大黄素治疗重症急性胰腺炎并发急性肺损伤临床前研究的Meta分析

目的:系统评价大黄素治疗重症急性胰腺炎并发急性肺损伤的疗效。方法:通过计算机检索Embase、PubMed、the Cochrane Library、中国生物医学文献数据库、中国知网、维普数据库和万方数据库7个数据库,搜索时间限制为2011年1月1日至2022年6月12日,收集大黄素与重症急性胰腺炎并发急性肺损伤(SAP-ALI)的临床前实验研究。通过筛选文献、提取数据和评估纳入研究的偏倚风险,使用SYRCLE动物实验偏倚风险评估工具进行质量评估,使用RevMan和Stata软件进行Meta分析。并且对不同语言类型、模型剂量、给药方法和治疗剂量的主要结果指标进行亚组分析。结果:共纳入11项研究,涉及257只动物,实验组(大黄素干预)136只,对照组(常规干预)121只。Meta分析结果显示,大黄素可以显著降低SAP-ALI动物模型的肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3、肺组织炎症评分、胰腺炎症评分、肺部干湿重比、淀粉酶、动脉二氧化碳分压、凋亡相关斑点样蛋白、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1等指标水平,显著升高动脉氧分压水平,与对照组的差异均有统计学意义(P<0.05)。经亚组分析,肺组织炎症评分的异质性受到语言类型、模型剂量、给药方式的影响(P<0.05),而血清淀粉酶并未受到亚组影响。结论:从现有证据来看,大黄素可保护胰腺和肺功能,延缓组织损伤,可作为治疗SAP-ALI的潜在治疗药物。然而,此证据质量一般且为临床前研究,仍需要更高层次的证据验证该结论。

成瘾行为学模型及技术研究

药物成瘾是一种慢性复发性脑病,不仅给成瘾者自身造成严重的精神和躯体损害,而且对社会进步和人类文明构成了重大威胁,是急需解决的重大医学和社会问题。但目前国内外尚无理想的抗成瘾防复吸有效药物及手段,而深入探讨成瘾的神经生物学机制为寻找精准的药物靶点和神经调控通路提供良好的理论基础。工欲善其事,必先利其器,因此模拟人类疾病的动物模型是研究疾病最有说服力的实验工具,不同于病因不明的精神类疾病,治疗成瘾的药物是正是由动物模型的研究发展而来。因此动物模型不仅要具有相当的表观效度,也必须具备预测效度。由此可见成瘾的动物模型和神经系统研究技术不仅能为研究成瘾的机制提供了良好的实验手段,同时也为发展治疗成瘾提供筛选平台。本课题组已成功搭建了完善的动物成瘾行为学及神经系统实时检测的技术平台。动物成瘾行为学平台主要包括大、小鼠条件性位置偏爱模型、行为敏化模型、大鼠静脉插管自身给药模型及脑电刺激奖赏模型,并且率先在国内建立了小鼠和非人灵长类自身给药模型。而以上模型能够不同程度反应成瘾的特性,自身给药模型是一个动物操作性条件反射模型,最大程度地模拟了人类从用药到成瘾的主观能动性;条件性位置偏爱模型侧重研究与成瘾相关学习记忆;行为敏化则反映了药物奖赏效应引起的神经系统发生一系列适应性改变后表现出的对药物及药物相关的刺激的反应性增强;脑电刺激奖赏模型则实验了清醒自由活动动物成瘾神经环路实时操控。因此通过多种特性的成瘾模型能更系统地阐明成瘾机制和筛选评价药物的效应。神经系统研究技术体系主要包括清醒动物微透析技术、光遗传学技术、化学遗传学技术以及光纤记录系统。以往对于神经环路的研究,主要采用电刺激和药理学干预的方法,但是电刺激信号无法对单一类型的神经元精准靶向,而药物存在起效慢以及靶向性和选择性差的缺点,二者均无法实现精确操控神经环路的要求。与传统实验技术相比,光遗传学和化学遗传学技术在研究神经环路方面具有以下优势:(1)实现毫秒级的神经元激活或抑制;(2)可通过采用特异性启动子的病毒表达系统或Cre动物在特定类型的神经元上,而实现对某一特定类型神经元的选择性激活或抑制;(3)实现刺激效果将沿着神经通路本身的传导方向传递,能精确描绘神经投射环路。光纤记录系统是指将基因编码的钙指示剂GCaMP6特异性地表达在特定神经元中,实时在线地记录清醒自由活动实验动物脑内的神经元何时何地发生放电,为观察成瘾动物的脑内神经活动提供了良好的实验工具。与此同时,我们将最具预测和表观效度的小鼠自身给药模型与清醒动物微透析技术,光遗传学化学遗传学以及光纤记录系统相融合。实现了由整体到局部,由宏观到微观地深入探讨调控成瘾发生、发展和复吸的神经生物学环路,为发现新药靶和研发候选药物提供理论基础。

中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元短暂激活未能诱发小鼠自身给糖行为的重建

目的研究脑内奖赏系统中脑腹侧被盖区(VTA)多巴胺(DA)能神经元对灯光线索诱发小鼠自身给糖行为重建的调控作用。方法以转基因DAT-Cre小鼠为研究对象,通过病毒转染的方式,将光敏感通道蛋白特异性表达在小鼠VTA的DA能神经元上。采用10%蔗糖水训练注射过携带光敏感通道蛋白重组腺相关病毒的小鼠建立自身给糖行为,然后进行首次消退训练,达到首次消退期稳定阶段(连续3 d小鼠有效鼻触次数<10%形成期稳定操作值)后,进行线索点燃测试。随后,小鼠进行第2次消退,达到第2次消退期稳定阶段,采用频率20 Hz、脉冲时长15 ms的激光连续100次集中刺激VTA的DA能神经元。最后进行第3次消退,达到第3次消退期稳定阶段,采用频率80 Hz、脉冲时长15 ms的激光连续100次集中刺激VTA的DA能神经元。结果在相关灯光线索刺激下,小鼠出现蔗糖行为重建,表现为有效鼻触次数较首次消退期稳定阶段有效鼻触次数(首次消退期最后3 d的有效鼻触次数平均值)显著升高(P<0.01),提示蔗糖相关灯光线索可显著诱发小鼠觅糖行为重建,实验模型建立成功。20 Hz 15 ms或80 Hz 15 ms的激光刺激小鼠VTA能特异性激活多巴胺能神经元,与第2次消退期稳定阶段或者第3次消退期稳定阶段的有效鼻触次数相比,上述激光刺激对小鼠有效鼻触次数无显著影响。结论在自身给糖小鼠模型中,VTA脑区单一类型DA能神经元的短暂激活不足以诱发小鼠觅糖行为重建。

左金丸对DSS诱导的溃疡性结肠炎的作用及其机制

目的:基于网络药理学与实验验证探究左金丸(ZJW)治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用及机制。方法:借助网络药理学与分子对接初步明确ZJW治疗UC的活性成分与潜在机制,将48只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组(300 mg·kg^(-1))和左金丸低、中、高剂量组(1.82、3.64、7.28 g·kg^(-1)),采用葡聚糖硫酸钠(DSS)构建UC模型,造模第3天开始灌胃给药,连续7 d,每日观察小鼠一般状态并评估疾病活动指数(DAI)。苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理学变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-10水平,并以蛋白免疫印迹法(Western blot)验证分子机制。结果:网络药理学预测发现磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路可能是ZJW调节UC的关键途径。分子对接结果表明ZJW关键成分与核心靶点之间均有良好的结合能力。动物研究结果显示,与正常组比较,模型组小鼠结肠长度显著缩短(P<0.01),DAI评分、脾脏指数、结肠组织病理学评分与血清中TNF-α、IL-6水平明显升高(P<0.05,P<0.01),结肠组织PI3K、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)与B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)表达明显增加(P<0.05,P<0.01),血清IL-10水平与结肠组织Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,左金丸各给药组小鼠UC症状明显改善,结肠组织病理损伤减轻,血清中炎性细胞因子TNF-α、IL-6水平显著下调(P<0.01),结肠组织PI3K、p-Akt与Bax蛋白表达明显抑制(P<0.05,P<0.01),血清IL-10水平与结肠组织Bcl-2蛋白表达显著提高(P<0.01),以高剂量组效果最佳。结论:ZJW可有效缓解DSS诱导的UC,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路、调节凋亡相关蛋白表达相关。

清瘟败毒饮对脂多糖诱导急性肺损伤的改善作用及机制

目的:考察清瘟败毒饮对急性肺损伤小鼠的改善作用及其机制。方法:将144只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组[脂多糖(LPS),5 mg·kg^(-1)]、地塞米松组(5 mg·kg^(-1))、清瘟败毒饮低、中、高剂量组(14.105、28.21、56.42 g·kg^(-1)),每天给药1次,连续给药5 d。末次给药1 h后,气管内滴注LPS建立急性肺损伤模型,分别于造模后6 h和24 h取材。分析小鼠肺动脉血气指数;检测支气管肺泡灌洗液(BALF)的总蛋白含量、总细胞数、伊文思蓝(EBD)含量和肺组织湿重/干重(W/D);苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肺组织病理变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织酪氨酸激酶-1/信号转导与转录激活因子1/干扰素调节因子1(JAK1/STAT1/IRF1)信号通路的关键蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠的动脉氧分压(pO_(2))、血氧饱和度(SO_(2))及肺组织W/D明显减少(P<0.05,P<0.01),而二氧化碳分压(pCO_(2))、BALF总蛋白含量、总细胞数、EBD含量、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、趋化因子CXC配体1(CXCL1)、趋化因子CXC配体2(CXCL2)、趋化因子CXC配体9(CXCL9)和趋化因子CXC配体10(CXCL10)的含量明显增加(P<0.05,P<0.01);肺组织出现肺泡壁增厚、肺泡腔融合和炎性细胞浸润;M1型巨噬细胞极化比例和肺细胞凋亡明显增多(P<0.05);JAK1、磷酸化酪氨酸激酶-1(p-JAK1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、STAT1、磷酸化信号转导与转录激活因子1(p-STAT1)、IRF1、Gasdermin蛋白D(GSDMD)和混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)的蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,清瘟败毒饮明显增加pO_(2)、SO_(2)及肺组织W/D(P<0.05,P<0.01);显著改善肺组织病理变化;明显降低pCO_(2)、总蛋白含量、总细胞数、EBD含量、IFN-γ、TNF-α、IL-1β、CXCL1、CXCL2、CXCL9和CXCL10的含量、M1型巨噬细胞极化比例及JAK1、p-JAK1、iNOS、STAT1、p-STAT1、IRF1、GSDMD和MLKL的蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:清瘟败毒饮可通过抑制JAK1/STAT1/IRF1信号通路,改善急性肺损伤小鼠的肺部炎症反应,减少肺细胞凋亡,从而发挥肺保护作用。

成瘾的行为学动物模型研究

药物成瘾是一种慢性复发性脑病,不仅给成瘾者自身造成严重的精神和躯体损害,而且还引起严重的社会和公共卫生危害,是急需解决的重大医学和社会学问题。药物成瘾之所以能造成如此严重危害的根本原因是复吸。到目前为止,国内外尚无理想的抗药物成瘾防复吸的有效药物及其他干预手段。深入探讨药物成瘾的神经生物学机制是寻找防复吸精准药物靶点,发现有效的防复吸药物的重要途径,而建立具有高临床特征代表性的动物模型又是开展药物成瘾神经生物学机制研究的基础。虽然绝大多数精神类疾病病因不清,但药物成瘾的病因学是清楚的,这为建立理想药物成瘾动物模型提供了便利条件。本文在回顾药物成瘾的经典动物模型的基础上,对药物成瘾动物模型的研究进展进行了综述,为正确认识、合理使用和不断完善药物成瘾动物模型提供有益的参考。