登革病毒包膜EDⅢ蛋白广谱中和抗体识别表位鉴定

目的分析登革病毒广谱中和抗体识别EDⅢ蛋白的表位特征。方法以对4个血清型登革病毒具交叉中和保护作用的单抗为钓饵筛选噬菌体展示肽库,用ELISA鉴定与单抗结合的噬菌体克隆,提取阳性噬菌体克隆的DNA测序,对测序结果进行生物信息学分析,并选择阳性噬菌体克隆制备抗血清鉴定噬菌体展示肽的抗原性。结果获得了与单抗2B11A35和2D73A7结合的噬菌体展示肽克隆,并证实其模拟EDⅢ蛋白的构象性表位,生物信息学分析提示单抗2B11A35和2D73A7识别EDⅢ蛋白EF loop附近区域;用2B11A35筛选噬菌体克隆免疫小鼠所获抗血清可与登革1、3及4型EDⅢ蛋白及2型病毒感染细胞结合。结论发现了1个EDⅢ蛋白上保守的保护性构象表位,为登革热疫苗的设计提供了有效组分。

标本保存时间对登革热病毒核酸及NS1抗原检测的影响

目的:探讨4℃保存血液标本时间对登革热病毒核酸及抗原检测结果的影响。方法:2014年广州登革热流行期间,收集13份登革热疑似病例急性期全血标本,分别在采集后2、6、12、24、48、72、96 h取血清进行登革热病毒核酸及抗原检测。结果:12份经核酸和抗原测定为阳性的登革热患者血清标本,7个不同时间点的核酸和抗原检测结果均阳性,各时间点检测结果经重复测量资料方差分析,无统计学差异(PCR:F=1.000,P>0.05;ELISA:F=0.709,P>0.05);1份阴性标本在7个时间点两种方法结果均为阴性。结论:4℃保血液标本4 d内,对登革热病毒核酸及抗原检测结果没有影响。

苦瓜籽蛋白的提取及抗菌作用研究

目的：探讨用缓冲液浸提法粗提取苦瓜籽蛋白的方法,研究苦瓜籽蛋白的抗菌作用.方法：将苦瓜籽粉过滤、浸提、离心、浓缩,用BCA法测定粗提取苦瓜籽蛋白的浓度,用已知浓度的苦瓜籽粗提取蛋白做抗菌实验.结果：粗提取蛋白质浓度为69.5mg/ml,苦瓜籽蛋白对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、表皮葡萄球菌、解淀粉芽孢杆菌表现出明显的抑菌活性.结论：缓冲液浸提法操作简便,且能获得高浓度蛋白,可抑制金黄色葡萄球菌等常见菌的生长繁殖.

睑缘蠕形螨的检查及其感染情况分析

背景蠕形螨感染引起的睑缘炎在临床上常见，目前中国对蠕形螨检查的相关研究中提及的方法多样，缺乏统一的操作程序介绍和评价。如何为睑缘蠕形螨感染的临床诊断提供快速、准确的检查方法仍需进一步研究。目的建立睑缘蠕形螨临床检查方法及操作流程，并分析睑缘蠕形螨感染情况。方法采用前瞻性研究设计。纳入2015年1—12月于中山大学中山眼科中心诊断为睑缘炎及其他伴眼痒、眼干等症状的患者1052例。裂隙灯显微镜下行患眼睑缘睫毛根部拍照，每眼眼睑拔取3根睫毛行蠕形螨检查，照相记录。3根睫毛中任意1根裂隙灯显微镜下发现蠕形螨或虫卵者，即为睑缘蠕形螨检查阳性。结果1052例睑缘炎患者中发现蠕形螨感染者582例，阳性率为55．3％。随着年龄的增加，睑缘蠕形螨感染率增高，〉60岁组患者感染率最高，各年龄组间整体比较差异有统计学意义（χ^2=10．547，P=0．001）。不同性别间蠕形螨感染率比较差异无统计学意义（P=0．352）；该法室内检验周转时间（TAT）为（11．4±5．2）min。结论建立了裂隙灯显微镜下采样及显微镜观察记录睑缘蠕形螨感染的检查方法和操作规程。该方法简便快速，规程具有操作性，可推广应用于临床睑缘蠕形螨感染疾病的辅助诊断。

1型登革病毒包膜蛋白功能区在293T细胞中的表达与鉴定

目的在293T细胞中获得可溶性表达的1型登革病毒（DENV1）包膜（E）蛋白。方法PCR扩增DENV1-E蛋白功能区（1～394aa）基因并克隆到Psectag2B-Fc真核表达载体中构建表达质粒，脂质体法转染293T细胞，经2mg／ml Zeocin筛选，免疫荧光法鉴定所获细胞克隆：Protein-G亲和层析纯化DENV1-E-Fc重组融合蛋白，间接免疫荧光和蛋白免疫印迹法鉴定蛋白的完整性和抗原性。结果获得稳定可溶性表达重组融合蛋白的细胞克隆，蛋白产量约为25μg／1×107个细胞，纯化得到的DENV1-E-Fc蛋白相对分子质量约90×103，该蛋白可与识别天然构象E蛋白的单克隆抗体结合，并与免疫动物血清有良好的反应性。结论在真核细胞中成功获得可溶性表达的DENV1-E-Fc重组融合蛋白，E蛋白功能区保持完整且具备天然的构象表位和良好的抗原性，为包膜蛋白的保护性抗原表位和功能研究奠定了基础。