中药刺五加叶中有效成分的几种微波辅助提取方法研究

利用高压微波提取法、常压回流微波提取法、流动微波提取法和索氏提取法提取中药刺五加中黄酮和皂苷类化合物,考察各种提取方法提取效率随时间的变化。结果表明,高压微波提取法在压力为300kPa,完全提取的时间为10min; 常压回流微波提取法完全提取的时间为14min; 流动微波提取法完全提取的时间为10min; 索氏提取法需8h尚能完成。各种提取方法总黄酮的提取率分别为43. 7、48. 2、42. 7和34. 7mg/g;总皂苷的提取效率分别为60. 2、61. 5、59. 8和46. 5mg/g.。与索氏提取法比较,微波提取法提取黄酮和皂苷,提取时间大大缩短,且提取效率显著提高。

刺五加中黄酮类化合物的微波辅助提取研究

利用微波辅助提取法 (MAE)提取刺五加中的黄酮类化合物 ,通过正交实验 ,考察了微波提取条件(包括溶剂、微波辐射时间、提取压力和料液比 )对刺五加中总黄酮提取率的影响 ,结果表明 :溶剂为 5 0 %乙醇 ,提取压力为 70 0kPa ,提取时间为 10min ,料液比为 1∶2 0时 ,提取率最佳。与索氏提取法相比较 ,提取率可提高 4 0 %。

中药刺五加中总皂苷的微波辅助提取方法研究

目的:建立中药刺五加中总皂苷微波辅助提取方法。方法:用微波辅助提取法提取中药刺五加中总皂苷。利用正交实验,考察了微波提取条件(包括溶剂、微波辐射时间、提取压力和料液比)对刺五加中总皂苷提取率的影响规律,优化了最佳提取条件。结果:在所选因素水平下,溶剂为70%乙醇、提取压力为700kPa、提取时间为10min、料液比为1:30时,刺五加中总皂苷提取效率最佳。与传统的索氏提取法进行了比较研究,微波辅助提取效率可提高34%。结论:微波辅助提取法提取中药刺五加中总皂苷,提取时间短,提取效率高。

基质辅助激光解吸电离质谱和电喷雾电离质谱在辣根过氧化物酶糖肽结构分析中的应用

糖链结构的质谱解析是今后糖蛋白分析中的重要研究内容,其中完整糖肽的分析,由于可以同时获得糖基化位点和对应糖链的结构信息,更具有重要意义和研究前景。本工作对质谱软电离技术在完整糖肽分析中的应用进行了研究,其中包括了基质辅助激光解吸电离(matrix-assisted laser desorption ionization,MALDI)和电喷雾电离(electrospray ionization,ESI)技术。通过平行使用两种串联质谱(tandem mass spectrometry,MS/MS)分析策略:MALDI-MS/MS和ESI-MS/MS对目标糖蛋白--辣根过氧化物酶进行分析,并讨论了其互补性。结果表明,MALDI和ESI技术各有优劣,结合串联质谱分析,可获得糖肽的糖链结构信息;两条路线互补使用,在揭示蛋白质糖基化修饰(位点和结构)的研究中十分必要。

卤化物的分光光度法测定

以硫酸为介质,用适宜的氧化剂氧化卤化物生成卤单质(X2),用载气载出,被显色剂(CD-4)吸收,生成一种有色化合物,在510nm处测其吸光度.并对实际水样进行了分析.

蛋白质高效分离两维色谱柱的选择优化

为了构建高效的离子交换/反相二维液相色谱(IEC/RPLC)分离平台系统,提高复杂蛋白质样品的分离效率,对色谱柱进行了评价与筛选。通过对实际人肝蛋白质样品的分离效果的比较,选择确定了TSKgelDEAE-5PW弱阴离子交换色谱柱(WAX)作为第一维色谱分离柱;考察了同一规格的10支代表性反相色谱柱(250mm×4.6mm,5μm,30nm,C4、C8或C18),通过评价其对尿嘧啶、硝基苯、萘和芴的分离性能以及对3种标准蛋白质样品的非特异性吸附、对人肝蛋白质样品的WAX馏分的分离效果,最终确定以Jupiter300 C4反相色谱柱作为第二维色谱分离柱。对两维色谱柱的选择优化为蛋白质高效分离二维液相色谱平台的搭建提供了可靠基础。

固定Fe3＋的磁性微球分离富集鼠肝中铁结合蛋白的初步研究

采用键合Fe3+的纳米材料分离富集了大鼠肝脏中的铁结合蛋白质组,并进行了质谱分析.在相同的起始富集蛋白质量以及相同的吸附和洗脱条件下,键合了Fe3+的磁性纳米材料比未键合金属离子的空白材料富集了更多的蛋白质,经质谱鉴定得到42个蛋白质,主要包括代谢酶类、呼吸链主要成员、氧化还原蛋白、转运蛋白、血红蛋白等.

去除血浆中高丰度蛋白质的二维液相色谱体系的建立

血浆中高丰度蛋白质的存在严重干扰低丰度蛋白质的检测,是困扰血浆蛋白质组学研究的技术瓶颈之一。针对这一热点问题,建立了一种二维液相色谱(强阴离子交换色谱-反相高效液相色谱)分离系统,对血浆中的高丰度蛋白质进行了色谱定位并进行去除。选择TSKgel SuperQ-5PW为第一维色谱分离柱,第二维色谱分离采用Jupiter C4柱,对第一维的馏分进行进一步的分离。通过梯度优化,血浆样品经过二维系统得到充分分离。第二维分离过程中从紫外信号强度高(215 nm,大于20 mAU)的峰中选择10个峰,利用液相色谱-串联质谱鉴定出32种高丰度蛋白质,包括人血清白蛋白、免疫球蛋白G等高丰度蛋白质。该体系为血浆中更多高丰度蛋白质的去除以及血浆蛋白质组学的更深入研究提供了重要思路。

中国3个主栽烟草品种的差异蛋白质组学研究

【目的】从全蛋白质组学水平研究烟草,筛选具有重要特性的蛋白质,阐明其相关代谢通路,使得烟草的基础科学研究和品种培育工作有所突破。【方法】利用苯酚法提取中国3个主栽烟草品种红花大金元、K326和云烟87叶片的蛋白质,酶解后采用串联质量标签技术(tandem mass tag,TMT)标记,结合二维液相色谱串联质谱技术(2D LC-MS/MS)对3个烟草品种叶片的蛋白质组成进行分析,运用Proteome Discoverer软件提取谱图后在MASCOT搜索引擎上鉴定蛋白质和肽段,并对鉴定的蛋白质进行系统的生物信息学分析,包括数据相关性分析、分层聚类分析和主成分分析,同时按照2倍上下调的原则采用火山图筛选不同品种烟草中表达差异显著的蛋白质,最后利用KEGG通路分析烟草中重要蛋白质的分布及功能。【结果】鉴定红花大金元、K326和云烟87烟草样品的蛋白质Group总数为3 079,蛋白质ID数为10 343。从分层聚类分析和主成分分析中蛋白质的整体表达情况可见,K326和云烟87蛋白质表达情况较相似,而红花大金元与前两者相差较大。后续的差异蛋白质筛选也验证了该结果,表现为云烟87和K326之间仅存在29个差异表达的蛋白质,其中13个蛋白质覆盖8条代谢通路,包括类黄酮生物合成,参与类黄酮合成路径的查尔酮合成酶在K326中的相对含量显著高于云烟87。红花大金元和云烟87之间有160个蛋白质差异表达,其中103个蛋白质覆盖42条代谢通路,包括谷胱甘肽代谢,相对定量结果显示谷胱甘肽代谢途径相关的3种酶,谷胱甘肽过氧化物酶、磷脂过氧化氢物谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽S-转移酶在红花大金元中的含量均显著低于云烟87。红花大金元和K326之间存在119个差异蛋白质,其中89个蛋白质覆盖41条代谢通路,包括外源物质细胞色素P450代谢。筛选获得的重要差异蛋白质的相对定量结果显示一些与抗性相关的蛋白质,如蛋白酶抑制剂,在云烟87中的表达量远低于K326和红花大金元,同时结果表明红花大金元中的超氧化物歧化酶含量处于较低水平。【结论】TMT技术结合2D LC-MS/MS可对不同品种烟草的叶片蛋白质进行有效地分离和鉴定,鉴定出的蛋白质大部分是参与光合作用、物质代谢或者与抗逆性相关。

二维阵列色谱分离系统及其在血浆蛋白质组中的应用

本研究发展了在线二维阵列式液相色谱系统,对血浆蛋白质进行分离分析。在线二维阵列式液相色谱系统进行血浆样品的蛋白质水平分离,整个分离过程仅需4 h,并能进行高丰度蛋白质的快速定位。相比于高丰度蛋白质馏分的直接鉴定,经蛋白质均衡器材料富集后,鉴定得到的低丰度蛋白质数量提高了10倍,低丰度蛋白质的损失大幅度减少。本研究将二维阵列色谱分离系统对血浆样品进行完整的分离分析,共鉴定到了1474种蛋白质,蛋白质浓度动态范围达到了7个数量级。高丰度蛋白质馏分中共鉴定到252种蛋白质,其中有61种为高丰度蛋白质。结果表明,在线二维阵列式液相色谱系统实现了血浆样品中高丰度蛋白质的快速去除和高丰度蛋白质馏分中低丰度蛋白质的富集,显著提高了血浆蛋白质的鉴定能力,在其它复杂样品的分离分析中具有一定的应用前景。

化学裂解结合生物质谱对多肽二硫键的定位

二硫键是一种与多肽及蛋白质结构和功能密切相关的化学键.当多肽中存在多个半胱氨酸时,形成的二硫键可能会存在多种配对方式.快速且精准地定位多肽中多对二硫键对研究多肽的结构与功能间的关系十分重要.本文开发了一种基于化学裂解和生物质谱的新方法,对利那洛肽中3对二硫键进行了精准定位.通过解析裂解后特异肽段的二级质谱图,确定利那洛肽中3对二硫键的配对方式分别为Cys1-Cys6,Cys2-Cys10和Cys5-Cys13.该方法为二硫键的定位研究提供了新思路.

正常脊髓室管膜与脊髓室管膜瘤的差异蛋白组学研究

目的 应用双向凝胶电泳（2-DE）和基质辅助激光解吸离子电离飞行时间质谱（MAL-DI-TOF-MS）的蛋白组学方法,观察正常脊髓室管膜与脊髓室管膜瘤的差异表达蛋白质.方法 收集7例脊髓室管膜瘤标本作为肿瘤组,4例尸解得到的脊髓室管膜标本作为对照组.提取各组标本的蛋白质,定量后进行IEF和SDS-PAGE双向电泳分离,得到的2-DE图谱经染色后,通过软件找到差异蛋白点并且使用MALDI-TOF-MS技术进行鉴定,部分差异蛋白质进行Western blot验证.结果 成功鉴定出50个有效的差异蛋白质点（其中肿瘤组较对照组上调24个,下调13个,仅在肿瘤组中表达10个,仅在对照组表达3个）.Western blot实验证实了差异蛋白波形蛋白（Vimentin）、膜联蛋白Ⅰ（Annexin Ⅰ）和HSPA8在肿瘤组中的高表达.结论 应用2-DE串联MALDI-TOF-MS技术能够建立具有高分辨率及可重复性的正常脊髓室管膜与脊髓室管膜瘤2-DE图谱,并能有效鉴定差异蛋白质.其中的Vimentin、Annexin Ⅰ、HSPA8等蛋白可能与脊髓室管膜瘤的发病机制有关.