索拉非尼诱导甲状腺癌细胞铁死亡的作用

目的探讨索拉非尼诱导甲状腺癌TPC-1细胞铁死亡的作用。方法体外培养人甲状腺癌TPC-1细胞,对其处理并分为索拉非尼组和阴性对照组,利用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞活性;以二氯荧光素(DCFH-DA)探针检测活性氧(ROS)的产生;应用蛋白质印迹法(Western blot)实验检测铁死亡相关蛋白ACSL4、SLC7A11及GPX4的表达水平;以丙二醛(MDA)试剂盒检测细胞内MDA含量。统计数据中多组间均数比较采用方差分析,两组间比较采用t检验。结果索拉非尼干预处理组细胞吸光度值(1.29±0.17)明显低于对照组细胞吸光度值(1.86±0.23,t=2.695,P<0.05);TPC-1细胞经过索拉非尼干预处理后,ROS的荧光强度(1.833±0.293)明显高于对照组(0.825±0.186,t=2.801,P<0.05);蛋白印迹法检测结果表明,索拉非尼干预处理后ACSL4蛋白表达水平(0.954±0.091)高于对照组细胞(0.442±0.132,t=5.314,P<0.05),SLC7A11的蛋白表达水平(0.293±0.087)明显低于对照组细胞(0.897±0.098,t=7.916,P<0.05),GPX4的蛋白表达水平(0.325±0.051)同样低于对照组细胞(0.893±0.069,t=9.325,P<0.05)。MDA检测结果表明,索拉非尼干预处理组MDA水平(30.661±3.192)明显高于对照组(19.285±1.406,t=5.901,P<0.05)。结论索拉非尼可促进甲状腺癌细胞铁死亡进程,加快甲状腺癌细胞死亡。

微小RNA-630靶向调控锌指转录因子影响甲状腺癌细胞侵袭能力

目的观察甲状腺癌(TC)细胞中微小RNA-630(miR-630)对上皮-间充质转化(EMT)标志物锌指转录因子(Slug)表达的影响,及对细胞侵袭能力的影响。方法收集河北医科大学第二医院普外科2018年1月至2019年12月之间的40例乳头状甲状腺癌及其癌旁标本。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)的方法检测甲状腺癌及其癌旁组织中miR-630的表达水平;将miR-630模拟物(mimics)转染至人乳头瘤状甲状腺癌细胞(TPC-1)细胞中,应用荧光定量PCR的方法观察Slug基因的表达水平,使用双荧光素酶报告基因实验观察miR-630对Slug基因的调控作用;同时,将过表达Slug质粒与miR-630 mimics共转染至TPC-1细胞,应用Transwell细胞侵袭实验观察miR-630和Slug表达变化对甲状腺癌细胞侵袭能力的影响,组间比较采用t检验。结果miR-630在乳头状甲状腺癌组织中的表达水平为(1.13±0.07),其表达水平明显低于癌旁组织表达水平(5.33±0.08),差异有统计学意义(t=15.472,P<0.05);miR-630 mimics上调甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中miR-630后,Slug mRNA表达水平(0.48±0.09)明显低于对照组细胞(1.03±0.07,t=7.132,P<0.05),差异有统计学意义;miR-630 mimics与Slug 3’非翻译区野生型共转染组荧光素酶活性明显低于对照组(0.38±0.03,t=13.021,P<0.05),差异有统计学意义。而miR-630 mimics与Slug 3’非翻译区突变型共转染组,荧光素酶活性却无明显变化(1.08±0.02比1.02±0.03,t=1.122,P>0.05),差异无统计学意义;miR-630 mimics组侵袭细胞数(241.3±42.4)明显低于对照组侵袭细胞数(467.5±51.7),差异有统计学意义(t=3.214,P<0.05);miR-630 mimics和Slug过表达质粒共转染组细胞的侵袭细胞数(411.6±28.3)与阴性对照组(NC,418.3±31.2)组比较,差异无统计学意义(t=1.131,P>0.05)。结论miR-630能够通过靶向抑制Slug的表达,抑制甲状腺癌细胞的侵袭能力。

长链非编码RNA H19对甲状腺癌细胞凋亡的影响及其机制

目的检测长链非编码RNA H19(lncRNA H19)对甲状腺癌细胞凋亡的影响并探讨其机制。方法体外培养人甲状腺癌FTC133细胞,对其处理并分为lncRNA H19小干扰RNA(siRNA)组和阴性对照组,应用流式细胞术检测细胞凋亡水平;应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测凋亡相关分子B细胞淋巴瘤-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)的mRNA及蛋白表达水平;应用Western blot检测lncRNA H19对甲状腺癌细胞凋亡的影响与磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路间的关系,两组间均数比较采用t检验。结果实验组细胞凋亡率高于对照组[(25.06±0.32)%比(7.85±0.24)%,t=96.207,P<0.01)。实验组细胞bcl-2 mRNA表达低于对照组(0.43±0.05比1.02±0.06,t=3.521,P<0.01),bax mRNA表达高于对照组(1.64±0.09比1.01±0.07,t=5.261,P<0.01),Caspase-3 mRNA表达高于对照组(1.86±0.12比1.03±0.09,t=7.342,P<0.01)。实验组细胞bax蛋白表达高于对照组(0.924±0.081比0.408±0.124,t=5.147,P<0.01),Caspase-3蛋白表达高于对照组(0.826±0.077比0.345±0.113,t=5.109,P<0.01),bcl-2蛋白质的表达明显低于对照组(0.203±0.067比0.885±0.090,t=7.368,P<0.01)。实验组p-PI3K蛋白表达水平明显低于对照组(0.189±0.021比0.798±0.081,t=7.873,P<0.01),p-Akt的蛋白表达水平明显低于对照组(0.208±0.038比0.822±0.089,t=7.423,P<0.01)。结论敲低lncRNA H19能够通过调节PI3K/Akt信号通路来促进甲状腺癌细胞发生凋亡,其在甲状腺癌的发生发展中具有重要作用。