胶体金免疫层析法同步快速测定畜禽肉中3种兽药残留

该文旨在建立一种胶体金免疫层析技术同步测定猪肉和鸡肉组织中呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物、氯霉素药物残留的方法。动物肌肉组织中呋喃唑酮代谢物、呋喃西林代谢物、氯霉素经酸化、衍生化及乙酸乙酯提取,并经含吐温-20的Tris-HCl缓冲液稀释后,与胶体金标记的单克隆抗体结合,抑制抗体和硝酸纤维素膜检测线(T线)上的抗原结合,从而导致T线颜色变化。通过比较T线和质控线(C线)颜色深浅,对试样中多兽药残留进行定性判定。试验优化了pH值、抗体添加量、抗原包被量、吐温-20添加量、衍生化试剂浓度和冻干保护剂种类等关键因素,并对检测卡的灵敏度、特异性和稳定性进行检测。结果显示,所建立的免疫层析方法可在35 min内检出猪肉和鸡肉中呋喃西林代谢物、呋喃唑酮代谢物和氯霉素药物,检出限分别为0.5、0.5、0.1μg/kg,灵敏度≥98%,假阳性率≤2%,假阴性率≤2%,稳定性可达到1年,且与现有标准方法检测结果一致。该方法操作简便、特异性强、灵敏度和准确度高,检测时间短且稳定性好,可用于动物肌肉组织中多兽药残留的高通量快速检测。

桃脂氧合酶基因的原核表达分析

利用RT-PCR技术从桃(Prunus persica L.)基因组中克隆到脂氧合酶(lipoxygenase,LOX)基因3(PpLOX-3)的ORF全长.ORF全长与原核表达载体pET-32a(+)相连接,构建重组原核表达载体pET-LOX-3,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下,通过SDS-PAGE电泳,得到一条约125 kD的融合蛋白条带,除去pET-32a(+)自身诱导的约20 kD大小的蛋白后,结果与PpLOX-3编码的约105 kD蛋白的大小一致.

氨苯砜胶体金免疫层析试纸条研制及其在牛尿液样本检测中的应用

为了检测牛尿液中的氨苯砜残留量,依据胶体金免疫层析原理研制了氨苯砜快速检测试纸条。使用氨苯砜-鸡卵白蛋白偶联物作为人工抗原免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,使用胶体金标记多克隆抗体,试纸条的检测线包被氨苯砜-牛血清白蛋白(BSA)偶联物,质控线包被羊抗兔IgG抗体。用试纸条对牛尿中的氨苯砜残留量进行检测,其检测限为5μg/L,检测时间10 min,特异性较好,与氨苯砜相似的几种药物均无交叉反应。本试验研制的试纸条可以快速检测牛尿液中氨苯砜残留量,实时监测牛在饲养过程中是否使用氨苯砜,为控制氨苯砜残留提供了有效监管手段。

双甲脒胶体金免疫快速检测试纸条研制及其在蜂蜜中的应用

目的基于胶体金免疫层析原理研制双甲脒快速检测试纸条,评价其在蜂蜜检测中的应用效果。方法使用双甲脒-牛血清白蛋白偶联物作为人工抗原免疫小鼠获得单克隆抗体,制备胶体金微孔试剂,使用双甲脒-卵清蛋白(ovalbumin,OVA)偶联物和羊抗鼠IgG抗体分别作为试纸条的检测线和控制线,并对蜂蜜样品进行添加检测。结果研制的试纸条可以定性检测蜂蜜中双甲脒的残留,对蜂蜜中双甲脒的检出限为0.2mg/kg,检测用时约25min,检测与双甲脒功能和结构相似的其他药物时无交叉反应,特异性较好。结论本研究研制的试纸条适用于蜂场现场快速检测以及基层实验室中大量样本的筛查,为蜂蜜中抗生素残留控制提供有效监管手段。

三氯杀螨醇胶体金免疫快速检测试纸条研制及在茶叶中的应用

目的建立基于胶体金免疫层析法的三氯杀螨醇快速检测试纸条的研制方法,并探究其在新鲜茶叶中的应用。方法以三氯杀螨醇为原料,采用琥珀酸酐对其衍生化合成半抗原;活化酯法将半抗原与白蛋白偶联得到人工抗原;用人工抗原免疫小鼠获得单克隆抗体。用上述原料制备出本研究试纸条。结果所研制试纸条对茶叶中三氯杀螨醇检测限为0.2 mg/kg,检测时间8 min。可特异性地检测三氯杀螨醇的残留量,而对其他与三氯杀螨醇结构或功能相似的农药无交叉反应。结论本研究提供的试纸条适宜基层实验室的大批量样本检测和田间现场快速检测,能够实现从源头上控制污染茶叶的流通上市。

酶联免疫吸附法快速测定玉米粉中伏马毒素

选用国产、进口2种品牌试剂盒对阴性样品加标实验及对FAPAS样品的检测，验证试剂盒的准确度。通过对标准物的检测，测试试剂盒的灵敏度；通过对阴性样品的检测，测试试剂盒的检出限。结果表明：酶联免疫吸附法（EusA）测定伏马毒素灵敏度高、快速、准确，可以用于定性定量分析。其中，国产和进口品牌FB，试剂盒的IC卯分别是15μg／kg和50μg／kg，检测限分别是300μg／kg和500μg／kg，通过FAPAS样品检测验证，国产、进口2种FB1试剂盒的准确度分别是84．80％～96．43％和79．75％-94．73％。