稳定表达Keap1的H460-N5细胞株的建立及增敏抗肿瘤药物作用的研究

目的:建立野生型Keap1过表达的H460细胞株降表达Nrf2,检测Nrf2-ARE信号通路对肿瘤细胞耐药性的影响。方法:H460细胞转染mKeap1-pEGFP后经过长期筛选得到稳定表达Keap1蛋白质的细胞株,通过Western blotting和荧光定量PCR的方法进行检测;并通过多次继代培养,细胞株H460-N5稳定表达mKeap1,Nrf2及其调控基因均显著降表达;用MTS法检测抗癌药物奥沙利铂、阿霉素和依托泊苷对细胞增殖抑制率。结果:H460细胞转染mKeap1-pEGFP后筛选建立Nrf2降表达的稳定细胞株H460-N5。MTS数据显示,与对照组相比,抗癌药物奥沙利铂、阿霉素和依托泊苷对H460-N5细胞的抗增殖作用更显著。当奥沙利铂和依托泊苷分别在93μmol/L和100μmol/L浓度作用于对照组细胞株H460-N0时,药物作用接近半数抑制率(IC50);而在H460-N5细胞株中,两种抗癌药物的IC50分别为42μmol/L和30μmol/L。阿霉素对H460-N0细胞的IC50>3 mg/L,而对H460-N5细胞的IC50约为2 mg/L。结论:Keap1过表达的H460-N5细胞Nrf2及调控基因显著降低并增敏抗癌药物奥沙利铂、阿霉素和依托泊苷对肿瘤细胞的增殖抑制作用。

转录抑制剂DRB和α-Amanitin对A549细胞中Nrf2定位影响的研究

目的:利用细胞核亚细胞器结构的一些特异性蛋白质SC35、核孔复合体(nuclear porecomplex,NPC)、RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)及Y12等标记亚细胞器,探讨转录抑制剂5,6-dichloro-1-β-D-ribofuranosylbenzimidazole(DRB)与α-Amanitin对人非小细胞肺癌A549细胞中Nrf2的表达与定位的影响。方法:①50 mg/L DRB和2.5 mg/Lα-Amanitin分别作用于A549细胞1 h和6 h后,Western blotting检测Nrf2及其相关蛋白的表达变化。②50 mg/L DRB和2.5 mg/Lα-Amanitin分别处理A549细胞1 h,利用免疫荧光细胞技术检测Nrf2、SC35、NPC、RNAPolⅡ、Y12形态结构的变化,并研究Nrf2定位的变化。结果:①与对照组相比,DRB和α-Amanitin作用1 h后,Nrf2及其调控的下游基因HO-1、AKR1C和NQO1的蛋白质表达变化不明显,但6 h作用后,这些蛋白质的表达明显降低。②激光共聚焦显微镜观察显示,细胞经DRB和α-Amanitin处理1 h后,SC35的荧光强度明显增强,PolⅡ的荧光强度减弱,而Nrf2的定位无明显改变;NPC、Y12的表达无明显变化,且与Nrf2无共定位现象。结论:DRB和α-Amanitin能抑制Nrf2及其HO-1、AKR1C和NQO1的表达,但是对Nrf2的定位没有显著影响。

离焦诱导豚鼠近视眼的生物学参数分析

目的分析离焦诱导豚鼠近视眼的生物学参数变化特征。方法将28只2-3周龄豚鼠随机分为离焦组和对照组。两组右眼分别配戴-10D和0D的硬性角膜接触镜（RGP）,左眼不戴镜。于戴镜前和戴镜后3d、7d、10d、14d、21d分别测量豚鼠眼球屈光度、玻璃体腔深度和眼轴长度。结果随戴镜时间延长,离焦组戴镜眼屈光度逐渐降低（向近视漂移）,眼轴和玻璃体腔深度逐渐延长。与不戴镜眼和对照组的戴镜眼分别比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）;戴镜3周后,离焦组戴镜眼玻璃体腔深度变化值与眼轴变化值之比（0.59±0.11）与不戴镜眼（0.48±0.09）及对照组的戴镜眼（0.47±0.08）分别比较,差异均有统计学意义（P=0.008;P=0.003）;离焦组戴镜眼在戴镜后14d屈光度（1.34±0.18）和21d屈光度（1.29±0.21）相比,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 -10D透镜可以成功诱导豚鼠近视眼发生,诱导眼眼轴延长主要以玻璃体腔延长为主。在诱导后14d内屈光度进展较快,之后变慢。

tBHQ和Sulforaphane对Caco2细胞Nrf2-ARE信号通路的影响

目的:研究抗氧化性诱导剂(激活剂)叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone,tBHQ)和莱菔硫烷[1-异硫氰酸-(4R,S)-(甲基亚磺酰基)丁烷](sulforaphane,SFN)对人结肠癌细胞株Caco2的Nrf2-ARE信号通路的影响。方法:选取不同的时间点,分别用20μmol/L tBHQ和5μmol/L SFN处理Caco2细胞,从蛋白质水平、mRNA水平和蛋白质定位3个方面,分别用Westernblotting、real-time PCR和免疫荧光染色(immunoflourescence staining,IF)方法来检测Nrf2以及其调控基因AKR1C1和NQO1(Western blotting,real-time PCR)表达的变化。结果:细胞核中Nrf2基因表达的最佳时间点为加药诱导后8 h,细胞质中Nrf2调控基因AKR1C1和NQO1表达的最佳时间点为加药诱导后16 h。tBHQ的诱导作用在撤去之后仍能持续4 h。结论:本研究使用激活剂tBHQ和SFN对Caco2细胞的Nrf2-ARE信号通路进行诱导,取得了最佳的诱导时间点,并研究了撤去tBHQ后持续诱导时间,为今后在肿瘤化学预防研究中,筛选合适的激活剂及其剂量和使用次数提供了重要依据,也为研究Nrf2-ARE信号通路的抑制剂提供了重要信息。

WTO法与国际私法

WTO法作为法律发展史上的里程碑 ,是各国法律和全球法律发展的结果 ,而它的产生又势必影响到各国国内的各个法律部门以及国际法的发展。在我国人们讨论更多的是 WTO法对民法、行政法、国际经济法的影响 ,但人们通常都忽略了国际私法和 WTO法的关系。本文就是通过分析 WTO法与国际私法的关系 ,来表明国际私法和 WTO法的互动关系 ,以及

两级水解酸化技术预处理制药废水的试验研究

采用两级水解酸化反应器,针对制药废水的特点,重点对水力停留时间、挥发性脂肪酸产量、水解酸化率、废水生物降解性能的改善、污染物的去除转化和剩余污泥稳定性等因素进行了研究。

大连金州区城市交通噪声的监测分析与防治对策

通过对大连市金州区城市交通噪声污染状况进行调查、监测,发现城市交通噪声污染状况不容忽视,提出了扩建城市环城公路、拓展和平整路面、噪声技术治理以及加强城市交通管理等城市交通噪声综合防治的对策。

大数据背景下财务数据分析管理的探究

大数据时代各个行业的财务数据分析意识不断提升,企业逐步应用大数据技术而进行财务数据的分析与处理。大数据技术的合理应用使企业财务管理的理念及本质内涵发生了转变,同时财务数据处理及利用的标准也与以往有较大提升。基于此,本文分析了大数据背景下传统财务管理受到的影响,并对财务数据分析中应用大数据技术的重要性展开了探讨,进而提出优化企业财务数据分析管理的有效策略,以期为企业财务数据分析管理效果的有效提升提供参考。

培养小学生语言表达能力策略的研究

语言是人类重要的交际工具,是人们进行沟通的主要表达方式。语言是思维的工具,也是思维的结果。思维的发展与语言的 表达有着密切的关系。人们思维的结果,认识活动的成就都是通过语言表达出来;反过来,语言的磨练也将促使思维更加精确、合理。在 教学中教师应逐步要求学生用确切的、简练的、清晰的语言来表达自己的看法。本文针对小学生语言表达能力的培养谈几点个人的看法。

中储式钢球磨制粉系统经济运行方式研究

中间储仓式钢球磨煤机制粉系统在安全性及经济性方面问题较多 ,在保证系统安全性的基础上重点从经济运行的角度研究此系统最优化运行方式 。

支气管扩张病人的护理

支气管扩张是常见的慢性呼吸道疾病,多发于呼吸道感染和支气管阻塞。临床上以慢性咳嗽、大量脓痰和反复咯血等表现,多起病于儿童及青年.我们通过专科护理和心理护理,对促进患者的早日康复起到了积极的作用。1 一般护理发热、大量咯痰护理:应绝对卧床休息,由护理人员协助料理生活,注意调节室内空气、温度、湿度,

音乐欣赏教学中实现情感体验的策略

社会文明的快速发展,加强了人们对音乐教育工作的重视。音乐,是一门富有情感的教育,欣赏音乐作品,能够促进欣赏者情感的升华与延伸。对音乐作品的审美性进行开发,利用情感体验提高学生的课堂参与度,是促进音乐欣赏教学创新的重要方法。在欣赏中接受音乐的洗礼,培养学生的审美能力,有利于音乐课堂的丰富多彩。

新高考改革下的高中政治教学模式探析

新高考方案出台后,高中政治教学改革也需要强化推进,即改变过去那种只关注成绩而忽视学生综合素质培养的教学模式,以发挥学生的主体作用为起点推广探究式学习。对政治教师来说,因为新高考模式下高中政治已经成为了'选修课',所以也应当以转变教学理念、创新教学方法为起点适应这方面的变化,要培养学生的学习积极性并关注学生的个性发展,只有这样才能够在新高考改革背景下提高高中政治教学质量。以下笔者对此类问题进行了分析探究,希望对进一步推进相关工作的优化落实有所启示。

零售企业财务共享体系的构建

新常态下,零售企业构建财务共享体系,在降低财务管理成本、整合财务数据资源的基础上,帮助企业规避经营风险,实现企业经济效益的提升和健康持续的发展。本文首先概述了构建财务共享体系的多重价值,随后分别从明确总体目标、完善组织架构、财务流程再造、信息平台规划等方面,详细分析了财务共享体系的构建思路。最后基于工作实践,从加强财务人员培训和保障财务信息安全方面,总结了财务共享体系稳定运行的管理措施。

多媒体在小学体育课程中的运用

二十一世纪是一个信息技术迅猛发展的重要时期,面向信息社会,新世纪人才应具备的一项基本素质就是信息能力。多媒体教学是指应用计算机多媒体技术,以其鲜明的图像、生动的画面、连续多变的动画及音乐效果来优化教学过程的一种新型教学辅助手段。多媒体在进入体育课堂的具体过程中要找准切入点,达到直观、形象的教学效果,才能发挥其最大功效。

让每一个孩子都能沐浴到爱的阳光——浅谈如何运用情感教育对待班级中的学困生

学困生的差距并非与生俱来,它是在成长过程中受到某些方面的不良影响而造成的,他们也需要得到更多的关爱,更多的关注。因此,转化学困生是班主任工作中的重中之重。