生长激素受体在结直肠癌组织及细胞系的表达

目的研究生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)在结直肠癌组织及细胞系中的表达。方法应用免疫组织化学和Western blot检测16对结直肠癌患者的肿瘤组织及其配对癌旁对照生长激素受体的表达,用Western blot方法检测8种常见结直肠癌细胞系GHR的表达及其在细胞系中亚细胞定位。结果在结直肠癌组织中GHR的表达明显高于癌旁组织,具有统计学差异(P<0.05);在8种结直肠癌细胞系均检测到GHR的表达;GHR的分布主要位于结直肠癌细胞膜及胞核。结论生长激素信号轴在结直肠癌的发生、发展中可能起到一定的促进作用。

一个新的生长激素受体相关蛋白的发现及临床意义

目的鉴定实验中发现的一个新蛋白与生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)蛋白的相关性。方法用两种不同的GHR抗体,通过蛋白质印迹法(Western blot)检测16对结直肠癌患者的肿瘤组织和癌旁组织以及8个结直肠癌细胞系中GHR的表达;在结直肠癌细胞系中过表达pcDNA3.1-HA-GHR质粒,并应用HA-tag血凝素标记(hemagglutinin-tag,HA-tag)抗体检测HA融合蛋白。结果用两种不同的GHR抗体在结直肠癌患者组织中及结直肠癌细胞系中均能检测到一大小约45kD的蛋白,抗HA-tag抗体检测外源性GHR的表达也能检测到一与HA融合的大小约45kD的蛋白。并且发现这个45kD大小的蛋白在癌组织的表达明显低于癌旁组织(P<0.05),在8种结直肠癌细胞系均检测到这一蛋白,其大小为45kD,并通过HA-tag抗体检测到此蛋白与GHR蛋白有关。结论此蛋白与GHR有关,并且可能参与了结直肠癌的发生与发展。

芒果苷对神经病理性大鼠坐骨神经的保护作用

目的:探讨芒果苷(MGF)对坐骨神经压迫性损伤模型(PSNL)大鼠的镇痛作用及相关的分子机制研究。方法:60只大鼠随机分为假手术组、模型组、MGF 25 mg/kg组、MGF 50 mg/kg组和MGF 100 mg/kg组,分别于术后1 d、10 d、20 d测定大鼠后足热缩足反射潜伏期(TWL)及机械缩足反射阈值(MWT);第20 d取各组大鼠右侧坐骨神经,ELISA法检测氧化应激因子一氧化氮(NO)含量和内皮型一氧化氮合酶(e NOS)活性,以及氧化应激因子丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、过氧化氢酶(CAT)含量,Western blotting法检测e NOS蛋白表达水平。结果:第1 d、10 d和20 d,模型组较假手术组TWL[(13.1±1.2)vs(6.7±0.8),(13.6±1.3)vs(6.9±0.7),(13.7±1.3)vs(6.8±0.9)]和MWT[(43.6±3.9)vs(35.2±3.7),(44.2±4.1)vs(35.4±3.8),(44.5±4.9)vs(35.6±3.7)]显著下降;术后第1 d,模型组与各浓度MGF组之间无显著差异,而第10 d和20 d,MGF各浓度组较模型组TWL和MWT明显提高;ELISA结果显示,术后20 d MGF各浓度组较模型组MDA含量显著降低,并且MGF各浓度组较模型组SOD、GSH和CAT含量显著提高,MGF 25 mg/kg组、MGF 50 mg/kg组和MGF 100 mg/kg组NO含量[(40.2±3.9)、(33.6±3.4)、(29.9±3.1)ng/mg]和e NOS活性[(105.7±5.3)、(89.3±4.7)、(0.2±5.1)μmol/g]较模型组[(58.9±4.3)ng/mg、(148.2±6.9)μmol/g]显著下降(P<0.05);Western blotting结果显示,MGF 25 mg/kg组、MGF 50 mg/kg组和MGF 100 mg/kg组可显著抑制e NOS活性[(17.1±1.3)、(14.2±1.1)、(12.8±1.3)],与模型组(22.6±2.8)比较有统计学意义(P<0.05)。结论:芒果苷能缓解坐骨神经结扎引起的神经病理性疼痛,其分子机制可能与抑制坐骨神经氧化应激反应有关。

miR-27b对骨肉瘤MG63细胞生长的影响及其机制探讨

目的探讨miR-27b对骨肉瘤MG63细胞生长的影响及其机制。方法将体外培养的MG63细胞分为模拟物对照组、miR-27b模拟物组、抑制剂对照组和miR-27b抑制剂组,采用RT-PCR检测各组细胞中miR-27b的表达,MTT法检测细胞增殖活性,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移,流式细胞仪检测细胞凋亡。双荧光素酶报告基因实验检测miR-27b和FOXO1的靶向关系,Western blot检测FOXO1蛋白表达。结果过表达miR-27b后,骨肉瘤MG63细胞增殖活性升高,侵袭和迁移数增加,而细胞凋亡率降低(P<0.05)。抑制miR-27b表达与过表达miR-27b的作用相反。miR-27b靶向调控FOXO1,过表达miR-27b后FOXO1蛋白的表达水平降低,而抑制miR-27b表达后FOXO1蛋白的表达水平升高(P<0.05)。结论miR-27b可能通过靶向调控FOXO1促进骨肉瘤MG63细胞的增殖、侵袭和迁移,并抑制细胞凋亡。

混合共培养条件下骨髓间充质干细胞与脂肪间充质干细胞成骨性能分析

目的探讨混合共培养条件下骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSC)和脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSC)成骨分化潜能变化。方法无菌条件下获取BMSC和ADSC,纯化后倒置显微镜下观察细胞形态,对两种细胞分别进行成脂肪诱导、成软骨、成骨诱导,分别利用油红O染色、甲苯胺蓝染色、茜素红染色进行鉴定。实验分四组:A组:BMSC+ADSC未诱导(BMSC︰ADSC=1︰1);B组:BMSC诱导组;C组:ADSC诱导组;D组:BMSC+ADSC诱导组(BMSC︰ADSC=1︰1)。诱导组采用成骨诱导液进行成骨诱导,体外培养14d后Real-time PCR检测骨钙素(osteocalcin,OCN)及Runt相关转录因子2(Runx-2)基因表达情况,以及通过Western-blot法检测OCN及Runx-2蛋白表达情况。结果两种细胞在体外诱导后油红O染色、甲苯胺蓝染色、茜素红染色均为阳性,q-PCR结果显示D组OCN及Runx-2表达量明显高于A、B、C组(P<0.05),Westernblot结果显示OCN及Runx-2蛋白表达量D组明显高于其他三组P<0.05)。结论 BMSC与ADSC在体外混合共培养条件下可促进干细胞的成骨性能。

Silver结合第一跖骨头关节面切除手术治疗老年性拇外翻的疗效分析

目的探讨通过Silver结合第一跖骨头关节面切除在老年性拇外翻治疗方面的疗效。方法自2016年1月至2018年1月予以Silver结合第一跖骨头关节面切除手术治疗老年性拇外翻患者74例,男3例,女71例,年龄64~86(74.3±0.2)岁,术后不使用外固定,鼓励其早期下床功能锻炼,随访并常规拍摄X线,测定患足HVA、IMA角度并予以记录;采用美国足踝外科协会踝-足评分量表进行客观评价。结果所有患者均获得随访,时间16~36(25.3±0.5)个月;术前HVA(37.68°±3.24°),术后12个月矫正至(11.41°±3.1°);术前IMA(9.61°±2.52°),术后12个月矫正至(8.32°±2.43°);术前AOFAS评分(30.52±3.21)分,术后12个月达到(83.61±10.92)分,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论Silver结合第一跖骨头关节面切除手术不仅可用于治疗老年性轻中度拇外翻,而且对于伴有第一跖趾关节退行性关节炎的重度拇外翻患者亦有良好的疗效,无需截骨,无需外固定,矫形效果满意,适合无特殊截骨器械及内固定材料的医院应用。

紫檀芪介导PI3K/Akt信号通路对人骨肉瘤细胞凋亡与迁移能力的影响

目的探讨紫檀芪介导PI3K/Akt信号通路对人骨肉瘤细胞凋亡、迁移能力和活性的影响。方法收集人骨肉瘤细胞系SOSP-9607。细胞活力检测采用MTT法,细胞周期分析和细胞凋亡分析应用流式细胞仪,采用细胞划痕和黏附检测转染后SOSP-9607细胞的体外迁移能力和黏附能力。结果 MTT检测显示,加入浓度为1、2、4μmol·L^(-1)的紫檀芪培养后,细胞增长出现抑制,且呈剂量和时间依赖性。与对照组相比,不同药物浓度下骨肉瘤细胞的凋亡指数逐渐增加;细胞发生G0~G1期阻滞。随着药物浓度增加,划痕边缘间距逐渐扩大,细胞黏附性呈显著下降趋势。随着药物浓度增加,Cyclin D1表达下调,Bax和Bak水平升高,而p-JAK2、p-STAT3和Bcl-xL水平下降(P<0.05)。结论紫檀芪具有很强的抗人骨肉瘤细胞活性的作用,可降低骨肉瘤细胞的黏附能力及迁移能力,通过介导JAK2/STAT3信号通路导致细胞周期阻滞,抑制细胞生长,诱导细胞凋亡。