本科生参与课题研究以培养创新能力的探索

提高本科生创新思维能力是高校教学工作的重点内容之一。在生命科学发展突飞猛进的浪潮下,细胞生物学作为医学生的一门重要专业基础学科,在教学过程中对本科生的开拓思维提出了更高的要求。本科生进入实验室,实际参与到科研课题的研究过程中,不仅激发学生主动学习的兴趣,还提高本科生的创新思维能力,弥补了常规教学的不足。

RNAi的机制及在医学研究中的应用

RNAi干扰即一些小双链RNA可高效、特异地阻断体内特定基因的表达,导致特异mRNA降解,从而引起生物体内特异基因的沉默,使细胞表现出某种基因表型的缺失。近年来,RNAi这种技术作为一种简单有效的代替基因敲除的遗传工具在医学研究中得到了广泛的应用并有望成为攻克病毒、肿瘤等疾病的有效手段。

小鼠STAT3基因干扰质粒的构建及其效果鉴定

目的构建小鼠STAT3基因的特异性RNA干扰质粒,并鉴定其在细胞水平的抑制效果。方法采用DNA载体介导的RNA干扰技术构建小鼠STAT3基因的特异性RNAi质粒(pBS/U6/STAT3siRNA),并通过RT PCR、免疫印迹、免疫细胞化学染色等技术对pBS/U6/STAT3siRNA的抑制效率进行鉴定。结果经双酶切鉴定筛选出4个阳性干扰质粒,分别转入293T细胞后均可明显降低STAT3的表达,尤以靶向(+2334～+2351)位点的质粒干扰效率最高,达70%。结论小鼠STAT3基因的特异性干扰质粒(pBS/U6/STAT3siRNA)能从蛋白及mRNA水平上特异和高效地抑制STAT3基因的表达。这种DNA载体介导的双链RNA干扰质粒为进一步探究STAT3与胚胎发育的相关功能提供一种有效的研究工具。

Wnt10b在小鼠毛囊周期中的表达

目的初步探讨Wnt10b在小鼠毛囊生长周期中的表达变化规律及其意义。方法首先用RT-PCR检测Wnt10b在小鼠皮肤中的表达情况,然后以免疫组化检测Wnt10b在毛囊生长周期各阶段的表达定位及变化,同时检测了核增殖抗原Ki67在毛母质中的表达情况。结果Wnt10b在生后第1周期生长期皮肤的mRNA表达量显著高于退化期和静止期(P<0.01),生长中期达到峰值,退化期和静止期呈低表达;第2周期生长早期表达量略高于退化期和静止期。Wnt10b蛋白特异性表达于生长期毛囊的毛母质(Matrix)部位;退化期和静止期在整个毛囊都不表达;第2周期生长早期主要表达于毛囊次级毛芽。Ki67在毛母质中的表达变化情况与Wnt10b具有一致性。结论Wnt10b的表达具有严格的时空特异性,生后第1周期特异性表达于生长期毛囊的毛母质细胞,第2周期生长早期表达于毛母质细胞的祖细胞次级毛芽,提示Wnt10b可能对毛母质细胞增殖起作用,进而调控毛囊的生长并维持毛囊周期。

低氧诱导因子-1在小鼠胚胎神经胚形成阶段的发育学表达

为研究低氧诱导因子-1(HIF-1)在小鼠胚胎神经胚形成阶段的时空表达规律,探讨HIF-1在胚胎神经系统发生和发育过程中的作用。本研究以地高辛标记的HIF-1αcRNA为探针,采用全胚胎原位杂交技术,观察HIF-1α在神经胚形成阶段的表达规律。结果显示在E8.5d,整个鼠胚神经管的头端和尾端均可观察到HIF-1αmRNA的表达,此时表达较弱。在E9.5d,随着神经管的逐渐关闭,HIF-1αmRNA在前脑泡、第一鳃弓、第二鳃弓、后脑泡处急剧增多,并在发育中的眼部有较强的表达;此外在中脑泡以及心脏原基有较弱的表达。到E10.5d,阳性信号除在E9.5d检测到的部位继续富集外,在端脑、间脑、发育中的肢芽以及尾部也出现较强的HIF-1αmRNA的表达,且在心脏原基的表达亦进一步增强。E11.5d时在连合板、喙区、第一鳃弓、第二鳃弓、后脑、延脑、发育中的肢芽以及尾部末端可检测到HIF-1αmRNA的明显表达。以上结果提示HIF-1可能参与了小鼠神经胚形成的发育过程。

STAT3在小鼠胚胎肝脏的表达

目的 探讨STAT3在胚胎肝脏发育中的作用。方法 应用免疫组化技术观察STAT3在小鼠胚胎肝脏中期发育中的表达。结果 STAT3蛋白在E13.5d鼠胚肝脏中出现较强表达 ;在E14 .5d和E15 .5d鼠胚肝脏中的表达有所下降。结论 STAT3可能参与了胚胎肝脏中期发育的调控 ,并可能涉及胚胎肝脏的造血功能。

信号传导及转录活化因子3蛋白在小鼠胚胎肝脏发育中的表达(英文)

背景:信号传导及转录活化因子3(signaltransducerandactivatoroftran-scription3,STAT3)蛋白广泛表达于不同类型的细胞和组织中,是重要的信号转导及转录级联成分,参与调控细胞的增殖分化等多种生理功能。但是在胚胎肝脏发育中是否有STAT3的表达,STAT3是否参与了胚胎肝脏中期发育过程,目前国内外尚无文献报道。目的:通过研究STAT3蛋白在小鼠胚胎肝脏发育中的表达,试图揭示STAT3信号转导通路在胚胎肝脏发育过程中的作用和可能机制。设计:以STAT3蛋白为研究对象随机对照的基础研究。单位:一所军医大学的组胚教研室。材料:本实验于2004-01/2004-06在解放军第三军医大学组胚教研室的实验室完成。KM种小鼠(清洁级)由解放军第三军医大学动物中心提供。随机取雄鼠10只,雌鼠20只,体质量25～30g。方法:分别取交配后13.5d(n=8)、交配后14.5d(n=9)、交配后15.5d(n=7)鼠胚做冰冻连续切片。每2张切片中取1张用0.01mol/LPBS代替STAT3一抗设阴性对照实验。利用免疫细胞化学技术和免疫荧光细胞化学技术显示STAT3蛋白在小鼠胚胎肝脏发育中的表达。主要观察指标:鼠胚冰冻连续切片STAT3蛋白的表达情况。结果:在孕13.5d(E13.5d)鼠胚中,STAT3蛋白在肝细胞中的表达较强,孕14.5d(E14.5d)和孕15.5d(E15.5d)STAT3蛋白在肝脏中的表?

毛乳头细胞的研究现状

毛囊是一种皮肤附属器官,其结构的完整不仅为机体新陈代谢所需,同时对于动物的取暖、人的外表美观都有重要意义。毛囊具有自我更新和周期性生长的特点,这与毛球部存在的一群间充质细胞密切相关,即毛乳头细胞(DPC),它在毛囊发育以及生后毛囊周期过程中都发挥着重要的诱导作用。缺失DPC,无法形成毛囊;而在生后毛囊周期中,DPC通过与周围的毛囊上皮细胞相互作用,直接或间接地诱导毛囊周期性的生长。研究DPC的特性及其发挥的生物学功能,对了解毛囊的发育和再生具有重要的指导意义。

JNK在小鼠毛囊周期中的动态表达

目的研究JNK在生后小鼠背皮毛囊周期中的表达规律及探讨其对毛囊周期的调控作用。方法选择生后不同时期(1、7、14、16、21、31 d)C57BL/6J小鼠54只,采用RT-PCR技术,检测JNK mRNA在小鼠背皮毛囊周期中的表达情况;采用Western blot和免疫组化技术,进一步检测JNK蛋白在毛囊周期中的表达规律。结果 RT-PCR检测结果表明,在毛囊周期中,JNK1在生长早期(生后7、31 d)表达最强,退化期(生后16 d)和静止期(生后21 d)维持较弱的表达;JNK2在各时相点均有中等强度表达。单因素方差分析显示,JNK1的表达水平在生长早期(0.99±0.02)与静止期(0.30±0.01)间存在显著差异(P<0.05),JNK2在生长早期(0.77±0.01)与退化期(0.97±0.03)间存在显著差异(P<0.05)。Western blot与RT-PCR检测结果一致。免疫组化结果显示,在毛囊生长期,JNK主要表达于毛母质和外根鞘;进入退化期,JNK表达于外根鞘和上皮索;静止期毛囊中无表达。结论 JNK在毛囊周期中呈动态表达模式,生长期JNK可能通过影响毛母质细胞的增殖和/或分化来调节毛囊生长;退化期JNK可能涉及毛囊细胞的凋亡过程。

细胞生物学专题教学实践

随着医学教育的发展，传统的细胞生物学教学方法也在不断调整。通过精选具有代表性的细胞生物学主题开展专题教学，在课前鼓励学生围绕该主题进行相应内容的查阅及完成初步思考，授课讲解后引导学生进一步讨论并回答问题。对学生课堂讨论的参与度及课外作业的完成情况进行考核，并计入最终考核成绩（比例10％）。实践表明，专题教学有助于优化细胞生物学教学内容和前沿知识，可激发学习兴趣，充分锻炼学生主动学习的能力。

Wnt10b诱导再生毛囊的表达特性研究

目的研究Wntlob诱导再生毛囊的表达特性及诱导作用机制。方法HEK-293细胞内扩增并用氯化铯梯度离心纯化Wntlob过表达腺病毒及对照腺病毒，皮内注射至C57BL／6J小鼠背部皮肤，在处理后2．5、5、7、9、14、28d时取材，HE染色及免疫组化染色观察毛囊结构特征、信号通路表达特征及增殖特性。结果HE染色发现，AdWntlob处理组从第5天开始出现新生毛囊结构，正常生长，第28天左右进入退化期。免疫组化染色发现，AdWntlob处理组从处理后5d开始新生毛囊具有AE15表达，随着毛囊生长而增加，至处理后28d开始减少。在AdWntlob处理后5d，观察到13连环素的核表达，Lef1特异性表达于毛芽和毛母质部位，且全为核表达。在AdWntlob处理后28d，Lef1表达减弱。AdWntlob处理后2．5d即可见Ki67表达于表皮和毛囊外根鞘。处理后2、5、7、9、14d均在隆突区见到Ki67的表达；从处理后7d开始，Ki67表达于毛母质细胞。结论Wnt10b诱导的再生毛囊具有正常的毛囊结构，Wnt10b激活了经典Wnt信号通路，其作用的靶细胞是毛囊干细胞及其子代细胞。

小鼠HIF-1α基因干扰质粒的构建及其体外抑制效果研究(英文)

目的构建特异的靶向小鼠HIF-1α基因的RNA干扰质粒,检测其对HIF-1α表达的特异性和有效性。方法用双酶切方法构建了三组靶向小鼠HIF-1α基因的特异性RNA干扰质粒,pBS/U6/HIF-1α-siRNAI～III。采用RT-PCR、免疫细胞化学染色和western blotting分别检测了转染三组干扰质粒对293T细胞内HIF-1α表达的影响。检测了pBS/U6/HIF1αi-II质粒对SH-SY5Y细胞中HIF-1α表达的量效干扰效应。结果三组RNA干扰质粒均可显著降低293T细胞中HIF-1α的表达,尤以pBS/U6/HIF1αi-II质粒的干扰效果最佳。验证了pBS/U6/HIF1αi-II质粒对SH-SY5Y细胞系中HIF-1α的表达存在剂量效应关系。结论本实验构建的pBS/U6/HIF1αi-Ⅱ干扰质粒能有效特异地抑制HIF-1α的表达,其在神经管发育和神经管缺陷中的作用将被进一步探讨。pBS/U6/HIF1αi-II的构建还为探讨HIF-1途径在胚胎发育、肿瘤发生和缺血性疾病中的作用提供了有用的研究工具。

类器官研究历程及在脑科学中的应用进展

类器官是三维结构的细胞培养产物,重现了器官的某些关键细胞类型和功能特征,可从胚胎干细胞(ESCs)、诱导性多能干细胞(iPSCs)或成体干细胞衍生而来。在保留原始干细胞的前提下不断分裂分化,形成与来源组织器官结构和功能相似的微细胞团。在药物研发、药物毒副作用评价及精准医疗等方面,类器官优于动物模型,能更好地应用于体外实验。因此,类器官研究受到越来越广泛的关注。

腺病毒介导的Wnt10b对HaCaT细胞迁移的作用及机制

目的:探讨Wnt10b对Ha Ca T表皮细胞迁移的影响及机制。方法:分别用重组腺病毒Ad-GFP、Ad-GFP-Wnt10b感染Ha Ca T表皮细胞,利用细胞免疫荧光技术检测腺病毒Ad-GFP-Wnt10b感染细胞后的过表达情况;采用细胞划痕实验,于不同时间点观察并记录经Wnt10b处理后,Ha Ca T细胞体外迁移功能的改变;进一步采用Westen blot技术检测不同腺病毒处理后,Ha Ca T细胞中Wnt信号关键分子β-catenin、细胞粘附分子E-cadherin表达的改变情况。结果:1Ad-GFP-Wnt10b感染Ha Ca T细胞48 h后,细胞内GFP表达上调,细胞免疫荧光染色显示Wnt10b处理组高表达Wnt10b蛋白;2Ha Ca T细胞经Ad-GFP-Wnt10b处理后,细胞创面愈合速度明显增快;3Wnt10b处理组细胞β-catenin蛋白表达水平显著高于对照组,而E-cadherin蛋白表达水平显著低于对照组。结论:Wnt10b能促进Ha Ca T细胞迁移,且该效应涉及经典Wnt/β-catenin信号的激活及由E-cadherin介导的细胞粘附性的减弱。

基于移动终端的“三段式”导学在细胞生物学教学中的应用效果评价

该文旨在分析基于移动终端的“三段式”导学在细胞生物学教学中的应用效果。选取陆军军医大学2019级和2020级临床医学五年制本科学生为研究对象,对照组采用传统教学法,实验组在传统教学的基础上结合雨课堂和教学公众号进行课前、课中和课后“三段式”导学;课程结束后,以期末考试成绩和收集的实验组教学效果调查问卷为统计分析的基本资料。两个年级实验组学生的期末平均成绩、成绩优良率、及格率均高于对照组。问卷调查结果显示,实验组学生对基于移动终端的“三段式”导学认同程度高。教学实践结果表明,基于移动终端的课前、课中、课后“三段式”导学有助于营造全过程互动的学习环境、激发学生的学习兴趣,可在一定程度上提高细胞生物学的教学效果。

"AMU云教学"平台的开发及其在医学细胞生物学教学中的应用

随着国家教育信息化战略的逐步推进,信息化教学改革成为一种趋势。陆军军医大学基础医学院细胞生物学教研室基于微信公众号平台自主设计开发了"辅助匹配程序(auxiliary matching utility,AMU)云教学"平台,兼具公众号订阅功能和教学互动功能。本文主要介绍该平台的设计开发理念、主要功能和在医学细胞生物学课程教学中的应用,并采用问卷调查和考核成绩评价该平台辅助教学的效果。结果表明,全体教师和90.1%(272/302)的学生对使用该平台辅助教学效果表示满意,学生细胞生物学考试成绩优良(75分以上)者占比78.1%(236/302)。"AMU云教学"平台的开发和应用有效辅助了医学细胞生物学教学,为医学院校其他课程信息化平台构建提供了参考。