白藜芦醇后处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的影响及机制

目的探讨白藜芦醇后处理对肾脏缺血再灌注(I/R)损伤的影响及其机制。方法将60只大鼠随机分为假手术组、模型对照组、白藜芦醇低剂量组及白藜芦醇高剂量组,每组各15只。模型对照组、白藜芦醇低剂量组及白藜芦醇高剂量组制备急性肾脏I/R模型,假手术组仅行假手术,对双侧肾脏不进行处理。白藜芦醇低剂量组及白藜芦醇高剂量组造模成功后,待肾脏血流恢复后用16号灌胃针进行灌胃给药。假手术组及模型对照组术后立即灌胃0.9%Na Cl溶液2 m L。给药处理24 h后,经腹主动脉取血,检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平。取左侧肾脏,配成肾组织匀浆,检测丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。采用HE染色法观察病理学变化,Paller法进行肾小管坏死程度评分。结果白藜芦醇低、高剂量组血清BUN、Cr水平均低于模型对照组(P均<0.05),白藜芦醇高剂量组血清BUN、Cr水平均低于白藜芦醇低剂量组(P均<0.05)。白藜芦醇低、高剂量组肾组织MDA含量低于模型对照组,SOD活性高于模型对照组(P均<0.05);白藜芦醇高剂量组肾组织MDA含量低于白藜芦醇低剂量组,SOD活性高于白藜芦醇低剂量组(P均<0.05)。白藜芦醇低、高剂量组肾脏组织病理学改变较模型对照组明显缓解,白藜芦醇高剂量组缓解更明显。白藜芦醇低、高剂量组肾小管坏死程度评分低于模型对照组,白藜芦醇高剂量组低于白藜芦醇低剂量组(P均<0.05)。结论白藜芦醇后处理可明显改善肾脏I/R损伤大鼠的肾功能指标、减轻肾脏组织损伤,其机制可能与抑制肾脏组织氧化应激反应有关。

白细胞介素6可能通过Jak2诱导平滑肌细胞成骨样分化及钙化

目的:探讨IL6诱导平滑肌细胞钙化及成骨样分化的机制。方法:体外培养平滑肌细胞,分别给予IL6、IL6 + CP690550干预细胞,设空白对照。免疫印迹法(Western blot)检测钙化相关分子TNAP、转录因子Runx2、Jak2的表达,邻甲酚酞法(O-cresolphthalein)检测不同时间的钙盐含量。结果:IL6组较空白组,钙盐含量明显高于对照组,同时TNAP、Runx2、Jak2的表达明显上调。给予Jak2抑制剂后,较空白组TNAP、Runx2表达明显下调。结论:IL6可能通过Jak2诱导平滑肌细胞成骨样分化及钙化。

浸润性乳癌PBMC核心基因分析及mRNA-miRNA-lncRNA网络构建

目的寻找浸润性乳癌病人外周血单个核细胞(PBMC)的核心(HUB)基因,并构建mRNA-miRNA-lncRNA网络,探讨浸润性乳癌诊疗新靶点。方法基于对基因表达综合数据库(GEO)的数据分析,获取浸润性乳癌病人术前PBMC的表达谱。应用GEO2R在线工具筛选差异基因,DAVID工具进行GO功能注释分析和KEGG信号通路分析,STRING数据库构建差异基因蛋白互作(PPI)网络,CytoScape工具筛选HUB基因。应用mirDIP与starbase工具预测HUB基因上游的miRNA以及lncRNA并构建对应关系网络。结果获得差异基因87个,其中上调基因59个,下调基因28个。差异基因的本体功能主要富集在血红蛋白复合物、胞浆组分、RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控等方面,KEGG通路主要与类风湿性关节炎、单纯疱疹病毒感染、破骨细胞分化、甲型流感病毒感染等相关。共获得4个HUB基因ALAS2、EGR1、FOS、DUSP1,并预测到符合标准的7个miRNA及20个lncRNA。结论本研究获得了浸润性乳癌病人的PBMC差异基因与HUB基因、可视化mRNA-miRNA-lncRNA网络,为通过PBMC对浸润性乳癌进行诊治提供可靠的理论基础与方向。

原发性胆汁性胆管炎的临床特征及危险因素分析

目的:分析原发性胆汁性胆管炎(Primary biliary cholangitis, PBC)的临床特征及其危险因素,为PBC的诊断治疗提供参考和支持。方法:选取2020年9月~2021年11月在该院就诊的PBC患者180例为患病组,另外收集同期在该院健康体检中心检查的74例健康人为对照。分别收集两组研究对象的生化检查、抗体检测和家族史等资料。通过统计分析临床特征的差异性和危险因素。结果:对两组研究对象的一般检查进行分析发现,白蛋白、球蛋白、直接胆红素、间接胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、γ-氨基酰基转移、碱性磷酸酶、腺苷酸脱氨酶、亮氨酸转肽酶、岩藻糖苷酶、总胆汁酸和血小板在PBC组和健康对照组(HC)之间有差异。对差异性指标进行二元Logistic回归分析后,结果显示白蛋白、谷草转氨酶、γ-氨基酰基转移酶、总胆汁酸(P值均【0.05)均是PBC的危险因素。结论:白蛋白、谷草转氨酶、γ-氨基酰基转移酶、总胆汁酸均是PBC的危险因素。

一种循环高表达IL-6慢性系统性炎症小鼠模型的建立

目的通过外源性引入IL-6载体,实现在循环中长期高表达IL-6,构建一种慢性系统性炎症的动物模型。方法构建重组鼠IL-6编码腺相关病毒(IL-6-encoding adeno-associated virus,AAV-IL-6)。24周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为AAV-IL-6组、空白载体对照组、空白对照组,每组各7只,分别在干预开始0、8、16周尾静脉注射100μl 0.5×10^(10) vp/ml的AAV-IL-6、空白载体AAV或相同体积的生理盐水。ELISA检测小鼠血清IL-6水平。观察小鼠一般情况、血常规、血生化、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)。在24周干预结束后处死小鼠,取心肌、肝脏、脾脏、股四头肌、膝关节、股骨中段做HE染色。结果在干预后4、8、16及24周,AAV-IL-6组小鼠血清IL-6水平为(75.41~169.28)pg/ml,而两对照组均低于检测下限(7.8 pg/ml)。干预后24周,AAV-IL-6组小鼠体重明显低于两对照组;AAV-IL-6组小鼠中性粒细胞计数和CRP水平均高于两对照组,而白蛋白、肌酐、甘油三酯和胆固醇水平低于两对照组,上述指标在对照组之间差异无统计学意义;AAV-IL-6组及空白载体对照组小鼠淋巴细胞均高于空白对照组;3组小鼠肝、肾功能在干预结束后均正常。组织病理显示,AAV-IL-6组小鼠肝脏中央静脉区及心肌肌纤维间隙、骨骼肌肌纤维间隙灶性淋巴细胞浸润,脾脏弥漫性多核巨细胞浸润;骨骼肌肌纤维萎缩;骺板结构紊乱和软骨增生区变小,骨小梁变薄、稀疏;骨皮质变薄、类骨质减少,两对照组小鼠无相应的组织病理改变表现。结论通过重复尾静脉注射AAV-IL-6能够实现小鼠长期循环高表达IL-6,初步检测该小鼠具有慢性系统性炎症表型,为相关研究提供了一种安全、有效且相对简单可及的动物模型。

白细胞介素-6通过反式信号通路诱导脐动脉平滑细胞成骨样分化及钙化

目的探讨IL-6诱导人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)成骨样分化及钙化的跨膜信号转导机制。方法体外培养HUASMC,分别给予IL-6、IL-6+可溶性IL-6受体(sIL-6R)、IL-6+sIL-6R+可溶性gp130(sgp130)刺激,设空白对照。茜素红及Von Kossa染色检测钙化水平,免疫印迹检测钙化相关分子组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)、骨桥蛋白(OPN)、骨形态发生蛋白(BMP-2)及Runt相关转录因子2(Runx2)表达,免疫荧光检测膜型IL-6R(mIL-6R)表达。计量资料组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果IL-6+sIL-6R组钙化染色较其他组增多,IL-6+sIL-6R+sgp130组较IL-6组及空白组增多。蛋白印迹结果显示,干预12 h,TNAP蛋白表达量:空白组(0.44±0.08)、IL-6组(0.52±0.14)、IL-6+sIL-6R组(0.84±0.16)、IL-6+sIL-6R+sgp130组(0.55±0.10),各组差异具有统计学意义(F=290.96,P<0.001);干预72 h,OPN蛋白的表达量:空白组(0.61±0.84)、IL-6组(0.95±0.16)、IL-6+sIL-6R组(1.65±0.24)、IL-6+sIL-6R+sgp130组(0.99±0.10),各组差异具有统计学意义(F=507.72,P<0.001)。干预12 h,BMP-2蛋白的表达量:空白组((0.77±0.05)、IL-6组(1.69±0.16)、IL-6+sIL-6R组(2.81±0.26)、IL-6+sIL-6R+sgp130组(0.57±0.12),各组差异具有统计学意义(F=959.09,P<0.001);干预72 h,Runx2蛋白的表达量:空白组(0.57±0.03)、IL-6组(0.92±0.10)、IL-6+sIL-6R组(1.31±0.13)、IL-6+sIL-6R+sgp130组(0.66±0.06),差异具有统计学意义(F=1141.27,P<0.001)。IL-6+sIL-6R组中TNAP、OPN、BMP-2、Runx2的表达均高于其他组。免疫荧光结果显示HUASMC少量表达mIL-6R。结论IL-6可能主要通过sIL-6R介导的反式信号通路诱导HUASMC成骨样分化和钙化。