免疫的研究

抗日本血吸虫生殖及卵胚发育免疫的研究是血吸虫疫苗研究的重要策略之一．本研究探讨了未成熟卵等不同抗原免疫诱导宿主产生抗日本血吸虫生殖及卵胚发育免疫的效果．研究证明SIEA26－28kDa抗原能诱导小鼠产生抑制雌虫生殖和卵胚发育成熟的免疫力．与对照组比较，SIEA26－28kDa抗原免疫鼠减虫虽不明显，但肝组织内每雌产卵数、成熟卵数和粪卵数（EPG）分别减少48．1％、83．6％、87．3％，死亡卵数明显增加（t=3．91，P＜0.01）．此外，未纯化的SIEA和纯化的SIEA26－28kDa、Sj31／32kDa抗原免疫组约见雌虫子宫内虫卵数下降，分别达40．9％、54．8％、53．2％，而成熟虫卵可溶性抗原（SEA）和SIEA－TGP抗原免疫未见上述故应．采用未成熟抗原或Sj31／32kDa、SIEA26－28kDa等三联抗原，分别对大动物（牲猪）进行免疫．与对照组比较，免疫猪肝脏表面虫卵结节的数量显著下降（86．5％），组织中虫卵数、粪卵数分别下降78.0％和90.6％．

日本血吸虫31/32kDa分子抗原快速诊断试剂盒的研制与现场应用

目的基于纯化的日本血吸虫31／32kDa分子抗原，建立一种敏感、特异、简便、快速诊断血吸虫病的试剂盒。方法采用Chappell方法分离纯化Sj31／32kDa抗原并建立快速ELISA，检测急、慢性血吸虫病人，并以肺吸虫病人、肝吸虫病人及正常人血清作为平行对照。结果血吸虫病人457例，阳性检出率为94．3％，67例肺吸虫病人及76例肝吸虫病人血清均未出现明显交叉反应，正常人群假阳性率为1％。结论提示采用纯化的优势诊断抗原分子建立的快速诊断试剂盒有较好的现场应用潜能，且具有简便、快速、无需特殊设备等优点，值得推广应用。

丙烯硫脲对日本血吸虫感染小鼠肝脏病变的影响

目的 观察丙烯硫脲对日本血吸虫感染小鼠肝脏病变的影响。方法 小鼠感染日本血吸虫尾蚴 2 2d后 ,隔日一次按 30 0mg/kg腹腔注射酚酶抑制剂丙烯硫脲 ,至感染后 4 2d剖杀动物 ,观察日本血吸虫感染小鼠肝脏的病理变化。结果 与感染对照组相比 ,实验组小鼠肝脏表现为散在分布的炎性细胞浸润灶 ,中心未见虫卵 ,仅见一些颗粒状物质。其平均直径和面积均较感染对照组的典型虫卵肉芽肿显著减小 (P <0 .0 1)。结论 感染小鼠腹腔注射丙烯硫脲后肝脏内未见虫卵肉芽肿的形成。

日本血吸虫31／32kDa抗原纯化及诊断应用的研究(英文)

采用超凝胶柱层析结合超滤、透析、沉淀等方法分离纯化了日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ抗原。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、银染和免疫印迹分析，证明免疫及生化纯度。银染及ＰＡＳ证实此抗原是一种不含糖的多肽类组分。用于ＥＬＩＳＡ和ＩＨＡ诊断日本血吸虫病，与ＳＥＡ同样敏感，而特异性明显较优。

日本血吸虫31kDa组织蛋白酶B DNA疫苗保护性免疫效果观察

目的 观察日本血吸虫 31k Da组织蛋白酶 B DNA疫苗 (Sj31B1 N)在小鼠体内的保护性免疫效果。方法 用 Sj31B1 N和 Sj31B1 N +p UC DNA疫苗肌注免疫 BAL B/ C小鼠 ,用空白质粒载体VR10 12做对照 ,在 0、4、8周共免疫 3次 ,每次免疫前及末次免疫后 4周从尾静脉采血收集血清 ,经EL ISA法检测小鼠血清抗体升高时 ,用日本血吸虫尾蚴攻击感染小鼠。结果 Sj31B1 N和 Sj31B1 N+p U C减虫率分别为 2 4.2 %和 2 2 .0 % ;肝卵减少率分别为 34 .9%和 39.5 % ,每雌肝卵减少率分别为 30 .4%和 35 .3%。结论 小鼠接种 Sj31B1 N后对日本血吸虫感染有减虫、减卵作用及抗雌虫生殖的作用。加质粒佐剂 p

Cystatin-ELISA法诊断日本血吸虫病的研究

目的 建立一种敏感、高特异性的血吸虫病诊断方法。方法 应用 Cystatin捕获血吸虫吐出物中的半胱氨酸蛋白酶 ,再进行 EL ISA试验检测日本血吸虫 (Sj)病人血清中相应的特异抗体。结果 检测 12 0例慢性血吸虫病人血清 ,84例非疫区正常人血清和 36例华支睾吸虫病人血清 ,Cys-tatin- EL ISA检测 Sj病人阳性率为 98.4 % ,与正常人及华支睾吸虫病人无交叉反应。其敏感性(98.4 % )与 SEA- EL ISA法的敏感性 (93.4 % )比较无明显区别 (P>0 .0 5 ) ,但特异性显著高于后者(P<0 .0 5 )。 Cystatin- EL ISA敏感性和特异性亦均高于 AWA- EL ISA和 ES- EL ISA。结论 Cys-tatin- EL ISA敏感性高 ,特异性强 ,是一种有效的诊断血吸虫病的方法。

应用KLH-ELISA及KLH-IHA诊断血吸虫病的研究

已经证明,日本血吸虫尾蚴及虫卵具有与钥孔(虫戚)血兰蛋白(Keyhole Limpet Haemocyanin,KLH)的共同抗原决定簇。抗KLH血清能引起尾蚴膜反应(CHR),但不引起环卵沉淀反应(COP)。本文试用KLH检测急、慢性血吸虫病,并与常规使用的SEA进行了对比。

日本血吸虫成虫31/32kD抗原诱导小鼠产生抗卵免疫的初步研究

本文采用超凝胶柱层析法分离纯化日本血吸虫31/32kD抗原.免疫小鼠诱导保护性免疫力.结果表明,这种保护性免疫力仅有抗卵效果,无抗成虫作用.31/32kD免疫小鼠后可使小鼠粪卵减少63.8%—78.3%;雌虫子宫内虫卵降低53.2%;肝、肠中死卵量明显增加,说明31/32kD抗原可诱导小鼠产生抗卵免疫干扰虫卵形成,加速虫卵死亡,提示它可能是一种有希望的抗血吸虫病理疫苗的候选抗原.

噬菌体表达短肽模拟旋毛虫抗原表位及其抗血吸虫保护性免疫研究

目的 从噬菌体随机肽库中筛选出模拟旋毛虫特异性抗原表位的短肽分子 ,探讨其抗血吸虫的交叉免疫保护效果。 方法 以纯化的旋毛虫感染鼠血清IgG为配基 ,亲合筛选法富集特异性噬菌体 ,随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性 ;混合噬菌体克隆经皮下免疫小鼠 3次 ,攻击感染后第 4 5天剖杀小鼠 ,观察减虫和减卵效果。 结果 经 3轮筛选 ,特异性噬菌体得到了有效的富集 ,第三轮洗脱噬菌体的产量约为第一轮的 15 0倍。随机挑取 2 4个噬菌体克隆经ELISA测定 ,有 2 1个克隆能与旋毛虫感染鼠血清IgG特异性反应。与对照组相比 ,混合噬菌体克隆免疫小鼠的减虫率与减卵率分别为 4 2 8%与 6 6 3% (P <0 0 0 1)。 结论 利用噬菌体随机肽库技术可获得模拟旋毛虫特异性抗原表位的短肽分子 ,这些短肽分子能诱导明显的抗血吸虫的保护性免疫。

日本血吸虫虫卵与旋毛虫肌蚴间相似抗原的研究

目的 :分析日本血吸虫虫卵与旋毛虫肌蚴间共同抗原的相似程度。方法 :应用 EITB和 ELISA技术对此 2种寄生虫可溶性抗原进行了血清学交叉反应分析。结果 :EITB显示 :在Ts ML A中 ,4 4、 53、 60、 64、 66/ 70 k Da和约 10 0 k Da的抗原为 Sj IRS识别 ,而 31、 4 2、 4 6、 51/53和 58/ 60 k Da成分为 α- Sj EARS识别 ;在 Sj EA中 ,4 6、58和 64k Da抗原为 Ts IRS识别 ,58、60、64和 70 k Da成分为α- Ts MLARS识别。EL ISA显示 :在 Sj IRS中抗 Ts抗体滴度显著高于在Ts IRS中所含抗血吸虫卵的抗体滴度。结论 :日本血吸虫卵与旋毛虫肌蚴间存有较多的共同抗原决定簇 ,但两者间的相似程度有明显差异。

日本血吸虫重组铁蛋白的粘膜免疫效果研究

目的 构建日本血吸虫铁蛋白 (SjFer)原核表达质粒。以壳聚糖作佐剂 ,探讨重组日本血吸虫铁蛋白(rSjFer)粘膜免疫诱导小鼠抗血吸虫感染的保护力。 方法 用PCR扩增SjFer基因 ,亚克隆入原核表达载体pTWIN1上intein 2的N端 ,经PCR、限制性酶切筛选阳性重组子并经测序鉴定。将阳性重组子转化大肠埃希菌 ,在低温和低浓度的异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)条件下诱导表达可溶性重组融合蛋白。利用重组融合蛋白的壳聚糖结合功能域 (CBD)结合位点 ,使其与壳聚糖结合 ,经滴鼻免疫小鼠 ,于第 3次免疫后 2周攻击感染 ,用减虫率和减卵率表示保护力。感染前采血和唾液用ELISA检测抗体。 结果 成功克隆并表达了rSjFer。rSjFer以壳聚糖作佐剂经滴鼻免疫获得了 3 5 .5 1%的减虫率和 5 2 .17%的减卵率。免疫后小鼠血清IgG和IgA及唾液SIgA抗体水平与对照组比较均明显升高。 结论 获得了rSjFer ,该蛋白以壳聚糖作佐剂经粘膜免疫能诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力。