病理检查在人工关节置换术后感染诊断中的意义

目的回顾人工关节置换术后翻修病例的术后病理切片,分析病理检查在人工关节置换术后感染诊断中的价值。方法选取行人工髋、膝关节翻修病例的术后永久病理切片,剔除原发病为类风湿性关节炎、强直性脊柱炎及无完整病理切片资料的病例,入选共25例,由2位病理医师按2个不同诊断标准各自独立、单盲判断切片是否提示感染。诊断标准Ⅰ:每高倍视野不少于5个多形核中性粒细胞;诊断标准Ⅱ:每高倍视野不少于10个多形核中性粒细胞。所得结果与最终诊断比较,统计敏感性(SE)、特异性(SP)、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、约登指数(Youden's index,r)、阳性似然比(PLR)、阴性似然比(NLR)。两位病理医师诊断的一致性以kappa分析评价。结果按标准Ⅰ,病理医师A:SE=86%,SP=91%,PPV=92%,NPV=83%,r=0.77,PLR=9.4,NLR=0.16;病理医师B:SE=93%,SP=82%,PPV=87%,NPV=90%,r=0.75,PLR=5.1,NLR=0.087;kappa值0.84。按标准Ⅱ,病理医师A:SE=71%,SP=100%,PPV=100%,NPV=73%,r=0.71,NLR=0.29;病理医师B:SE=79%,SP=100%,PPV=100%,NPV=79%,r=0.79,NLR=0.21;对两位医师的诊断进行kappa分析,kappa值0.754。结论病理检查在人工关节置换术后感染的诊断中采用不同诊断标准其敏感性差异大,但特异性较高且相对稳定。

RANK基因干扰序列对小鼠骨髓巨噬细胞向破骨细胞分化及其活性的影响

目的建立逆转录病毒介导的沉默小鼠RANK基因RNA干扰表达体系,并观察其对小鼠骨髓巨噬细胞向破骨细胞分化的影响。方法将沉默小鼠RANK基因短发夹RNA(shRNA)片段重组到pSuper-Retro质粒中,构建沉默小鼠RANK基因RNA干扰逆转录病毒载体pSUPER-shRANK,与PIK包装质粒经293FT细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染小鼠骨髓巨噬细胞,并用嘌呤霉素筛选产生稳定的细胞克隆,用Western blot检测细胞中RANK蛋白表达的变化。对病毒感染的小鼠BMM和未经感染的小鼠BMM分别用100ng/ml RANKL和30ng/mlM-CSF诱导,9d后TRAP染色及扫描电镜观察破骨细胞形成及骨溶解情况。结果重组逆转录病毒质粒经测序鉴定正确;逆转录病毒感染小鼠骨髓巨噬细胞后用嘌呤霉素筛选出稳定的细胞克隆;对经病毒感染的细胞进行RANK蛋白检测发现,RANK表达较未感染BMM RANK下降了80.7%(P<0.01);与未感染BMM相比较,感染BMM在培养9d后,TRAP染色发现核≥3个的破骨细胞数量明显减少,分别为(82.00±4.64)和(6.80±1.64)(P<0.05);扫描电镜的结果显示骨陷窝面积明显减小,分别为(16.60±2.70)%和(2.80±0.84)%(P<0.05)。结论携带沉默小鼠RANK基因的逆转录病毒感染小鼠骨髓巨噬细胞能明显抑制RANK蛋白表达,沉默RANK抑制小鼠BMM向破骨细胞的分化及其活性。