HPLC-MS/MS法研究普萘洛尔对映体在不同种属肝微粒体中的代谢差异

目的 采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)建立R-(+)-普萘洛尔和S-(-)-普萘洛尔在肝微粒体孵育体系中的含量测定方法,并分别比较普萘洛尔不同对映体在大鼠、犬、猴以及人4种肝微粒体中的代谢特征。方法 分别将R-(+)-普萘洛尔和S-(-)-普萘洛尔溶解在由烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)启动孵育的不同种属的肝微粒体中,在孵育不同的时间后加入乙腈终止反应。使用电喷雾离子源(ESI),以卡维地洛为内标,在多反应监测模式(MRM)下进行正离子扫描,分别测定各孵育体系中R-(+)-普萘洛尔和S-(-)-普萘洛尔的浓度。以孵育0 min时不同构型的普萘洛尔的质量浓度为参照,分别计算R-(+)-普萘洛尔和S-(-)-普萘洛尔在不同肝微粒体样品中的药物剩余百分比和体外代谢半衰期和固有清除率。结果 普萘洛尔的线性范围为0.05~10.00μg/mL,定量下限为0.05μg/mL;日内、日间精密度的RSD%均小于13%。在4个种属的肝微粒体孵育体系中,R-(+)-普萘洛尔在大鼠肝微粒体中代谢快,在猴肝微粒体中次之,在犬和人肝微粒体中代谢慢,体外消除半衰期依次为大鼠<猴<犬<人;而S-(-)-普萘洛尔则是在大鼠和犬肝微粒体中代谢快,在猴和人肝微粒体中代谢慢,体外消除半衰期依次为大鼠<犬<猴<人。在大鼠、犬和猴肝微粒体中,R构型普萘洛尔的t1/2均大于S构型,CLint小于S构型,但在人肝微粒体中却刚好相反。采用单因素方差分析,R-(+)-普萘洛尔和S-(-)-普萘洛尔在4种肝微粒体中的体外代谢半衰期t1/2和固有清除率CLint均具有显著性差异(P <0.05)。结论 建立的HPLC-MS/MS法具有简单、快速、准确的特点,可用于肝微粒体中普萘洛尔对映体质量浓度的测定。不同构型的普萘洛尔在大鼠、犬、猴和人4种肝微粒体中的代谢稳定性有显著差异。

指纹图谱结合含量测定控制臭灵丹药材的质量

目的采用HPLC指纹图谱结合含量测定控制臭灵丹药材的质量。方法建立臭灵丹药材的HPLC指纹图谱,结合含量测定结果,以此筛选出合格药材并测定抗病毒活性,以活性结果验证质控方法的合理性。结果臭灵丹药材的HPLC图谱与对照指纹图谱的相似度≥0.8,活性成分的含量限度为洋艾素、臭灵丹酸含量分别≥0.359 mg、6.736 mg·g^(-1),经该质控方法筛选出的药材抗病毒活性强。结论臭灵丹HPLC指纹图谱结合有效成分含量测定的质控方法,较全面地反映了臭灵丹药材中的化学成分信息。