血清对联合培养神经上皮干细胞与Schwann细胞的影响

目的:探讨血清对联合培养神经上皮干细胞与Schwann细胞的影响,进一步寻求诱导神经上皮干细胞定向分化的影响因素。方法:采用不同浓度血清联合培养神经上皮干细胞与Schwann细胞,收集上清液作为条件培养液,免疫细胞化学染色观察条件培养液诱导神经上皮干细胞分化,统计分析分化为神经元与星形胶质细胞的比例;MTT检测条件培养液促Schwann细胞存活及增殖的作用。结果:Schwann细胞促进神经上皮干细胞存活和分化,随着血清浓度增加,神经上皮干细胞分化形成的神经元比例减少;神经上皮干细胞及血清均促进Schwann细胞存活和增殖,随血清浓度增加,存活及增殖率增加。结论:无血清或较低血清浓度有利于共培养的Schwann细胞存活和增殖,同时也有利于共培养神经上皮干细胞存活和向神经元方向分化。

血清浓度对雪旺细胞诱导神经上皮干细胞分化的影响

目的:探讨血清对雪旺细胞诱导神经上皮干细胞分化的影响。方法:从新生鼠坐骨神经及臂丛神经分离纯化雪旺细胞,从孕11.5 d大鼠胚胎分离培养神经上皮干细胞,含0%、1%、5%、10%胎牛血清的培养液联合培养雪旺细胞与神经上皮干细胞,收集上清作为条件培养液诱导神经上皮干细胞分化,1周后MAP-2和GFAP细胞免疫化学染色,显微镜下观察统计神经上皮干细胞分化为神经元与星形胶质细胞的比例。结果:条件培养液促进神经上皮干细胞存活和分化,分化形成的神经元大体形态与成熟神经元相似,0%、1%、5%、10%血清条件培养液组神经元与星形胶质细胞比例分别为1.53:1、1.13:1、1.03:1、0.75:1。结论:血清影响雪旺细胞诱导神经上皮干细胞向神经元分化,血清浓度增加,神经上皮干细胞分化形成的神经元减少。

补阳还五汤提取液对Schwann细胞氧化损伤的保护作用

本实验建立了Schwann细胞的体外氧化损伤模型,从对Schwann细胞的抗氧化损伤作用探讨补阳还五汤的疗效机制。用原代培养的Schwann细胞建立氧化损伤模型,将培养细胞分为氧化损伤组,补阳还五汤处理组及正常组:(1)应用MTT方法检测细胞的活性;(2)应用生化技术检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的含量;(3)采用荧光探针Fluo-3-AM标记细胞,用激光共聚焦显微镜观察H_2O_2对Schwann细胞内游离钙([Ca2+])抗氧化损伤的影响。结果显示:与对照组相比,H2O2处理组细胞活性降低(P<0.01),SOD含量明显减少(P<0.01),而补阳还五汤预处理后细胞内[Ca2+]i升高明显被减弱(P<0.01),细胞存活率明显升高(P<0.01)。以上结果表明补阳还五汤能通过抗过氧化损伤保护Schwann细胞。

补阳还五汤的抗氧化作用

目的:探讨复方中药制剂补阳还五汤的抗氧化机制。方法:用水煎醇沉法制备补阳还五汤提取液,从新生鼠坐骨神经分离纯化雪旺细胞,建立过氧化氢(H2O2)损伤模型。将培养细胞分为补阳还五汤处理组、氧化损伤组及正常组和空白对照组,培养12 h时,检测丙二醛(MDA)的含量,用免疫组化方法检测Caspase-3的表达,用RT-PCR技术检测胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的表达。结果:与氧化损伤组相比,补阳还五汤处理组的MDA含量明显减弱,Caspase-3呈弱阳性表达,GDNF mRNA的表达量减少不明显。结论:补阳还五汤具有良好的抗过氧化损伤效果,对H2O2引起雪旺细胞的损伤具有保护作用。

胰岛素样生长因子-1抗氧化损伤雪旺细胞凋亡的实验研究

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对H2O2损伤的雪旺细胞(SCs)抗凋亡的作用。方法将培养的SCs分为H2O2处理组、H2O2加IGF-1保护组和正常对照组。检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的含量,丫叮橙(AO)染色观察细胞存活、凋亡情况,蛋白印迹(Western blot)法检测Bcl-2的表达水平。结果与正常组及保护组相比,H2O2处理组细胞具有典型的凋亡形态特征:核染色质浓染、边集,细胞体积缩小,细胞存活率降低;SOD含量明显减少(P<0.01),MDA含量明显增加(P<0.01),Bcl-2表达下调;而IGF-1保护组细胞存活率明显升高(P<0.01),SOD含量较损伤组增高(P<0.01),MDA含量较损伤组明显减少(P<0.01),Bcl-2表达明显上调。结论本实验结果提示IGF-1对氧化损伤的SCs具有保护作用。

GFP转基因鼠神经上皮干细胞纹状体内移植的实验研究

目的:观察GFP转基因鼠胚胎神经上皮干细胞的体外培养及脑内移植后的存活与分化状况。方法:将GFP转基因鼠的胚胎神经上皮干细胞置于无血清培养基内纯化扩增,用巢蛋白免疫组织化学染色鉴定神经干细胞,将扩增后的含GFP基因的神经干细胞在立体定位仪下,定向移植到大鼠的纹状体内。术后不同时期取材、切片,在荧光显微镜下观察移植细胞的存活状况,行微管相关蛋白(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)以及酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色鉴定移植细胞的分化状况。结果:GFP转基因鼠神经管来源的神经上皮干细胞在无血清培养基内能增殖形成神经球,呈巢蛋白阳性。纹状体内移植2周、4周均可见明显的呈绿色荧光的移植细胞,显示细胞存活良好。免疫组织化学染色显示移植细胞在不同间隔时间可分化为MAP-2、GFAP及TH阳性细胞。结论:GFP转基因鼠来源的具有GFP标记的胚胎神经上皮干细胞可在体外培养扩增,移植到大鼠纹状体内存活良好并能分化成神经元、神经胶质细胞,且能定向分化为多巴胺能神经元。

胰岛素样生长因子-1对雪旺细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对雪旺细胞氧化损伤的保护作用。方法:用体外纯化培养的雪旺细胞建立氧化损伤模型,将培养细胞分成氧化损伤组、IGF-1保护组和正常对照组。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞的活性,生化技术检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的含量,免疫印迹法检测凋亡蛋白Bcl-2的表达水平。结果:与对照组相比,H2O2处理组细胞胞体积缩小、空泡化,细胞活性降低,SOD含量明显减少,Bcl-2表达减弱;而IGF-1保护组细胞存活率明显升高,SOD含量较损伤组高,Bcl-2表达明显上调。结论:IGF-1对氧化损伤的雪旺细胞有保护作用。

轴突导向因子EphA5沉默后抑制中脑神经上皮细胞投射

目的：探讨轴突导向因子EphA5在中脑神经上皮细胞向纹状体投射中的作用。方法：从孕11d大鼠胚胎取材并培养中脑神经上皮细胞；设计EphA5基因干扰序列，构建RNA干扰载体，采用电转染技术将EphA5干扰载体转入中脑神经上皮细胞，电转后将中脑神经上皮细胞与纹状体共培养，观察转染后中脑神经上皮细胞向纹状体组织的靶向生长情况。结果：中脑神经上皮细胞与纹状体组织块联合培养，神经突起明显朝向组织块生长；EphA5基因干扰载体转染中脑神经上皮细胞可降低EphA5蛋白表达，EphA5基因沉默后神经上皮细胞突起朝向纹状体生长趋势不明显。结论：EphA5基因沉默后中脑神经上皮细胞向纹状体投射减弱，EphA5基因可调控中脑神经上皮细胞向纹状体的靶向投射。

大脑后动脉伴发胚胎型改变与APCI及卒中严重程度关联的临床评估

目的探讨大脑后动脉伴发胚胎型改变与急性后循环脑梗死(APCI)发生及卒中严重程度的关系。方法选取2019年10月—2020年10月长治市人民医院收治的229例经头颅MRI诊断为APCI的患者,根据磁共振血管造影术结果将患者分为胚胎型大脑后动脉(FTP)组126例和非FTP组103例。比较两组患者一般资料、梗死分布和后循环血管形态的关系。并采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)将患者分为轻度卒中147组例和中重度卒中组82例,比较其临床资料,筛选影响因素,并采用Logistic回归分析大脑后动脉伴发胚胎型改变与卒中严重程度的关系。结果229例APCI患者中,FTP 126例,占比55.02%。FTP组患者近端梗死情况显著高于非FTP患者,且FTP组患者颅内段椎动脉狭窄和基底动脉弯曲凸向后循环血管异常情况显著高于非FTP患者,差异有统计学意义(P<0.05)。FTP组患者近端梗死情况显著高于非FTP患者,且FTP组患者颅内段椎动脉狭窄和基底动脉弯曲凸向后循环血管异常情况显著高于非FTP患者,差异有统计学意义(P<0.05)。中重度卒中组中糖尿病、完全型FTP(cFTP)、部分型FTP(pFTP)发生情况高于轻度卒中组,差异有统计学意义(P<0.05)。对有差异的因素进行Logictis回归分析,结果显示,cFTP、pFTP是APCI患者卒中严重程度的独立危险因素(OR>1,P<0.05)。结论大脑后动脉伴发胚胎型改变与APCI密切相关,脑梗死分布及形态是影响预后的重要因素,且大脑后动脉伴发胚胎型改变是卒中严重程度的独立危险因素,可根据其病变情况为临床脑梗死预后及卒中的发生和发展提供指导依据。

恒定磁场对Schwann细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨恒定磁场对Schwann细胞氧化损伤保护作用的机制。方法:用体外传代纯化培养的Schwann细胞建立氧化损伤模型,将培养细胞分为氧化损伤组,恒定磁场(4 mT)保护组及正常组。采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞的活性,用生化技术检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的含量,用免疫组织化学方法检测各组半胱氨酸天冬氨酸酶(Caspase-3)的表达。结果:与正常组及保护组相比,HB2BOB2B处理组细胞活性降低(P<0.01),SOD含量明显减少(P<0.01),MDA含量明显增加(P<0.01),Caspase-3表达呈强阳性,恒定磁场保护组细胞存活率明显升高(P<0.01),SOD含量较损伤组高(P<0.01),MDA含量明显减少(P<0.01),Caspase-3表达弱阳性。结论:4 mT恒定磁场能通过抗氧化损伤保护Schwann细胞。

6-OHDA损伤神经细胞CXCR4/CXCL12表达变化的实验研究

目的研究6-OHDA损伤PC12细胞CXCR4/12表达的变化。方法以梯度浓度的6-OHDA处理PC12细胞,光镜观察各组PC12细胞的形态学变化;MTT法检测6-OHDA对PC12细胞的损伤;间接免疫荧光染色法检测6-OHDA不同浓度下PC12细胞CXCR4/CXCL12表达的变化。结果随6-OHDA浓度的增加,PC12细胞的存活率呈梯度降低;光镜下观察发现PC12细胞数减少,轴突变短甚至消失;间接免疫荧光染色则显示CXCL12及其受体CXCR4在神经细胞的表达增加。结论 6-OHDA浓度的增加可导致PC12细胞凋亡,同时伴有CXCL12及其受体CXCR4表达增加。

醒脑静联合尼莫地平对高血压脑出血患者NIHSS及ADL评分的影响

目的研究醒脑静联合尼莫地平对高血压脑出血(HCH)患者美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)及日常生活能力量表(ADL)评分的影响。方法 68例HCH患者,随机分为对照组和观察组,各34例。对照组患者给予醒脑静进行常规治疗,观察组患者给予醒脑静联合尼莫地平治疗,均治疗4周。比较两组患者治疗前后的NIHSS评分以及出院3个月后的日常生活能力。结果治疗4周后,观察组患者NIHSS评分(6.92±6.84)分低于治疗前的(17.51±3.26)分,对照组患者NIHSS评分(11.42±7.31)分低于治疗前的(17.60±2.73)分,且观察组的NIHSS评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。出院3个月后,观察组患者日常生活能力治疗有效率97.06%明显高于对照组的70.59%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论醒脑静联合尼莫地平治疗HCH患者具有较好的治疗效果,还可改善患者的神经缺损功能,值得推广。

脊髓亚急性联合变性合并自身免疫性多腺体综合征1例

自身免疫性多腺体综合征(APS)是少见的内分泌疾病,临床表现复杂多样。现报告1例脊髓亚急性联合变性合并APSⅢB型。1病例患者,女性,69岁,因“头晕、行走不稳3个月,加重1个月”于2019年7月5日入院。患者于2019年4月左右无明显诱因出现头晕、行走不稳,无踩棉花感。当时查血常规正常,维生素B12<50 pmol/L,同型半胱氨酸(Hcy)46μmol/L,诊断为“脊髓亚急性联合变性”,给予维生素B10.1 g/d、维生素B120.5 mg/d肌肉注射1个月,维生素B1及甲钴胺口服2个月,余口服维生素B6、阿托伐他汀、叶酸片等药物。患者自诉症状改善不明显,且近1个月行走50 m后头晕及行走不稳加重,于2019年7月5日入住我院。

基于聚焦解决模式的健康教育对高脂血症病人认知、行为的影响

[目的]探讨基于聚焦解决模式的健康教育对高脂血症病人认知、行为的影响。[方法]选择2018年2月—2018年7月在长治市人民医院体检中发现患有高脂血症的病人作为研究对象。按照随机数字表法将病人分为对照组和试验组,每组130例。对照组实施常规健康教育,试验组实施基于聚焦解决模式的健康教育。比较两组病人疾病认知度、自我管理行为、血脂指标(总胆固醇、三酰甘油)、心理状态、生活质量及护理服务满意度。[结果]护理后,试验组疾病认知度得分[(87.15±7.58)分]、日常生活管理得分[(82.53±11.25)分]、情绪管理得分[(83.95±10.14)分]、疾病医学管理得分[(84.65±12.96)分]、躯体功能得分[(87.47±8.29)分]、心理健康得分[(86.89±8.21)分]、社会关系得分[(87.16±8.24)分]、生活环境得分[(85.46±8.45)分]均高于本组护理前,且高于同期对照组(均P<0.05),总胆固醇[(3.69±0.74)mmol/L]、三酰甘油[(1.82±0.53)mmol/L]、SAS评分[(39.58±5.46)分]、SDS评分[(39.94±5.22)分]均低于本组护理前,且低于同期对照组(均P<0.05)。护理后,试验组护理服务总满意率(95.38%)高于对照组(P<0.05)。[结论]在高脂血症病人中实施基于聚焦解决模式的健康教育,可有效提高病人的疾病认知度,规范病人自我管理行为,有利于降低病人血脂水平,改善病人心理状态和生活质量,使病人感到更加满意。

进展性脑梗死的危险因素分析

目的探讨进展性脑梗死的危险因素。方法回顾性分析2009年6月至2012年12月山西省长治市人民医院的200例急性脑梗死患者的临床资料，按疾病类型分为观察组100例（进展性脑梗死）和对照组100例（完全性脑梗死）。观察2组患者的年龄、糖尿病史、高血压病史、冠心病史、吸烟史、饮酒史、平均动脉压、血糖、白细胞计数、颈动脉狭窄、颅内动脉狭窄等因素以及影像学特征。结果观察组和对照组患者的糖尿病史、平均动脉压、白细胞计数、血糖、低密度脂蛋白胆固醇、颈动脉狭窄、颅内动脉狭窄比较，差异均有统计学意义［58例（58.0%）比43例（43.0%），（115±13）mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）比（130±15）mmHg，（8.1±0.8）×109/L比（6.6±0.4）×109/L，（7.5±0.5）mmol/L比（5.6±0.4）mmol/L，（2.2±0.2）mmol/L比（1.5±0.2）mmol/L，48例（48.0%）比34例（34.0%），39例（39.0%）比25例（25.0%）］（均P＜0.05）。观察组头颅CT早期低密度改变、大脑中动脉高密度征、完全性前循环梗死、分水岭梗死的发生率与对照组比较，差异均有统计学意义［33.0%（33例）比20.0%（20例），13.0%（13例）比6.0%（6例），39.0%（39例）比26.0%（26例），53.0%（53例）比39.0%（39例）］（均P＜0.05）。结论平均动脉压、血糖、血脂、颅内外动脉狭窄、发热为进展性脑梗死的危险因素；头颅CT早期低密度影、大脑中动脉高密度征、完全性前循环梗死、分水岭梗死对进展性脑梗死发生有早期预警意义。

中青年脑梗死患者不良生活方式干预效果分析

目的评价干预青年脑梗死患者不良生活方式后的效果。方法对2008年1月—2010年6月我科住院的中青年脑梗死患者的不良生活方式进行干预随访,2年后抽取其中的178例患者,根据其生活方式改善与否进行分组研究,90例改善者设为干预组,88例未改善者设为对照组,对比他们的生活方式(饮食结构、吸烟、饮酒、运动时间等),观察两组血压、血脂、血糖水平的差异,观察两组脑梗死复发情况。结果两组患者生活方式的差异有统计学意义(P<0.05);两组患者血压、血脂、血糖的指标差异有统计学意义(P<0.05);两组患者脑梗死复发率不同,差异有统计学意义(P<0.05)。结论干预不良生活方式可降低脑梗死的危险因素,对预防脑梗死的复发具有重要意义。

早期康复护理理念在脑梗死患者护理中的应用效果研究

目的探析早期康复护理理念在脑梗死患者护理中的应用效果。方法回顾性分析本院2016年2月—2018年5月收治的116例脑梗死患者的临床病历资料。按照护理方式的不同将其分为护理组和对照组,每组各58例。对照组接受常规护理模式,护理组运用早期康复护理理念进行护理。采用中国卒中量表(CSS)及SF-36生活质量量表评估患者的神经功能缺损程度及生活质量,并评价其护理满意度。结果护理后,两组患者的CSS评分明显低于护理前,且护理组低于对照组(P<0.01);护理组的护理满意度评分明显高于对照组(P<0.01);护理组生活质量各维度评分明显高于对照组(P<0.01)。结论将早期康复护理理念应用于脑梗死患者的护理中,有助于提高患者的神经功能及生活质量,增进护患关系,改善康复效果,利于预后。

帕金森病肠功能分析及CXCR4在肠神经系统中的表达

目的研究帕金森病(PD)大鼠肠功能的改变,探讨趋化因子CXCL12受体CXCR4在肠神经系统中的功能及作用机制。方法将20只SD大鼠随机分为6-OHDA组和对照组。6-OHDA组经6-OHDA脑内定点注射建立PD动物模型,建模4周后收集两组大鼠1 h粪便排出量,计算粪便含水量。利用免疫荧光染色法检测胃肠神经细胞CXCR4表达的变化。结果与对照组相比,6-OHDA组大鼠1 h粪便排出量及含水量明显降低(P<0.01),而且胃肠神经组织中CXCR4阳性细胞数量明显减少,但荧光强度显著增强(P<0.01)。结论 PD大鼠胃肠神经系统中CXCR4表达水平降低与其胃肠功能障碍密切相关。

高温致神经管畸形相关基因CDK109克隆及其致畸相关性分析

目的通过筛选高温致畸金黄地鼠胚胎神经管cDNA文库,克隆高温致畸相关基因CDK109。方法利用本室构建的高温致畸胚胎神经管cDNA文库,采用噬菌斑原位杂交方法,用寡核苷酸探针筛选cDNA文库,挑取阳性噬菌斑,将其转化为质粒,再通过限制性酶切鉴定阳性克隆并测序,将该基因标记探针与孕8.5 d高温致畸胚胎神经管组织和正常对照胚胎神经管组织总RNA进行NORTHERN杂交,以便确认该基因在高温致神经管畸形中的异常表达。结果成功地从高温致畸金黄地鼠胚胎神经管cDNA文库中筛选出高温致畸相关基因CDK109全长,其在高温致畸组的表达明显高于对照组。结论 CDK109在神经管中的高表达与高温致神经管畸形密切相关。

中脑皮层投射多巴胺神经元的提取及帕潘立酮对其电生理学特性的影响

目的精确示踪并分离中脑皮层多巴胺(DA)能神经元,检测帕潘立酮对其动作电位的影响。方法采用脑立体定位技术,将荧光逆行性示踪剂注射至鼠脑内嗅皮层区,灌注取脑,行冰冻切片;采用免疫组织化学技术进行酪氨酸羟化酶(TH)染色;依据荧光强度分选示踪标记的神经细胞并培养,采用细胞膜片钳技术对其进行电流注射,并加入抗精神病药物帕潘立酮,检测加药前后动作电位的产生及变化。结果准确标记向脑皮质投射的中脑DA能神经元,呈TH阳性,位于腹侧被盖区;筛选出标记的DA能神经元,电流刺激可诱发出DA神经元典型的动作电位,加入抗精神病药物帕潘立酮后,动作电位幅度降低(P<0.05)、宽度变小(P<0.01)。结论精确分离出向脑额叶投射的中脑皮层DA神经元,帕潘立酮可降低此类细胞动作电位幅度及宽度,从而降低细胞的兴奋性。