正心降脂片多指标成分的含量测定及聚类热图分析

目的:建立同时测定正心降脂片中葛根素、3′-甲氧基葛根素、大豆苷、芦丁、橙皮苷、丹酚酸A、槲皮素等7种成分含量的方法,并进行聚类热图分析。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Kromasil C_(18),流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液(梯度洗脱),流速为0.8 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为25℃,进样量为10μL。以含量数据为对象,采用Hiplot科研绘图平台绘制聚类热图。结果:葛根素、3′-甲氧基葛根素、大豆苷、芦丁、橙皮苷、丹酚酸A、槲皮素检测质量浓度的线性范围分别为17.00~170.00(r=0.9999)、5.14~51.40(r=0.9998)、3.00~30.00(r=0.9998)、153.00~1530.00(r=0.9999)、7.88~78.75(r=0.9998)、2.85~28.50(r=0.9999)、11.34~113.40μg/mL(r=0.9998)。精密度、稳定性(24 h)、重复性试验的RSD均小于2%;平均加样回收率分别为99.58%(RSD=0.83%,n=6)、100.31%(RSD=1.17%,n=6)、100.61%(RSD=1.08%,n=6)、100.05%(RSD=0.82%,n=6)、100.31%(RSD=1.38%,n=6)、100.31%(RSD=0.85%,n=6)、99.85%(RSD=1.01%,n=6)。10批样品中上述成分的含量分别为7.2625~8.9415、2.4649~3.0689、1.4789~1.8834、58.6328~79.4083、3.5694~4.5006、1.0776~1.3415、1.1397~5.9570 mg/g。聚类热图分析结果显示,10批样品可聚为4类,其中S1~S3聚为一类、S4聚为一类、S5~S6聚为一类、S7~S10聚为一类。结论:所建含量测定方法操作简便、准确性高、专属性强,结合聚类热图分析可用于正心降脂片的质量控制;不同批次样品的质量存在一定差异。

正心降脂片HPLC指纹图谱构建与共有峰高分辨质谱分析

目的:建立正心降脂片的HPLC指纹图谱,为该制剂的质量控制提供参考依据。方法:采用Kromasil C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,3.5μm)进行色谱分离,使用乙腈-0.1%甲酸流动相系统进行梯度洗脱,流速0.8 mL·min^(-1),柱温25℃,检测波长254 nm。采用国家药典委员会颁发的中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012版)分析评价所构建的10批正心降脂片指纹图谱相似度。采用Q-Exactive轨道阱高分辨质谱技术和对照品比对鉴定共有峰成分。结果:构建了正心降脂片的指纹图谱共有模式并确认了其中的32个共有指纹峰,去除芦丁积分前后计算得到的10批正心降脂片指纹图谱与对照指纹图谱的相似度分别大于0.99和0.95。采用高分辨质谱技术共鉴定了26个共有峰,其中13个共有峰采用对照品比对进一步确认为3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷、芦丁、木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷、橙皮苷、大豆苷元、丹酚酸A、槲皮素、异鼠李素、橙黄决明素、大黄素。通过与组方中各单味药以及阴性样品的比对,对共有峰进行峰归属,32个共有峰涵盖了组方中全部8味药材。结论:本文所建立的正心降脂片HPLC指纹图谱方法简便、可靠,专属性强,结合共有峰的高分辨质谱定性分析,为正心降脂片的质量评价及药效物质基础研究奠定了基础。