自噬在镉致小鼠睾丸血-睾屏障损伤中的作用

目的:探究自噬在氯化镉致小鼠睾丸血-睾屏障(BTB)损伤中的作用。方法:将20只4周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组[0 mg/(kg·d)]、低剂量组[0.5 mg/(kg·d)]、中剂量组[1.0 mg/(kg·d)]和高剂量组[2.0 mg/(kg·d)],腹腔注射氯化镉,连续28 d。采用HE染色法分析睾丸组织形态学变化,生物示踪法观察BTB的完整性,Western印迹检测BTB组分ZO-1和N-Cadherin蛋白的表达。采用0、2.5、5和10μmol/L CdCl_(2)处理睾丸支持细胞株(TM4细胞)24 h,Western印迹检测ZO-1和N-Cadherin蛋白,以及自噬相关蛋白LC3II和p62的变化情况。在含CdCl_(2)(10μmol/L)的细胞培养液中分别加入自噬抑制剂氯喹(CQ)(5μmol/L)或自噬激动剂雷帕霉素(Rap)(50 nmol/L)处理细胞24 h,Western印迹检测LC3II、p62、ZO-1和N-Cadherin蛋白表达。结果:与对照组小鼠相比,镉染毒组小鼠的生精小管间隙增大、生精细胞内空洞形成,层次减少、排列紊乱,BTB完整性受到破坏;中、高剂量CdCl_(2)组小鼠的睾丸组织中ZO-1和N-Cadherin蛋白表达含量显著下调(P<0.05)。与对照组细胞相比,CdCl_(2)染毒组细胞中ZO-1和N-Cadherin蛋白表达显著下调(P<0.01),而LC3II和p62蛋白表达则显著上调(P<0.05)。与CdCl_(2)组细胞相比,自噬抑制剂CQ和CdCl_(2)共处理组细胞中ZO-1、N-Cadherin、LC3II和p62蛋白表达均显著上调(P<0.01);自噬激动剂Rap和CdCl_(2)共处理组细胞中ZO-1、N-Cadherin和p62蛋白表达显著下调(P<0.05),而LC3II蛋白表达上调(P<0.05)。结论:氯化镉可破坏小鼠BTB的完整性,其机制可能与镉能够增强睾丸支持细胞中自噬水平,调控BTB蛋白表达含量相关。

互联网金融发展现状、存在的主要风险及对策建议

当前,互联网金融以高额回报吸引了广大投资者资金向其快速聚集,促使其得以快速扩张,对传统的实体金融机构产生了严重的冲击和影响,特别是其风险问题,引起了社会各界的高度关注。

电动自行车相关产品质量安全风险分析及质量监管研究--基于湖北电动自行车产业现状的思考与建议

近年来,电动自行车及其相关产品凭借快捷、经济、环保等特点逐渐成为居民短途出行的首选,但由电动自行车及相关产品引起的质量安全问题也频繁发生,严重危及消费者人身财产安全。本文综合分析电动自行车及相关产品质量安全风险信息,并结合湖北产业现状,提出加强湖北电动自行车产业质量监管的建议,以促进湖北电动自行车产业质量整体提升。

镉对大鼠睾丸组织piRNA表达的影响

目的:研究镉对大鼠睾丸组织piRNA表达的影响及其可能的机制。方法:将6周龄的12只SD大鼠利用随机数表分为对照组和镉染毒组,对照组用生理盐水进行灌胃,镉染毒组用CdCl2染毒液[3 mg/(kg·d)]进行灌胃染毒,28 d后收集睾丸组织,采用CASA精子分析系统记录精子浓度及活力,利用基因芯片进行piRNA测序,对差异piRNA进行生物信息学分析。结果:与对照组相比,镉染毒组大鼠的精子浓度和活力都显著降低(P<0.05),睾丸组织中有272个piRNA表达上调,402个piRNA表达下调,经验证,4个上调的piRNA表达结果与基因芯片结果一致。生物信息学分析结果表明,4个上调的piRNA靶基因参与细胞凋亡过程的负调控、基因表达的正调控、GTPase活性正调控等50个生物过程,主要富集于癌症中的转录失调、钙信号通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路等13个信号通路中,其中piRNA-DQ765261与Bcl-2有结合位点。结论:镉可引起大鼠睾丸组织中piRNA表达改变,其中某些piRNA可能在精子的自噬和凋亡过程中起着重要的作用,Bcl-2可能是piRNA-DQ765261的靶点。

我国消费品市场缺陷调查工作机制研究

自2016年我国缺陷消费品召回制度实施以来,我国缺陷消费品召回取得了一定成绩。但从近些年频发的产品质量安全事故来看,我国缺陷消费品召回制度并不完善,尤其是在消费品市场缺陷调查方面,由于制度保障不健全、缺陷信息来源不充分、技术支撑能力不强等原因,制约了缺陷消费品召回工作的有效开展。因此,本文针对上述问题展开研究,以期完善我国消费品市场缺陷调查工作机制。

湖北省汽车4S店售后服务质量评估研究

本文从湖北省家用汽车三包售后服务客户满意度和4S店三包服务质量评估角度入手,通过编制湖北省汽车三包服务客户评价和汽车4S店三包服务质量评估两份问卷,采用问卷调查和现场访谈收集消费者和经销商对服务质量的感知价值,使用SPSS和Excel等工具进行分析,评估湖北省区域内三包服务客户满意度现状及4S店服务质量情况,对主管部门掌握汽车售后服务质量,采取有效监管措施具有重要的现实指导意义。

陶瓷砖防滑性能标准比对分析

本文就陶瓷砖防滑性能的标准技术指标进行比对,分析标准存在的问题,提出完善的安全要求,保障公众的人身安全。

区域质量竞争力评价指标体系初探

随着我国经济总量的快速增长,经济发展的重心从数量到质量逐步发生了变化,坚持总量质量双提升、速度效益相协调已经成为各地推动经济发展的重中之重。本文从宏观角度来研究质量竞争力,对比分析以往各种质量指标体系异同点,在对地区质量竞争力的影响因素进行深入剖析的基础上,搭建了区域质量竞争力评价指标体系,为规范化评估区域质量发展要素和发展水平提供了理论框架。

活性氧在氯化镉诱导的小鼠睾丸间质细胞凋亡中的作用

目的探究活性氧(reactive oxygen species,ROS)在氯化镉(cadmium chloride,CdCl_(2))诱导的睾丸间质细胞毒性中的潜在作用及机制。方法以不同浓度CdCl_(2)(0、5和10μmol/L)染毒小鼠睾丸间质TM3细胞24 h。CCK-8法检测CdCl_(2)对TM3细胞活性的影响;Hoechst33342染色法检测凋亡小体;DCFH-DA探针法检测TM3细胞ROS水平;1 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)预处理1 h后用10μmol/L CdCl_(2)染毒TM3细胞24 h,Western blot检测细胞内促凋亡蛋白Caspase-9和cleaved Caspase-3的表达水平;RT-qPCR检测细胞内抗凋亡基因Bcl-2以及促凋亡基因Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达水平。结果CdCl_(2)染毒细胞24 h后,TM3细胞活力降低且凋亡小体数量增加。10μmol/L CdCl_(2)染毒组细胞Caspase-9蛋白表达水平为0.86±0.10,较对照组(0.56±0.07)升高(P<0.05);5和10μmol/L CdCl_(2)染毒组细胞cleaved Caspase-3蛋白表达水平分别为0.65±0.03和1.05±0.13,较对照组(0.37±0.11)升高(P<0.05);5和10μmol/L CdCl_(2)染毒组细胞内ROS含量分别为60.47±1.39和80.63±1.34,亦较对照组(46.80±1.24)增加(P<0.05)。与镉染毒组相比,NAC抑制了Caspase-9(CdCl_(2)组:0.89±0.07;CdCl_(2)+NAC组:0.28±0.02)和cleaved Caspase-3(CdCl_(2)组:1.53±0.21;CdCl_(2)+NAC组:0.66±0.07)蛋白的表达,差异有统计学意义(P<0.05);同时CdCl_(2)+NAC组ROS水平(62.64±0.93)也较CdCl_(2)染毒组(80.13±0.94)降低(P<0.05)。5和10μmol/L CdCl_(2)染毒组细胞Caspase-9 mRNA水平与对照组(0.97±0.10)相比分别升高为1.40±0.14和1.90±0.12(P<0.05),cleaved Caspase-3 mRNA水平与对照组(0.88±0.08)相比分别升高为1.42±0.11和1.59±0.12(P<0.05),但Bcl-2 mRNA水平与对照组(0.94±0.02)相比分别降低为0.60±0.02和0.50±0.09(P<0.05)。与镉染毒组相比(0.57±0.06),CdCl_(2)+NAC组镉诱导的Bcl-2 mRNA表达水平显著改善(0.92±0.03),Caspase-9(CdCl_(2)组:1.96±0.07;CdCl_(2)+NAC组:1.04±0.02)和Caspase-3(CdCl_(2)组:1.65±0.02;CdCl_(2)+NAC组:0.66±0.04)的表达水平降低(P<0.05)。结论小鼠睾丸间质细胞TM3中的Caspase级联反应可被CdCl_(2)诱导的过量ROS激活,抑制ROS可显著降低CdCl_(2)诱导的TM3细胞凋亡。

自噬在氯化镉诱导小鼠初级精母细胞凋亡中的作用

目的探究自噬在氯化镉(cadmium chloride,CdCl_(2))诱导小鼠初级精母细胞(GC-2 spd)凋亡中的作用及其潜在作用机制。方法以不同浓度CdCl_(2)(0、5和10μmol/L)染毒GC-2 spd细胞24 h。Hoechst33342染色法和单丹磺酰戊二胺法分别检测凋亡小体和自噬体;TUNEL荧光染色检测细胞凋亡情况;在不含/含CdCl_(2)(10μmol/L)的细胞培养液中分别加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(60μmol/L)、凋亡抑制剂胱天蛋白酶家族抑制剂(50 nmol/L)、自噬激动剂雷帕霉素(50 nmol/L)和溶酶体抑制剂氯喹(10μmol/L)处理GC-2 spd细胞24 h,Western blot检测细胞内自噬相关蛋白LC3、P62以及促凋亡蛋白cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9的表达水平。结果CdCl_(2)染毒细胞24 h后,自噬体聚集且凋亡细胞增多。Western blot结果显示,5和10μmol/L CdCl_(2)染毒组LC3II/LC3I蛋白表达水平与对照组(5.50±0.56)相比分别升高为9.23±0.81和12.15±0.80(P<0.05);LC3II蛋白表达水平与对照组(2.35±0.34)相比分别升高为3.35±0.14和3.47±0.32(P<0.05);P62蛋白表达水平与对照组(0.83±0.09)相比分别升高为1.48±0.12和1.80±0.22;与CdCl_(2)组相比,3-MA处理后LC3II/LC3I、LC3II、P62、cleaved Caspase-9和cleaved Caspase-3蛋白的表达水平分别下降为0.90±0.07(CdCl_(2)组为1.47±0.06)、1.57±0.14(CdCl_(2)组为2.45±0.29)、0.82±0.05(CdCl_(2)组为1.44±0.18)、0.18±0.01(CdCl_(2)组为0.28±0.01)和0.61±0.84(CdCl_(2)组为1.15±0.04)(P值均<0.05);与CdCl_(2)组相比,zVAD-FMK处理后cleaved Caspase-9和cleaved Caspase-3的表达水平分别下降为0.12±0.01(CdCl_(2)组为0.28±0.01)和0.34±0.01(CdCl_(2)组为1.15±0.04)(P值均<0.05),对LC3II/LC3I、LC3II和P62的表达水平无显著影响(P值均>0.05)。与CdCl_(2)组相比,RAPA能增强CdCl_(2)诱导的LC3II/LC3I、LC3II和P62蛋白表达水平,分别为2.22±0.21(CdCl_(2)组为1.56±0.06)、3.72±0.21(CdCl_(2)组为2.97±0.15)和2.41±0.19(CdCl_(2)组为1.52±0.35)(P值均<0.05)。Western blot结果显示,与CdCl_(2)组比较,CdCl_(2)与CQ处理组LC3II/LC3I、LC3II、P62和cleaved Caspase-3的表达水平明显增加为3.21±0.31(CdCl_(2)组为2.09±0.25)、4.49±0.43(CdCl_(2)组为2.72±0.26)、2.59±0.19(CdCl_(2)组为1.84±0.19)和2.43±0.23(CdCl_(2)组为1.50±0.27)(P值均<0.05)。结论氯化镉可能通过抑制自噬体-溶酶体融合阻滞自噬通量,促使自噬体异常聚集,诱导小鼠初级精母细胞发生凋亡。

氧化应激介导STAT3/p53通路调控邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯诱导的小鼠初级精母细胞凋亡

目的研究氧化应激在邻苯二甲酸单(2-乙基己基)酯(mono-2-ethylhexyl-phthalate,MEHP)诱导小鼠初级精母细胞(GC-2spd)毒性中的作用及机制。方法将培养的GC-2spd细胞分为对照组(含0.1%二甲基亚砜的无血清培养基)、MEHP染毒组(1、10、100μmol/L MEHP 3个不同剂量组)、N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)预处理组(100μmol/L NAC+100μmol/L MEHP),MEHP染毒24 h,NAC预处理2 h,NAC的预处理浓度(100μmol/L)通过CCK-8实验确定。采用DCFH-DA探针法检测细胞内活性氧(reactive oxide species,ROS)水平,JC-1法检测线粒体膜电位,Western blot法检测细胞内线粒体凋亡通路相关蛋白和p-STAT3^(Tyr705)、P53蛋白表达水平。结果随着MEHP染毒剂量升高,细胞内代表活性氧水平的绿色荧光信号增多;不同剂量MEHP染毒组的线粒体膜电位均下降,表现为红绿荧光细胞比例比值减小,10和100μmol/L MEHP染毒组的红绿荧光细胞比例比值分别为5.15±1.68和4.09±1.72,明显低于对照组(7.91±1.24)(P<0.05);促凋亡蛋白Bax与抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平比值(Bax/Bcl-2)在1、10、100μmol/L MEHP染毒组分别为1.23±0.17、2.64±0.43和4.75±0.73,与对照组(0.52±0.11)相比明显增加(P<0.05);cytochrome C蛋白表达水平在100μmol/L MEHP染毒组升高为0.83±0.09,cleaved caspase-9蛋白表达水平在10和100μmol/L MEHP染毒组升高为0.41±0.03和0.52±0.09,cleaved caspase-3蛋白表达水平在10和100μmol/L MEHP染毒组升高为0.60±0.12和0.84±0.17,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05);STAT3/p53通路中,p-STAT3^(Tyr705)蛋白表达水平在10和100μmol/L MEHP染毒组分别下降为0.70±0.14和0.41±0.04,P53蛋白表达水平在10和100μmol/L MEHP染毒组分别升高为1.32±0.05和1.66±0.22,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05);NAC预处理后,与100μmol/L MEHP组相比,NAC预处理组ROS生成减少,线粒体膜电位升高为5.92±1.64,Bax/Bcl-2下降为1.92±0.06,cytochrome C、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白表达水平分别下降为0.57±0.07、0.35±0.04和0.53±0.06,p-STAT3^(Tyr705)蛋白表达水平升高为0.86±0.07,P53蛋白表达水平下降为1.01±0.06,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MEHP诱导GC-2spd细胞凋亡可能与ROS介导的STAT3/p53通路调控线粒体凋亡通路有关。

铅镉联合染毒对小鼠初级精母细胞的毒性效应

目的研究乙酸铅和氯化镉对小鼠初级精母细胞(GC-2 spd)的联合毒性效应。方法将处于对数生长期的GC-2 spd细胞分别暴露于0(对照),不同浓度(10、20、40、80μmol/L)乙酸铅和(或)不同浓度氯化镉(1、2、4、8、16μmol/L)染毒24 h,采用CCK-8法检测细胞的存活率。采用活性氧(ROS)试剂盒检测20μmol/L乙酸铅及500μmol/L ROS保护剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)分别与不同浓度氯化镉(0、1、2、4、8、16μmol/L)联合染毒24 h后的ROS水平。结果与对照组相比,20μmol/L乙酸铅染毒组GC-2 spd细胞的存活率上升,40、80μmol/L乙酸铅染毒组和2、4、8、16μmol/L氯化镉染毒组的细胞存活率均下降,差异均有统计学意义(P<0.05);而10μmol/L乙酸铅染毒组和1μmol/L氯化镉染毒组的细胞存活率均无明显改变。与对照组相比,除10μmol/L乙酸铅+1μmol/L氯化镉染毒组和20μmol/L乙酸铅+1μmol/L氯化镉染毒组GC-2 spd细胞的存活率升高外,其他联合染毒组的细胞存活率均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);而20μmol/L乙酸铅+2μmol/L氯化镉组GC-2 spd细胞的存活率无明显变化。与相应浓度氯化镉单独染毒组相比,1μmol/L氯化镉+10、20μmol/L乙酸铅染毒组GC-2 spd细胞的存活率均升高,而1μmol/L氯化镉+40、80μmol/L乙酸铅染毒组的细胞存活率均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);仅2μmol/L氯化镉+20μmol/L乙酸铅染毒组的细胞存活率升高,而2μmol/L氯化镉+40、80μmol/L乙酸铅染毒组的细胞存活率降低,差异有统计学意义(P<0.05);16μmol/L氯化镉+10、20、40、80μmol/L乙酸铅染毒组的细胞存活率均无明显变化,细胞基本全部死亡。与对照组相比,各浓度氯化镉染毒组GC-2 spd细胞的ROS水平均上升,差异有统计学意义(P<0.05);与相应浓度氯化镉单独染毒组相比,500μmol/L NAC与不同浓度氯化镉联合染毒组、20μmol/L乙酸铅与不同浓度氯化镉联合染毒组GC-2 spd细胞的ROS水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论乙酸铅和氯化镉对GC-2 spd细胞毒性具有交互作用,表现为乙酸铅对低浓度氯化镉的GC-2 spd细胞毒性具有拮抗作用,对高浓度氯化镉的GC-2 spd细胞毒性具有协同作用。

武汉市社区适龄女性乳腺癌认知度与乳腺自检现状调查

目的调查社区适龄女性对乳腺癌的认知情况和乳腺自检现状,探讨其影响因素,为提前干预并提高适龄女性对乳腺癌认知度提供依据。方法采用自行编制的问卷,统一培训的专业人员于2018年8~9月间在武汉市青山区妇幼保健院对参与两癌筛查的社区适龄女性506名完成了乳腺癌认知度和乳腺自检情况调查,采用描述性分析和卡方检验完成数据分析。结果此次调查的妇女平均年龄为39.78±9.98岁,乳腺癌基础知识及乳腺自检行为知识总知晓率为39.64%,其中对乳腺癌基础知识的总知晓率为48.51%,其知识主要来源于电视/网络(48.12%),仅有8.23%是来自于社区的宣传资料;对乳腺自检行为知识的总知晓率为34.95%;乳房自检率为20.15%;年龄因素对乳腺癌相关知识的认知度影响有差异(χ^2值=12.972,P<0.05)。结论社区适龄女性乳腺癌相关知识相对缺乏且乳房自我检查状况欠佳,建议社区卫生机构对不同年龄层的女性开展针对性的乳腺癌健康教育,并提高其对乳房自检重要性的认识,以减少乳腺癌的疾病负担。

STAT3/p53调控的线粒体凋亡通路在DEHP致青春期大鼠睾丸损伤中的作用

目的探讨STAT3/p53在邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)诱导大鼠睾丸损伤中的作用。方法将24只6周龄SD雄性大鼠随机分为对照(玉米油)组及50、100、200 mg/mlDEHP染毒组,每组6只。每日早晨9点,采用灌胃方式进行染毒,每天1次,连续28 d。检测睾丸组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和细胞凋亡水平及Bax、Bcl-2、细胞色素C(Cyt C)、caspase-9、caspase-3的m RNA表达水平以及p53、p-STAT3蛋白的表达水平。结果与对照组相比,各剂量DEHP染毒组大鼠睾丸组织GSH-Px活力及500、1000 mg/kg DEHP染毒组大鼠SOD活力均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);而各剂量DEHP染毒组大鼠睾丸组织MDA的含量均无明显改变;且随着DEHP暴露剂量的升高,大鼠睾丸组织MDA含量呈上升趋势,而SOD、GSH-Px活力均呈下降趋势。与对照组相比,500、1000 mg/kg DEHP染毒组大鼠睾丸细胞的凋亡指数较高,差异有统计学意义(P<0.05);且随着DEHP暴露剂量的升高,大鼠睾丸的细胞凋亡指数呈上升趋势。与对照组相比,500、1000 mg/kg DEHP染毒组大鼠睾丸组织Bax、Cyt C、caspase-9、caspase-3 mRNA的表达水平及250 mg/kg DEHP染毒组大鼠睾丸组织Bcl-2m RNA的表达水平均较高,而1000 mg/kg DEHP染毒组大鼠睾丸组织Bcl-2 mRNA的表达水平较低,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着DEHP暴露剂量的升高,大鼠睾丸组织Bax、Cyt C、caspase-9、caspase-3 mRNA的表达水平均呈上升趋势,而Bcl-2 mRNA的表达水平呈下降趋势。与对照组相比,500、1000 mg/kg DEHP染毒组大鼠睾丸组织p53蛋白的表达水平均较高,而各剂量DEHP染毒组大鼠睾丸组织p-STAT3蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着DEHP暴露剂量的升高,大鼠睾丸组织p53蛋白的表达水平呈上升趋势,而p-STAT3蛋白的表达水平呈下降趋势。结论DEHP可诱导大鼠睾丸组织发生氧化应激,影响STAT3-p53调控的线粒体途径,诱导大鼠睾丸细胞凋亡,引起睾丸损伤。

邻苯二甲酸单乙基乙基酯和镉联合作用对大鼠血清氧化应激的影响

目的研究邻苯二甲酸单乙基乙基酯[mono-(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP]和镉联合作用对大鼠血清氧化应激指标的影响。方法采用3×3析因设计,将54只成年清洁级SD雄性大鼠随机分为9组,分别为对照(4.5%DMSO)组和10、250 mg/kg MEHP染毒组及1、3 mg/kg氯化镉染毒组以及MEHP(10、250 mg/kg)+氯化镉(1、3 mg/kg)染毒组,每组6只。采用灌胃方式进行染毒,染毒容量为10 ml/kg,连续染毒28 d。测定大鼠血清中丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(TSOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力。结果与对照组比较,各组大鼠血清MDA含量均较高,GSH-Px和T-SOD活力均较低,除各浓度氯化镉染毒组及10 mg/kg MEHP染毒组外,差异均有统计学意义(P<0.05)。MEHP和氯化镉联合染毒对MDA的影响不存在交互作用(P>0.05);10 mg/kg MEHP+1 mg/kg氯化镉染毒对T-SOD的影响存在交互作用(P<0.05),表现为拮抗效应;250 mg/kg MEHP+3 mg/kg氯化镉染毒对GSH-Px的影响存在交互作用(P<0.05),表现为协同效应。结论 MEHP和镉联合染毒可以造成大鼠氧化损伤,其具体作用机制有待进一步研究。