树莓多糖组分RPP-6的分离、结构表征及其体外免疫和抗氧化活性研究

旨在对从树莓粗多糖中分离纯化出的树莓多糖组分RPP-6进行结构表征及体外免疫活性和抗氧化活性研究。采用DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephadex G-200对树莓粗多糖进行分离纯化。结合高效凝胶渗透色谱法(High-Performance Gel Permeation Chromatography, HPGPC)、傅里叶红外光谱法(Fourier Transform Infrared Spectroscopy, FT-IR)、气相色谱-质谱联用(Gas Chromatography and Mass Spectrometry, GC-MS)和甲基化等方法对RPP-6的结构进行表征。利用小鼠巨噬细胞RAW264.7和自由基清除试验研究RPP-6的体外免疫与抗氧化活性。结果表明,RPP-6是一种酸性杂多糖,由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、鼠李糖和甘露糖组成,摩尔比为37.8∶30.8∶21.4∶6.0∶3.9。RPP-6的峰位分子质量为7.645 ku、重均分子质量为7.769 ku、数均分子质量为6.310 ku。RPP-6中存在15种单糖连接方式,其中Araf-(1→、→4,6)-Glcp-(1→、→4)-Galp-(1→和→4)-Xylp-(1→为主要连接方式,含量分别为20.64%、8.59%、24.04%和16.92%)。RPP-6能明显提高小鼠巨噬细胞RAW264.7的活力和吞噬能力,并促进细胞中TNF-α(Tumor Necrosis Factor, TNF)、IL-6(Interleukin-6,IL-6)、IL-1β(Interleukin-1β,IL-1β)和NO(Nitric Oxide, NO)释放。RPP-6对ABTS·+具有较高的清除作用,对DPPH·的清除作用不明显。表明RPP-6是一种多支链的均一酸性杂多糖,具有显著的免疫增强活性和一定的抗氧化活性。

树莓多糖组分RPP-5的结构特征与免疫活性研究

利用DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephadex G-200对树莓粗多糖进行分离纯化得到组分RPP-5,探究RPP-5的结构特征和免疫调节活性。采用高效凝胶渗透色谱、傅里叶红外光谱和气相色谱-质谱联用技术对RPP-5的结构进行表征。利用RAW264.7细胞研究RPP-5的免疫活性,通过CCK-8法、微板法、酶联免疫吸附测定和实时荧光定量PCR分别测定RPP-5对RAW264.7细胞的细胞活力、NO含量、炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量以及炎症因子mRNA表达水平的影响。结果表明,RPP-5主要由物质的量比为44.5∶21.7∶5.9∶8.8∶5∶4.1的阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖和木糖组成,其重均分子质量、数均分子质量和峰位分子质量分别为7598 Da、6183 Da和7492 Da,共存在12种单糖连接方式,糖链中→4)-Gal p-(1→、→4)-Xyl p-(1→、Ara f-(1→和→4,6)-Glc p-(1→的含量较高,分别为26.27%、16.50%、11.38%和10.41%。RPP-5可显著升高RAW264.7细胞的细胞活力,提高细胞内NO、IL-6、IL-1β和TNF-α的含量,促进IL-6、IL-1β和TNF-α的mRNA表达。综上,RPP-5是一种多支链的酸性杂多糖,具有较强的免疫增强活性,可作为功能性食品中的免疫调节剂,为树莓多糖的结构表征和免疫活性研究提供理论支持。

树莓果油抑制UVB诱导HaCaT细胞光老化的作用研究

【目的】探究树莓果油对中波紫外线(UVB)诱导的人永生化角质形成细胞(HaCaT)光老化的抑制作用。【方法】采用超临界CO_(2)流体萃取技术提取树莓果油后,通过气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分析其化学成分。建立HaCaT的UVB光老化模型,通过CCK-8法检测细胞存活率,用酶联免疫吸附法(ELISA)和微板法测定被UVB损伤的HaCaT细胞中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、硫氧还蛋白(Trx)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量。【结果】GC-MS分析显示,树莓果油中含有脂肪酸、脂肪酸酯、生育酚、甾醇等53种化学成分,其中油酸、亚油酸、Z-9-油酸乙酯、维生素E和谷甾醇与其抑制UVB诱导HaCaT细胞的光老化密切相关。抗光老化活性研究发现,与模型组相比,树莓果油能明显提高UVB辐射后HaCaT细胞的存活率(P<0.01),且具有明显的剂量依赖关系。此外,树莓果油能明显升高UVB诱导的HaCaT细胞中COL1A1的含量且降低MMP-3的含量(P<0.05,P<0.01),增加皮肤弹性;降低UVB诱导的HaCaT细胞中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的含量(P<0.05,P<0.01),延缓皮肤炎症反应的发生;提高UVB诱导的HaCaT细胞中抗氧化因子Trx和SOD的含量(P<0.05,P<0.01),提高皮肤氧化稳定性。【结论】树莓果油可能通过抑制细胞外基质降解、减轻细胞炎症反应和对抗氧化应激来抑制UVB对HaCaT细胞造成的光老化。

树莓粗多糖对UVB诱导HaCaT细胞光损伤的防护作用

多糖是树莓功能性成分之一,具有抗炎、抗氧化、抗疲劳、降血糖、免疫调节等多种药理作用。但树莓多糖对紫外线造成的皮肤细胞光损伤是否具有防护作用尚未见报道。本研究旨在探究树莓粗多糖(raspberry crude polysaccharide,RCP)对中波紫外线(ultraviolet B,UVB)诱导的人永生化角质形成细胞(human immortalized keratinocytes,HaCaT)光损伤的防护作用。通过建立HaCaT细胞的UVB光损伤模型,利用CCK-8法测定细胞活力,酶联免疫吸附法(enzyme linked-immuno-sorbent assay,ELISA)和微板法测定HaCaT细胞中炎症因子、基质金属蛋白酶和抗氧化因子的含量,评估RCP的抗UVB活性。采用体外自由基清除实验检测RCP对DPPH自由基(DPPH·)和ABTS自由基(ABTS·^(+))的清除能力。结果表明,RCP能明显提高被UVB损伤的HaCaT细胞活力,且随浓度升高作用增强(P<0.01或P<0.05)。与未加入RCP处理的HaCaT细胞比较,人基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、人白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、人白介素-6(interleukin-6,IL-6)、人肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的含量明显降低(P<0.01或P<0.05),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)以及人硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)的含量显著升高(P<0.05)。此外,RCP对DPPH·和ABTS·^(+)的最大清除率分别为91%和94%。以上结果表明,RCP能够通过降低炎症水平和缓解氧化应激来预防UVB对HaCaT细胞造成的光损伤,为天然抗UVB物质的研发提供新思路,也为树莓资源的高值化利用和精深开发提供参考。