新藤黄酸诱导人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡以及对p-p38和p-ERK1/2蛋白的影响

目的探讨新藤黄酸对人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡的作用以及对磷酸化p38、p-ERK1/2蛋白的影响。方法倒置显微镜观察新藤黄酸不同时间和不同浓度处理CNE-1细胞形态变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度新藤黄酸(0.25、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0μmol.L-1)处理24 h、48 h和72 h对人鼻咽癌细胞CNE-1增殖的抑制作用;新藤黄酸作用CNE-1细胞24 h后的IC50为2.34μmol.L-1,再结合倒置显微镜观察的结果故选用2.0μmol.L-1作为药物作用浓度。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,并应用透射电子显微镜检测细胞凋亡形态改变及线粒体损伤;Western blot检测p-p38、p38、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白和线粒体凋亡相关蛋白Cytochrome C和Caspase-3蛋白的表达。结果新藤黄酸对人鼻咽癌细胞CNE-1生长和增殖有抑制作用,并随着新藤黄酸浓度的增加或作用时间的延长细胞活力明显下降。通过电镜可见2.0μmol.L-1新藤黄酸作用CNE-1细胞后细胞体积皱缩变圆,细胞核发生典型核染色质固缩等细胞凋亡形态学的变化;与control组相比包括对线粒体的损伤。Western blot表明p-p38蛋白表达有所上调,特别是在短时间(120 min)内,p-ERK1/2蛋白表达呈现时间依赖性下降;而p38和ERK1/2表达则基本不变。Cytochrome C和Caspase-3蛋白表达也呈现时间依赖性增加。结论新藤黄酸能诱导人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡,增强Cytochrome C和Caspase-3蛋白表达,同时对p-p38和p-ERK1/2蛋白也有影响。

基于关联规则算法和复杂系统熵聚类的中医药治疗特应性皮炎的证治规律研究

目的分析探讨当代中医对特应性皮炎(AD)的辨证治疗的经验。方法基于关联规则算法和复杂系统熵聚类,通过检索2017年1月1日～2018年3月1日发表于中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库中中医药治疗AD的文献,建立包含辨证分型、内服及外用中药的数据库,利用中医传承辅助平台V2.5进行数据分析。结果内服中药四气分布主要为温、寒、平、凉,药物的五味分布主要为甘、苦、辛、淡,药物归经多集中于脾肺。内服中药以茯苓、甘草、生地、白鲜皮、当归等15味药频次居多,外用中药以黄柏、苦参、白鲜皮、马齿苋、地肤子等10味中药频数最高。结论 AD辨证分型多集中于脾虚证,兼夹有湿邪、血燥。中药内服方以"健脾益气祛湿,祛风养血润燥"为主要治法,外用方以"清热燥湿,解毒止痒"为则;处方用药多从脾论治,可为中医临床辨证用药提供参考。

HPLC法同时测定连翘中6个成分的含量

目的:建立同时测定连翘(青翘)中异连翘酯苷、连翘酯苷A、连翘苷、Cornoside、五福花苷酸、松脂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷6个成分的含量测定方法。方法:采用Synerg^(TM) polar-RP 80A色谱柱(250 mm×4.6 mm,4μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱;流速为0.6 mL/min;柱温为30℃;进样量为20μL;检测波长为240 nm。结果:6种成分在一定的浓度范围内与峰面积的线性关系良好(r≥0.9997),平均加样回收率为98.13%~102.06%,RSD为0.72%~1.47%。结论:该方法专属性强,重复性好,稳定、可控,可为连翘药材的质量评价与控制提供参考。

陈达灿教授治疗光敏性皮肤病的临证经验

陈达灿教授从事皮肤病工作30余年,具有丰富的临床经验,尤其在光敏性皮肤病的治疗方面有独到的见解。陈教授认为,温热之邪致病贵乎早逐,并使邪有出路,在治疗上以"清透"和"清利"为主,同时在辨证基础上结合现代药理研究指导用药,在临床上取得良好的疗效,现对其经验进行介绍。

陈达灿教授治疗寻常型银屑病经验

系统总结了陈达灿教授治疗寻常型银屑病的学术思想和经验。通过临床跟诊学习及病案整理,从病因病机、辨证分型及用药对陈教授经验进行归纳和总结,最后辅以验案加以佐证。陈教授认为岭南地区银屑病的发病以热(血热、或兼风热)、瘀(血瘀)为主,常兼湿邪为患。临床分为血热证、血瘀证、脾虚湿蕴证,治以清热凉血、活血祛瘀、健脾祛湿化瘀,并且根据多年临床经验,形成自己独特的用药特点,常配伍解毒药物使用,在临床取得显著的疗效。

培土清心方降低人肥大细胞HMC1.1突变株与HMC1.2突变株细胞增殖活性及对HMC1.1突变株相关信号通路的影响研究

目的观察培土清心方对人肥大细胞HMC1.1突变株与HMC1.2突变株细胞增殖活性及对HMC1.1突变株相关信号通路的影响,为中医药复方治疗特应性皮炎提供实验依据。方法(1)培土清心方实验组不同剂量(0.01 mg/mL、0.05 mg/mL、0.1 mg/mL、0.25 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL)分别作用于HMC1.1及HMC1.2细胞,采用Cell Counting Kit-8检测培土清心方对HMC1.1及HMC1.2细胞增殖活性的影响。(2)采用Western blot方法检测培土清心方实验组不同剂量(0.25 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL)对HMC1.1细胞C-kit/Stat信号通路的作用。结果(1)培土清心方0.25 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL分别作用48小时均能显著抑制HMC1.1与HMC1.2细胞增殖活性(P<0.05),并且呈现一定的剂量依赖性。培土清心方0.25 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL分别作用HMC1.1与HMC1.2细胞72小时也呈现剂量依赖性抑制细胞增殖活性作用。尤其是对HMC1.1细胞增殖抑制更为明显。(2)培土清心方对HMC1.1细胞作用8小时后,使Phospho-C-kit(Y703)蛋白表达具有下调趋势,以及一定量降低Phospho-C-kit(Y719)蛋白表达的作用。培土清心方对HMC1.1细胞作用8小时后,使Phospho-Stat1(Y701)/Stat1蛋白表达具有下调趋势,并且呈现出剂量依赖性。结论实验结果表明培土清心方对人肥大细胞HMC1.1增殖抑制的作用机制可能涉及C-kit/Stat信号通路,对肥大细胞的作用可能是培土清心方治疗特应性皮炎的潜在作用机制之一。

中医湿证动物模型的研究进展

湿,属六气之一。湿证是指具有湿之特性的各种不同证候。近年来,湿证是中医证候研究的热点和重点具有重要的科学研究价值,证候的构建是中医与现代医学的桥梁和纽带。构建能客观体现及反映湿证的动物模型是进一步开展临床和基础研究的立足点。目前,已有很多的中医湿证实验室研究报道,尤其在各种中医湿证动物模型的构建及相关指标的检测。现对中医湿证的理论源流、湿证动物模型分类及湿证模型检测指标及意义的研究进展进行探讨,为中医湿证动物模型的建立及优化研究提供参考及启示,以期为湿证动物模型的构建及湿证生物学机制研究提供思路。

特应性皮炎不同T细胞亚群平衡紊乱与中医证型关联及YAP对其调控作用的研究

目的研究辅助性T细胞(Th)1/Th2/Th17/调节性T细胞(Treg)比例在特应性皮炎(AD)不同中医证型之间的差异,并探索Yes相关蛋白(YAP)在不同T细胞亚群中的表达量与其平衡紊乱之间的关联。方法收集AD患者35例(其中心火脾虚证21例、脾虚蕴湿证9例、血虚风燥证5例)及健康对照者24例,分析其临床特征,流式细胞仪检测不同组Th1/Th2/Th17/Treg细胞比例,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞因子的表达,分离外周血单个核细胞(PBMC)并诱导分化为不同T细胞亚群后检测YAP mRNA的表达量。结果AD组及健康对照组在年龄、性别上比较差异无统计学意义,AD患者中心火脾虚组AD严重程度评分(SCORAD)高于脾虚湿蕴组和血虚风燥组(P<0.001),性别、年龄、病程、嗜酸性粒细胞计数、IgE差异无统计学意义;Th2及Th17比例在心火脾虚组升高(P<0.05),Treg在心火脾虚组降低(P<0.05)、在血虚风燥组升高(P<0.05),Th1/Th2及Th17/Treg比例在心火脾虚组均升高(P<0.05);Th1相关细胞因子干扰素(IFN)-γ在心火脾虚组降低(P<0.01),Th2相关细胞因子白细胞介素(IL)-4在心火脾虚组升高(P<0.001),Th17相关细胞因子IL-17A及IL-21在心火脾虚组升高(P<0.01),Treg相关细胞因子IL-10在心火脾虚组降低(P<0.001),其余IL-6、转化生长因子(TGF)-β及IL-2均无明显变化;健康对照组中YAP mRNA在Treg中明显升高,(P<0.05),而在AD组中YAP mRNA在Th17中表达升高,在Treg中相对降低,YAP mRNA在Th17中的表达在心火脾虚组明显升高(P<0.01),在Treg中的表达在心火脾虚组明显降低(P<0.05),在Th1及Th2中的表达差异无统计学意义。结论在AD中存在Th2/Th1、Th17/Treg平衡紊乱,且在心火脾虚证中Treg下降、Th2及Th17为主导的免疫反应更明显,YAP在Treg中的表达下调、Th17中的表达上调很可能是介导AD Th17/Treg平衡向Th17偏移的关键因素,且这一特征在心火脾虚证中更明显。

培土清心颗粒治疗特应性皮炎的蛋白质组学研究

目的采用血清蛋白质组学方法探讨培土清心颗粒(白术、连翘、白茅根、太子参等)治疗特应性皮炎的作用靶点。方法选择特应性皮炎患者5例,以培土清心颗粒治疗12周,并以健康志愿者5例作为对照。对特应性皮炎患者治疗后的临床核心评价指标包括病情严重程度评分(EASI、SCORAD)、瘙痒程度评分、患者自评(POEM)、生活质量指数等进行评估。采用数据非依赖采集质谱(DIA-MS)技术检测血清样本,并根据P<0.05、变化倍数(Fold Change)>1.2筛选出特应性皮炎患者与健康人群的血清差异蛋白,以及培土清心颗粒治疗前后特应性皮炎患者的血清差异蛋白。对差异蛋白进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析。结果(1)与治疗前比较,特应性皮炎患者治疗后的临床核心评价指标包括病情严重程度评分(EASI、SCORAD)、瘙痒程度评分、患者自评(POEM)、生活质量指数等均得到明显改善,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。(2)健康对照组及特应性皮炎组共分析出28个差异性蛋白,其中12个蛋白表达水平上升,16个蛋白表达水平下降,包括ALAD(δ-氨基乙酰丙酸脱水酶)、LTA4H(白三烯A-4水解酶)、CA1(碳酸酐酶1)、F11(凝血因子XI)、LCP1(淋巴细胞胞浆蛋白1)等。主要涉及PI3K-AKT信号通路、脂质与动脉粥样硬化、ECM-受体相互作用、血小板活化、NF-κB信号通路、中性粒细胞外陷阱形成等信号通路。(3)特应性皮炎患者经培土清心颗粒治疗前后共分析出12个差异蛋白,其中8个蛋白表达水平上升,4个蛋白表达水平下降,包括ALAD、FGA(纤维蛋白原α链)、IGHV3-64D及IGHV3-38等。主要涉及脂质与动脉粥样硬化、补体途径、金黄色葡萄球菌感染、NF-κB信号通路、流体剪切应力与动脉粥样硬化等信号通路。(4)ALAD、FGA、IGHV3-64D等3个蛋白靶点在特应性皮炎患者中的表达显著下调,而在培土清心颗粒治疗后显著上调。结论差异表达蛋白ALAD、FGA、IGHV3-64D可能是培土清心颗粒治疗特应性皮炎的作用靶点,为进一步实验验证奠定了基础。

新藤黄酸诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的作用机制研究

目的:探讨新藤黄酸诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡的作用及其可能的分子机制。方法:采用MTT法检测新藤黄酸对人结肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用;DAPI染色及荧光显微镜观察细胞凋亡情况;FCM法检测细胞周期分布;蛋白质印迹法检测新藤黄酸对cyclin D1、cyclin E、P21、P27和多聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]蛋白表达的影响。结果:新藤黄酸对HCT116细胞增殖有明显的抑制作用,并呈浓度和时间依赖性。DAPI染色后荧光显微镜观察发现,新藤黄酸能明显诱导HCT116细胞凋亡。FCM法检测发现,新藤黄酸可以使HCT116细胞G0/G1期比例显著升高,S期比例相应降低,表明细胞周期阻滞于G0/G1期。蛋白质印迹法检测结果表明,新藤黄酸下调了细胞周期蛋白cyclin D1和cyclin E的表达,上调了P21和P27的蛋白表达,诱导了PARP蛋白的剪切。结论:新藤黄酸通过下调细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin E的表达和上调P21、P27的表达,使HCT116细胞阻滞在G0/G1期,进而显著抑制HCT116细胞的增殖,并诱导其凋亡。

特应性皮炎中西医发病机制的比较与思考

本文旨在探讨特应性皮炎中西医发病理论的共性与差异。笔者从遗传、免疫、肠道菌群和皮肤屏障功能四个方面阐释了中西医观点间的交融、差异与启发,发现中、西医对特应性皮炎发病机制的认识有诸多相似之处,中医学理论对特应性皮炎的现代研究具有一定的启发作用。

培土清心颗粒对小鼠特应性皮炎模型脾脏Th1/Th2细胞的影响

目的:观察培土清心颗粒对半抗原诱导C57BL/6小鼠特应性皮炎模型脾脏Th1/Th2细胞的影响。方法:18只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、培土清心颗粒组,每组6只。模型组和培土清心颗粒组采用2,4-二硝基氟苯(DNFB)诱导C57BL/6小鼠建立特应性皮炎模型,从造模第1天开始,培土清心颗粒组小鼠按2.47 g/(kg·d)灌胃培土清心颗粒,空白组和模型组给予同等体积的蒸馏水灌胃,连续给药14天。观察小鼠皮损表现和皮肤组织病理切片情况,检测耳部肿胀度,使用流式细胞仪检测小鼠脾脏中Th1、Th2细胞的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠右耳厚度和Th2细胞显著升高,Th1/Th2显著降低,培土清心颗粒组小鼠右耳厚度明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,培土清心颗粒组小鼠右耳厚度和Th2细胞显著降低,Th1/Th2显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。空白组小鼠皮肤正常;模型组小鼠背部皮肤增厚、粗糙、红斑、脱屑、糜烂、结痂,皮肤组织病理表现为表皮角化不全、角化过度、海绵水肿、棘层增厚,真皮内大量淋巴细胞浸润;培土清心颗粒组小鼠背部皮肤轻度增厚、粗糙、淡红斑、少许脱屑、结痂,炎症程度较模型组减轻,皮肤组织病理表现为表皮轻度角化不全、角化过度、海绵水肿,棘层轻度增厚,真皮内少量淋巴细胞浸润。结论:C57BL/6小鼠特应性皮炎样模型存在以Th2细胞升高为主的Th1/Th2失衡,培土清心颗粒可降低该模型小鼠脾脏Th2细胞的表达,提示调节Th1/Th2失衡是培土清心颗粒抗炎作用的可能机制。

陈达灿治疗荨麻疹学术思想总结

荨麻疹是皮肤科常见的以瘙痒性风团、骤起骤消、发无定处为主要表现的过敏性皮肤病,陈达灿教授认为荨麻疹病因虽复杂,探其根本,离不开"风""虚"二因,即平素体虚卫表不固,风邪趁虚侵袭,客于肌表,致营卫失和而发病。陈教授根据多年临床经验,形成自己独特的用药特点,善于将气候特点、时节变化、及妇弱老幼等病患体质与临床相结合,在临床上取得显著的疗效。

丹参素对银屑病小鼠皮损Yes相关蛋白的影响

目的:观察丹参素对银屑病小鼠皮损中Yes相关蛋白(YAP)表达影响。方法:用外用咪喹莫特的方式建立银屑病鼠模型,予以不同浓度丹参素(20、40、80mg·kg^-1·d^-1)进行灌胃处理,7d后观察鼠皮损的大体及组织病理情况,免疫组化及Western blot检测鼠皮损中YAP的表达。结果:模型组小鼠皮肤增厚,出现红斑鳞屑,予以丹参素灌胃后可见皮损逐渐变薄、鳞屑减少。模型组小鼠YAP的表达增加(P<0.01),丹参素灌胃后其表达下降,并且这一下降趋势随着丹参素浓度的增加而增大。结论:丹参素可能通过影响YAP的表达进而抑制了银屑病皮损进展。

中药白术与苍术中聚炔类成分分析与质谱裂解规律研究

目的:分析比较中药白术与苍术中聚炔类特征性成分。方法:采用超高效液相(UHPLC)联合二极管阵列检测器和高分辨多级质谱(LTQ Orbitrap MS/MS)在线检测技术,分析比较白术与苍术聚炔类特征性成分。结果:从炒白术和炒苍术中分别鉴定11和19个聚炔类成分,两者共有聚炔7个,白术中特有的聚炔类成分4个,苍术中特有聚炔类成分12个。结论:通过高分辨液质联用在线分析技术可以快速鉴别白术和苍术中含量大、稳定性差不易被分离纯化的聚炔类成分;白术和苍术中不同聚炔成分可以作为二者的鉴别依据,也可为两者功效差异的物质基础研究提供参考,并为提升两者药材质量标准提供依据。

重症难治性特应性皮炎的中医药治疗思路探讨

探讨中医药诊治重症难治性特应性皮炎的思路。儿童及成人的重症难治性特应性皮炎在基本病机上存在差异,儿童多为脾虚为本,心火为标,两者交互主导;成人病机复杂,以脾肾两虚为本,湿邪为标,二者互为因果,且多见兼夹证。因患者年龄、病期及病程的不同,临床可见心火脾虚证、脾虚湿蕴证、脾肾阳虚证、脾虚湿瘀证等基本证型。辨治时需抓住脾虚和湿邪两大辨治要点,即主张治病求本从脾论治,兼顾他脏;湿邪为患需治湿邪,同调兼夹证。具体用药时,需注意培土祛湿药的运用,采用炒制的中药灵活调整药物性味,小儿用药当清和。中医药的介入在重症难治性特应性皮炎的诊治中具有重要意义,中医药辨证论治可有效控制病情,减少或者延缓疾病复发,改变过敏进程,达到改善患者长远生活质量的治疗目标。

马尼地平调节AKT/ERK/STAT5信号通路增强阿霉素抗皮肤鳞状细胞癌的作用

目的探讨马尼地平增强阿霉素抗皮肤鳞状细胞癌的作用及可能的机制。方法体外培养A431细胞,实验分为对照组、阿霉素(0.01μmol/L)组、阿霉素和马尼地平(2.5、5、10μmol/L)联合给药组;MTT实验检测细胞增殖活力;细胞克隆形成实验检测细胞的增殖能力;荧光显微镜观察阿霉素进入细胞核的荧光强度;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞内阿霉素的含量;Western blot实验检测AKT、ERK、STAT5及磷酸化蛋白p-AKT、p-ERK、p-STAT5的表达情况。结果 MTT法结果显示,马尼地平(2.5、5、10μmol/L)与阿霉素联用均可增加A431细胞对阿霉素的敏感性;细胞克隆形成实验结果显示,马尼地平(2.5、5、10μmol/L)与阿霉素联用能抑制A431细胞克隆的形成,而单用马尼地平或阿霉素时A431细胞克隆的形成无明显变化;荧光显微镜观察结果显示,马尼地平(10μmol/L)能增加阿霉素在A431细胞内的分布;流式细胞术检测结果显示,马尼地平(2.5、5、10μmol/L)与阿霉素联用能促进A431细胞的凋亡;Western blot实验结果显示,马尼地平(2.5、5、10μmol/L)与阿霉素联用能降低A431细胞p-AKT、p-ERK、p-STAT5蛋白的表达水平;当AKT/ERK/STAT5信号通路的活性被0.1μmol/L博舒替尼抑制后,5μmol/L马尼地平不能发挥阿霉素对皮肤鳞状细胞癌的增敏作用。结论马尼地平可能通过调节A431细胞的AKT/ERK/STAT5信号通路从而增强阿霉素抗皮肤鳞状细胞癌的作用。

特应性皮炎脾虚湿蕴病证结合动物模型的构建与评价

目的通过比较2,4-二硝基氯苯(2,4-Dinitrochlorobenzene,DNCB)诱导特应性皮炎(Atopic Dermatitis,AD)小鼠疾病模型、“外湿+饮食失节+番泻叶灌胃”复合因素诱导脾虚湿蕴证小鼠模型,以及两者病证结合模型,建立特应性皮炎脾虚湿蕴病证结合小鼠研究模型,探索该方法的可行性。方法采用“外湿+饮食失节+番泻叶灌胃”复合因素造模方法,探索构建小鼠(Balb/c)脾虚湿蕴证,进一步应用DNCB诱导Balb/c小鼠出现特应性皮炎样病变,建立脾虚湿蕴证特应性皮炎病证结合模型。观察各组小鼠一般情况及体质量,进行脾虚、湿证症状评分;通过比较各组皮损程度、EASI评分、经皮水分散失(TEWL)值、脾脏系数和胸腺系数评价小鼠特应性皮炎严重程度;测定小鼠肌酐、葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯、胃泌素、淀粉酶水平。结果(1)在脾虚湿蕴证造模期间,与正常组比较,脾虚湿蕴证组、脾虚湿蕴型特应性皮炎组小鼠出现肥胖、精神萎靡、毛发污秽油腻、腹泻、肛周清洁度差等情况。在结合施加特应性皮炎模型后,与正常组比较,特应性皮炎组(P<0.001)、脾虚湿蕴证组(P<0.05)、脾虚湿蕴型特应性皮炎组(P<0.001)的体质量都有所降低。(2)与特应性皮炎组比较,脾虚湿蕴型特应性皮炎组的皮损程度更严重,EASI评分(P<0.05)、TEWL值(P>0.05)更高。(3)与正常组比较,特应性皮炎组的脾脏系数升高(P<0.001)、胸腺系数降低(P<0.001);与特应性皮炎组比较,脾虚湿蕴型特应性皮炎组脾脏系数(P>0.05)、胸腺系数都降低(P<0.05)。(4)血清生化指标结果显示,与正常组比较,脾虚湿蕴证组小鼠肌酐(P<0.01)、葡萄糖(P<0.001)、总胆固醇(P>0.05)、甘油三酯(P>0.05)、胃泌素(P<0.001)水平升高,淀粉酶水平降低(P<0.01);与特应性皮炎组比较,脾虚湿蕴型特应性皮炎组小鼠肌酐(P>0.05)、葡萄糖(P<0.05)、总胆固醇(P>0.05)、甘油三酯(P>0.05)、胃泌素(P<0.001)水平升高,淀粉酶水平降低(P>0.05)。结论“外湿+饮食失节+番泻叶灌胃”复合因素结合DNCB诱导特应性皮炎脾虚湿蕴病证结合小鼠模型既可表现出明显的脾虚湿蕴证中医指征,也可表现出特应性皮炎病样特征,可作为可靠的特应性皮炎脾虚湿蕴证中医病证结合动物模型,为后续脾虚湿蕴型特应性皮炎病理机制探讨、中药复方药效评价、药理机制探讨等方面研究提供参考。