PEG3000修饰的脂质体作为流感疫苗佐剂的研究

采用冻融-冻干法制备目标产品,用MTT法以刺激指数作为主要评价指标,通过单因素方差分析确定最佳处方;最佳处方制备的目标产品,通过腹腔免疫小鼠7、14和28 d后,用MTT法和表面标记法以刺激指数和CD4+/CD8+比值为评价指标进行细胞免疫原性研究;用微量血凝抑制法以抗体滴度比为评价指标检测体液免疫原性,探讨聚乙二醇(PEG)3000修饰的脂质体作为流感疫苗佐剂的最佳制备工艺和免疫原性。结果表明:PEG3000占卵磷脂的摩尔百分比为4%时,脂质体成膜后加入PEG3000制备的流感疫苗脂质体冻干粉为最佳处方;在1个免疫周期中, PEG3000修饰的流感疫苗脂质体组和其他组有显著差异(P<0.05)。这说明最佳处方制备的PEG3000修饰流感疫苗脂质体免疫原性增强且免疫时效延长。

DC-Chol阳离子脂质体佐剂对流感疫苗免疫效果的影响

目的观察阳离子脂质体DC-Chol修饰的四价流感疫苗的免疫原性。方法采用薄膜分散结合冻融-冻干法制备DC-Chol脂质体,检测其包封率。将小鼠分为七组,为DC-Chol脂质体疫苗组(250μg/只、500μg/只、750μg/只、900μg/只)、PBS组、中性脂质体组、疫苗原液组(n=3),通过MTT法确定DC-Chol脂质体的最佳剂量。将小鼠分为四组,DC-Chol脂质体组、疫苗原液组、中性脂质体组以及PBS对照组,腹腔免疫小鼠,于第7天、14天、28天处死,MTT法和T淋巴细胞表面标记实验检测小鼠淋巴细胞增殖情况观察免疫原性。结果MTT实验表明,DC-Chol修饰脂质体的最佳用量为500μg/鼠(P<0.05);T淋巴细胞表面标记实验显示,DC-Chol阳离子脂质体能明显增强脾淋巴细胞数(P<0.05)。结论与中性脂质体相比,DC-Chol阳离子脂质体作为四价流感疫苗的佐剂具有良好的免疫增强作用。

不同稀释浓度对狂犬疫苗脂质体免疫原性的影响

目的 考察不同稀释浓度狂犬疫苗原液制备狂犬疫苗脂质体冻干粉的体液免疫与细胞免疫效果,筛选出最佳稀释浓度。方法 将狂犬疫苗原液分别稀释至40 IU/mL、30 IU/mL、25 IU/mL、20 IU/mL、15 IU/mL、10 IU/mL,5 IU/mL后采用冻融-冻干法制备疫苗脂质体冻干粉,复溶后腹腔注射免疫小鼠,通过MTT 实验检测淋巴细胞增殖能力以及ELISA实验测定小鼠体液中RV-IgG浓度,筛选出最佳稀释浓度。结果 当稀释至15 IU/mL以下时,与原液组比较(P<0.05),有较高的刺激指数SI值(1.3313±0.1082),能够刺激机体产生较高的细胞免疫水平。并且在免疫早期能够刺激机体产生更多的RV-IgG抗体(31.84±2.09)IU/mL。结论 将疫苗原液稀释至15 IU/mL时制备的狂犬疫苗脂质体冻干粉诱导的细胞免疫与体液免疫效果最佳。

狂犬病疫苗脂质体冻干粉的免疫原性评价

目的评价狂犬病疫苗脂质体冻干粉的免疫原性。方法将狂犬病疫苗原液稀释至15 IU/mL,制备为稀释液冻干粉(Y1组);将该稀释液冻干粉与脂质体冻干粉按5∶3的体积比混合,制成物理混合物(Y2组);同时采用冻融-冻干法将狂犬病疫苗稀释液和脂质体配制成狂犬病疫苗脂质体冻干粉(Y3组)。将各组疫苗复溶后,分别于0、3、7、14、21 d经小鼠腹腔给药,0. 5 mL/只。MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖能力,流式细胞术检测T淋巴细胞表面标记,ELISA法测定小鼠体液中狂犬病病毒抗体IgG(RV-IgG)浓度。结果与Y1组及Y2组比较,Y3组初次免疫后3 d小鼠脾细胞刺激指数(stimulatingindex,SI)值明显升高(P <0. 01);初次免疫后7、14、21、28 d,CD4^+/CD8^+值明显升高(P <0. 05),初次免疫后7、14、21 d,RV-IgG浓度明显升高(P <0. 05)。结论狂犬病疫苗脂质体冻干粉在小鼠体内具有良好的免疫原性,脂质体能提高疫苗免疫原性,延长疫苗的免疫时间,有望开发成为新一代广泛应用的疫苗佐剂。

狂犬病疫苗佐剂研究新进展

狂犬病病毒(rabies virus,RABV)是传染性强、死亡率高、受到人们广泛关注的一种烈性病毒。狂犬病疫苗作为目前唯一能预防和控制狂犬病的制剂,其研发和生产日益成为热点。佐剂是能增强或改变抗原特异性免疫应答从而辅助疫苗发挥作用的物质。目前上市的狂犬病疫苗主要为铝佐剂疫苗及无佐剂疫苗,但上述两种疫苗均存在较大的局限性,在一定程度上影响了狂犬病疫苗的使用效果,因此本文在对RABV及其致病机理进行综述的基础上,对狂犬病疫苗佐剂进行探讨。