TET2蛋白的作用研究进展

DNA甲基化是一种被广泛认可的表观遗传修饰,在哺乳动物中,这种在胞嘧啶的嘧啶环第五位碳原子上添加一个甲基集团的修饰方式主要存在于CG 二核苷酸（CpG）富集区,从而关闭众多基因的表达活性且能稳定遗传[1].哺乳动物体内CpG 主要有两种存在形式：①以甲基化状态散在分布于DNA 中;②以非甲基化状态高度聚集于启动子部位或第一外显子区[2].

siRNA靶向沉默TET2基因对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:通过siRNA靶向沉默TET2(ten-eleven translocation 2)基因,以研究TET2基因对于人肝癌细胞增殖和凋亡的影响并初步探讨其可能机制。方法:RT-PCR和Western印迹法检测人肝癌细胞株和正常人肝星状细胞LO2中TET2表达情况。siRNA转染入Bel-7404和SMMC-7721肝癌细胞内,并设置阴性对照组(NC组)。靶向沉默TET2基因后,CCK-8法检测肝癌细胞增殖能力,FITC AnnexinⅤ-Apoptosis Detection KitⅠ检测肝癌细胞的凋亡;Western印迹法检测下游信号通路中Caspase-3和Caspase-8蛋白表达。结果:与正常人肝星状细胞LO2相比,TET2基因在人肝癌细胞中高表达。siRNA转染入SMMC-7721和Bel-7404细胞后,TET2基因的表达显著降低。与NC组相比,转染48 h后肝癌细胞的增殖水平显著降低(P<0.05)。肝癌细胞的凋亡水平率显著升高,下游信号通路中,Capase-3蛋白和Capase-8蛋白的表达量显著上调。结论:siRNA靶向沉默TET2基因可通过促进肝癌细胞凋亡的发生抑制其增殖。

TET2蛋白在恶性肿瘤中的调控因素研究进展

TET蛋白家族（ten-eleven—translocation protein）的发现开辟了表观遗传与恶性肿瘤关系研究的新道路，3种TET蛋白均可催化5-甲基胞嘧啶（5-methylcytosine，5mC）生成5-羟甲基胞嘧啶（5-hydroxymethylcytosine，5hmC），

铜绿假单胞菌对胰腺癌细胞的抑癌效应及分子机制研究

目的 :主要探讨铜绿假单胞菌抗胰腺癌细胞的效果及其主要机制。方法:采用CCK8法检测胰腺癌细胞经铜绿假单胞菌作用后细胞增殖率变化,并应用透射电镜观察药物处理后细胞超微结构的改变。通过AnnexinⅤ/PI流式细胞术检测细胞经不同浓度铜绿假单胞菌处理后细胞凋亡的变化,分析胰腺癌细胞周期改变。Western印迹检测胰腺癌细胞表皮生长因子受体(EGFR)信号通路相关蛋白质的表达。结果:铜绿假单胞菌可明显抑制胰腺癌细胞增殖,并可观察到形态学的明显凋亡改变。铜绿假单胞菌处理后肿瘤细胞凋亡明显增加,并诱导肿瘤细胞的细胞周期阻滞,肿瘤细胞EGFR信号通路磷酸化蛋白表达量明显下降。结论:铜绿假单胞菌可诱导胰腺癌细胞凋亡,抑制肿瘤生长,阻滞细胞周期,EGFR通路抑制是铜绿假单胞菌诱导胰腺癌细胞凋亡的重要机制之一。

自噬在吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡中的作用

目的：研究自噬在吉西他滨（gemcitabine,Gem）诱导胰腺癌细胞SW1990凋亡中的作用,并以氯喹特异性抑制自噬,以探讨其可能机制。方法：采用CCK8法检测Gem对胰腺癌细胞增殖的影响,并用实时定量PCR检测自噬相关基因LC3的表达,以p62免疫荧光染色检测细胞内自噬泡,通过Western印迹法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin 1的表达,并用AnnexinⅤ/PI流式细胞方法检测Gem诱导后细胞凋亡的变化。进一步通过氯喹抑制自噬,检测自噬抑制前后细胞增殖、自噬及凋亡的变化。结果：Gem对胰腺癌细胞SW1990增殖具有部分抑制作用,Gem作用能迅速激活细胞自噬从而产生耐药。LC3的mRNA表达升高1.4-2.2倍（P〈0.05）,LC3-Ⅱ蛋白水平升高1.5-2.7倍（P〈0.05）,Beclin 1蛋白含量升高1.2-1.3倍（P〈0.05）。Gem和氯喹联合用药组较Gem单药组细胞凋亡蛋白Caspase-3表达升高,细胞存活率从64.3%±3.1%降低为35.2%±3.4%（P〈0.05）。结论：自噬在Gem诱导胰腺癌细胞凋亡的过程中可能起到保护作用,氯喹抑制自噬后可增强Gem的促凋亡作用。

ShRNA靶向沉默FGFR3基因对人肝癌细胞Huh7增殖和迁移的影响

目的:研究成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)对肝癌细胞株Huh7增殖和迁移能力的影响。方法:以靶向沉默FGFR3的shRNA慢病毒表达载体、delta8.9和VSVG三质粒共转染293T细胞来包装慢病毒颗粒。选择Huh7细胞转导慢病毒载体。通过细胞增殖实验(CCK-8法)和transwell实验,分别评估沉默FGFR3对Huh7肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。裸鼠分别皮下注射pSilencer-FGFR3-shRNA1#组和pSilencer-NC组Huh7细胞后,监测肿瘤生长。Western印迹法检测下游信号蛋白p-AKT和p-ERK。结果:与NC组比较,RNAi组的细胞增殖能力显著下降(P<0.01),裸鼠皮下移植瘤体积较小[shRNA1#组:(210.2±94.6)mm3,NC组:(1 546.0±331.7)mm3,P<0.05];迁移能力亦显著下降[shRNA1#组:(6.3±1.2)个,shRNA2#组:(3.0±0.5)个,NC组:(36.7±4.4)个,P<0.001]。RNAi组p-ERK和p-AKT的蛋白质表达水平显著下降。结论:沉默FGFR3,可能通过抑制ERK和AKT通路,显著降低肝癌细胞的增殖和迁移能力。

人工肝血浆置换治疗对肝功能衰竭患者移植相关免疫功能的影响

目的 探讨人工肝血浆置换（PE）治疗前后肝功能衰竭患者外周血T淋巴细胞亚群及白细胞介素（IL）-17等移植相关免疫指标变化的临床意义。方法 将28例肝移植术后肝功能衰竭患者和20例肝功能衰竭患者分别纳入研究组和对照组,采集PE术前、术后即刻、术后1 d和术后2 d的外周抗凝血和血清,应用流式细胞技术分别检测不同时间段T淋巴细胞亚群百分计数,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清IL-17浓度变化。结果 肝移植组患者治疗前的CD3-＋T细胞[（58.12±4.98）%]、CD4-＋T细胞[（28.85±4.18）%]和CD4-＋/CD8-＋比值（1.18）显著低于对照组,而CD4-＋CD25-＋Foxp3-＋T细胞[（10.58±5.01）%]则高于对照组。PE治疗后移植组患者的CD3-＋T细胞迅速增高到（66.07±4.75）%,CD4-＋T细胞增高到（37.16±3.89）%,CD4-＋/CD8-＋比值由1.18升高到1.35。CD4-＋CD25-＋Foxp3-＋T细胞百分计数在后当天即明显降低至（6.89±4.98）%,而后逐渐上升至术前水平。PE治疗对对照组患者T细胞亚群有类似作用,但作用强度低于对移植后患者。移植组患者PE治疗前的IL-17浓度[（85.175±50.151）ng/L]显著低于对照组[（198.042±80.985）ng/L],PE术后2组患者IL-17均即刻显著升高,而且移植组患者IL-17升高幅度比对照组更为明显。结论 肝移植后肝功能衰竭患者处于免疫抑制状态,PE治疗后细胞免疫功能显著增强,在稳定内环境和同时可能导致排异反应的加剧。

三孔法腹腔镜直肠前切除术操作难度的影响因素

目的探讨影响三孔法腹腔镜（TLS）直肠前切除术手术操作难度的因素。方法采用回顾性病例对照研究的方法，分析2013—2016年间在上海交通大学医学院附属瑞金医院结直肠外科病区行TLS结直肠手术治疗的106例结直肠癌患者临床及MRI影像资料。纳入标准：（1）TLS根治性直肠前切除（Dixon）手术患者；（2）肿瘤分期为Ⅰ-Ⅲ期的恶性肿瘤；（3）肿瘤下缘距肛缘5-15 cm；（4）能够获取术前直肠MRI检查图像。排除标准：（1）术前辅助治疗者；（2）低位直肠肿瘤者；（3）肿瘤周围侵犯者。利用术前直肠磁共振（MRI）图像行骨盆测量（MRI矢状位上选取第1骶椎上缘、第3骶椎上缘、尾骨尖、耻骨联合上缘连线形成五边形，5条径线分别标记为N、O、P、Q、R，5个夹角分别标记为角1、2、3、4、5）、脏器测量（子宫和前列腺）和肿瘤测量（横径、纵径、切面积、病灶长度以及环周切缘距离）；以手术时间作为衡量手术难度的标准，根据手术时间中位数进行分组，比较不同手术时间患者的一般情况（年龄、性别、体质指数、肿瘤距肛缘距离、既往手术史和肿瘤长径）、术前肿瘤TNM分期、MRI测量（骨盆、肿瘤、子宫及前列腺）等，多因素logistic分析影响TLS直肠前切除术手术难度的因素。结果全组男73例，女33例，年龄（59.8±12.2）岁，体质指数（22.8±3.3）kg/m^2，既往有腹部手术史25例，肿瘤距肛缘距离（7.4±2.0）cm，肿瘤长径（3.7±1.4）cm；肿瘤TNM分期：Ⅰ期24例，Ⅱ期36例，Ⅲ期46例。全组患者均顺利完成TLS手术，中位淋巴结清扫数13（11-16）枚，中位远切端长度2.5（2.0-3.1）cm，中位手术时间2.0（1.5-2.6）h，中位术中出血量50（0-100）ml，中位术后进食流质时间4（3-5）d，中位住院时间7（6-10）d，短期并发症10例（9.4%）。根据患者手术时间中位数（2 h）为分组标准，分为手术时间≤2 h组和〉 2 h组，每组均为53例。与手术时间≤2 h组比较，手术时间〉2 h组者的肿瘤距肛缘距离更短[（6.8±1.5）cm比（8.0±2.4）cm，t=3.174，P=0.004]、骨盆测量的（R＋N）/（O＋P）更小（1.61±0.27比1.73±0.19，t=2.494，P= 0.014）、肿瘤横径更大[（3.45±0.72）cm比（3.05±0.89）cm，t=0.224，P=0.027]。多因素logistic回归分析显示，肿瘤距肛缘距离是手术难度的独立影响因素（OR=0.584，95%CI：0.429-0.796，P=0.001）。结论肿瘤距肛缘距离长的患者行TLS手术难度相对较小，术前应综合评估手术难度，以肿瘤距肛缘距离作为主要衡量难度依据，以（R＋N）/（O＋P）和肿瘤最大横径作为重要参考因素，为不同阶段TLS术者选择不同难度的病例，以顺利渡过TLS手术学习曲线。