南昌社区人群中糖化血红蛋白对于诊断及评估糖尿病前期风险的价值

目的探讨糖化血红蛋白(Hb A1c)在社区糖尿病高危人群中作为诊断糖尿病前期及评估转归风险的作用。方法选择南昌市社区糖尿病高危居民4961人作为筛查对象,将研究对象分为正常糖耐量组(NFG)、糖尿病前期组(IGR),糖尿病组(DM),比较OGTT试验方法与糖化血红蛋白对于诊断糖尿病前期的敏感度及特异度,分析其应用于糖尿病前期的筛查切点。随机随访糖尿病前期100例2年,观察糖尿病前期的转归情况。结果南昌社区中老年糖尿病高危人群中糖尿病患病率11.5%,糖尿病前期患病率8.4%;血糖、糖化血红蛋白、BMI、甘油三酯是糖尿病前期转归的危险因素;Hb A1c 6.1%是诊断糖尿病前期切点,敏感性64.6%,特异性63.7%,100例糖尿病前期2年后有12例糖尿病前期转化成糖尿病。结论糖化血红蛋白6.1%对于糖尿病前期诊断价值较弱,糖化血红蛋白具有提示糖尿病前期转归风险价值。

胰岛素样生长因子1对大鼠雪旺细胞Neuritin表达的影响

目的探讨高糖状态下胰岛素样生长因子1(IGF-1)对体外培养的大鼠雪旺细胞neuritinmRNA及蛋白表达的影响。方法体外培养的大鼠雪旺细胞分为五组:A组为非干预对照组;B、C、D和E组分别以浓度为0.1、1、10和100ng/ml的IGF-1并高糖同步处理36h。用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹实验分别检测大鼠雪旺细胞neuritin mRNA和蛋白的表达量。结果B、C组雪旺细胞neuritin mRNA和蛋白表达量与A组相仿(P>0.05),D、E组雪旺细胞neuritinmRNA和蛋白表达量均显著高于A组(P<0.05)。D组与E组雪旺细胞neuritin mRNA和蛋白表达量比较无统计学差异(P>0.05)。结论 IGF-1能上调体外高糖培养的大鼠雪旺细胞neuritinmRNA及蛋白的表达量。

大鼠雪旺细胞Neuritin基因shRNA表达载体构建及其体外抑制效应

目的构建针对大鼠neuritin基因的短发夹状小干扰RNA(shRNA)表达载体,并研究该载体对neuritin基因表达的沉默效应及雪旺细胞生存的影响。方法设计并合成neuritin靶向siRNA序列,连接pGCSIL-GFP慢病毒表达载体后,将neuritin基因干扰质粒和重组表达质粒共转染入293T细胞,包装成慢病毒,以此感染大鼠雪旺细胞,分为空白对照组(A组)、无意义干扰组(B组)和干扰组(C组)。RT-qPCR、Western blot及Annexin V/PI方法分别检测细胞neuritinmRNA、蛋白表达及细胞凋亡情况。结果与A、B组相比,C组雪旺细胞neuritin mRNA和蛋白表达水平降低,而细胞凋亡明显增加(P<0.01或P<0.05)。结论成功构建neuritin基因shRNA慢病毒表达载体。其转染的雪旺细胞neuritin基因表达受抑制,并导致细胞凋亡增加。

Neuritin基因高表达系统构建及转染大鼠雪旺细胞的鉴定

目的构建neuritin基因的高表达系统,观察其转染雪旺细胞后neuritin的表达。方法根据大鼠neuritin mRNA序列体外合成编码序列(CDS区),构建到pGH载体,与酶切后的GV208-绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体片段进行连接、转化、酶切及测序鉴定重组克隆。提取阳性克隆,转染入293T细胞,包装成慢病毒,以此感染大鼠雪旺细胞。将雪旺细胞分为三组:空白对照组(A组)、无意义干扰组(B组)、高表达组(C组)。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测细胞neuritin的表达。结果大鼠neuritin正确插入慢病毒载体,C组neuritin mRNA水平显著高于A组、B组(P<0.01)。检测到neuritin蛋白与GFP的融合蛋白。结论成功构建neuritin慢病毒高表达系统;其转染的雪旺细胞neuritin表达升高。

转染高表达Neuritin基因的雪旺细胞在高糖时对背根神经节突起的影响

目的探讨转染高表达neuritin基因的雪旺细胞在高糖情况下对背根神经细胞的影响。方法构建neuritin基因的高表达系统,包装出含有目的基因的慢病毒载体,转染雪旺细胞。流式细胞计数法(FACS)检测雪旺细胞的转染率。分离纯化SD大鼠的背根神经细胞,与转染高表达neuritin基因的雪旺细胞或正常雪旺细胞共培养。高糖情况下分别观察其对背根神经细胞生长的影响。细胞免疫荧光化学分析背根神经元突起的生长情况。ELISA检测细胞培养上清液中neuritin的浓度。结果高糖情况下,与非转染雪旺细胞/背根神经细胞共培养相比,转染高表达neuritin基因雪旺细胞/背根神经细胞共培养的培养液中neuritin的含量增高,并且促进背根神经细胞突起的生长(P<0.05)。结论在高糖情况下,转染neuritin基因的雪旺细胞能高分泌neuritin蛋白,并促进背根神经节的生长。