基于指纹图谱结合化学模式识别对接骨草的质量评价

目的建立接骨草Sambucus javanica的HPLC指纹图谱,并结合化学模式识别为接骨草药材质量评价及临床应用提供参考。方法采用HPLC-DAD法,以乙腈-0.2%磷酸溶液梯度洗脱,建立接骨草指纹图谱,同时测定新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸的含量;采用相似度评价、聚类分析(cluster analysis,CA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘-判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)等化学模式识别对差异性特征成分进行筛选。结果建立的指纹图谱方法符合方法学要求,17批接骨草药材HPLC指纹图谱共标定9个共有峰,相似度均大于0.9,通过聚类分析将不同产地接骨草分为3类,聚类分析与主成分分析结果一致;综合分析筛选绿原酸、隐绿原酸和新绿原酸作为接骨草有效成分,质量分数分别在0.060%~1.007%、0.014%~0.074%、0.004%~0.151%。结论采用指纹图谱结合化学模式识别技术可快速、有效地筛选出接骨草的差异性特征成分,为接骨草药材质量评价及临床应用提供参考。

川赤芍实时荧光定量PCR内参基因的筛选与验证

川赤芍与芍药共同作为《中国药典》著名药材赤芍的基原植物,具有重要的药用价值,且在花卉市场的潜力巨大。筛选稳定可靠的内参基因是开展川赤芍分子研究的必要前提。该研究从川赤芍的转录组数据中选取Actin和GAPDH 2个内参基因作为候选基因,利用实时荧光定量技术(qRT-PCR)检测2个候选基因在川赤芍的不同组织(韧皮部、木质部、茎、叶、叶柄、子房)和不同生长时期(萌动期、开花期、休眠期)的表达水平,然后利用geNorm、NormFinder、BestKeeper、ΔCT和RefFinder综合分析2个内参基因表达的稳定性,结果表明Actin和GAPDH在川赤芍不同组织和不同生长时期中的表达模式均稳定。该研究进一步检测川赤芍转录组数据中8个基因(Pv-TPS01、Pv-TPS02、Pv-CYP01、Pv-CYP02、Pv-CYP03、Pv-BAHD01、Pv-UGT01、Pv-UGT02)在不同组织中的表达水平,结果表明,以Actin和GAPDH分别作为内参基因,8个基因在川赤芍不同组织部位的表达趋势均一致,验证了Actin和GAPDH作为川赤芍内参基因的可靠性。综上,该研究发现Actin和GAPDH可作为川赤芍不同组织和不同生长时期中基因表达水平研究的内参基因。

基于转录组挖掘球药隔重楼螺甾烷型重楼皂苷生物合成相关基因

目的以球药隔重楼Paris fargesii根茎、茎和叶为材料,探究螺甾烷型重楼皂苷的生物合成基因。方法采用HPLC分析6个螺甾烷型重楼皂苷含量,进一步利用Illumina HiSeq X Ten平台进行转录组测序,结合定量和转录组数据进行生信分析。结果6个螺甾烷型重楼皂苷在球药隔重楼根茎、茎和叶中的含量具有显著差异。Illumina转录组测序共获得61755条非冗余unigenes,其中30263条(49.0%)被成功注释。催化生成薯蓣皂苷元的31个关键基因均被成功鉴定,且基因表达模式与皂苷的积累水平总体一致,其中IDI、8,7SI-4、CYP90G4、SMO2-2、C5-SD1、CYP51G、C14-R-2、HMGCR、CPI-5、CYP94D108、CAS、HMGCS、SMO1-3、SSR1-3、SQS、ispH和DXR等基因与重楼皂苷的积累呈显著正相关。共获得了61条尿苷二磷酸糖基转移酶(UGT)基因,其中30条潜在参与重楼皂苷的糖基化修饰。结论球药隔重楼根茎、茎和叶中皂苷合成基因表达模式与皂苷积累规律存在一致性,鉴定的基因可指导该类活性产物的生物合成途径解析。

基于多指标成分评价川西高原野生川赤芍的质量

目的 研究川西高原上野生川赤芍Paeonia veitchii入药部位(根)和非入药部位(地上部分)中没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸和丹皮酚7种化学成分的含量,并综合评价其品质。方法 以上述7种成分为对照品,采用高效液相色谱(HPLC)法,Agilent HC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃,体积流量1 mL/min,进样量10μL,检测波长230 nm,乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脱;采用2012版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件构建指纹图谱;采用聚类热图分析、相似度分析、主成分分析(principal component analysis,PCA)、偏最小二乘回归分析(partial leastsquares discrimination analysis,PLS-DA)等方法对各产地川赤芍进行评价。结果 野生川赤芍地上部分和根中均含有7种化学成分,仅有3批次地上部分样品中芍药苷含量不符合《中国药典》2020年版的要求。建立了野生川赤芍根和地上部分的HPLC指纹图谱,二者均标定了19个相同的共有峰,并指认出其中的7个(没食子酸、氧化芍药苷、儿茶素、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酸、丹皮酚)。不同产地川赤芍的化学成分种类和含量存在一定差异且存在明显的区域一致性特征,但芍药苷的差异相对较小。康定市老榆林、雅江县相格宗、阿坝县查理加油站和若尔盖县巴西乡的川赤芍药材质量相对较好。结论 建立的HPLC方法可用于分析川赤芍中的主要化合物,川西高原野生川赤芍药材质量符合《中国药典》要求,川赤芍根和地上部分中化学成分的种类和含量相近,地上部分具有开发利用的潜力。

唐古碎米荠总黄酮的富集纯化工艺及体外抗氧化活性研究

目的:优化唐古碎米荠总黄酮的富集纯化工艺,并比较唐古碎米荠地上部分(石格菜)、根及根状茎体外抗氧化活性。方法:考察不同型号大孔吸附树脂对总黄酮的吸附解吸能力,以上样液质量浓度和洗脱剂体积为影响因素考察最佳树脂吸附能力,以洗脱剂质量分数、吸附时间、洗脱剂流量为影响因素,采用三因素三水平的Box-Behnken响应面法优化富集纯化工艺。并对富集纯化后的总黄酮清除1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)自由基、清除2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐自由基及还原能力进行测定。结果:D101大孔吸附树脂富集纯化效果最好,最佳条件为:上样药液生药质量浓度为0.20 g生药/mL、洗脱剂质量分数55%、吸附时间45 min、洗脱剂流量4 BV/h,洗脱剂体积为48 mL/g干树脂;唐古碎米荠总黄酮纯度从7.59%上升到了37.59%;唐古碎米荠地上部分(石格菜)总黄酮的体外抗氧化活性强于根及根状茎。结论:该工艺稳定可行;提示唐古碎米荠地上部分(石格菜)作为营养、健康、绿色的青藏高原地区特色药食两用植物,具有较好的开发潜力。

基于UPLC法测定指标成分结合指纹图谱评价不同产地川赤芍不同部位的质量

目的采用超高效液相色谱法(UPLC)分别对18个产地川赤芍Paeoniaveitchii的根、茎和叶中的芍药苷、氧化芍药苷、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖3种成分进行含量测定,并建立其指纹图谱,基于多元统计法综合分析川赤芍根、茎和叶中主要化学成分的整体分布以及在不同部位中的差异性,并对川赤芍品质进行综合评价。方法采用UPLC法,色谱条件:C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,柱温30℃,体积流量0.2 m L/min,进样量1μL,检测波长230 nm;采用2012版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件建立图谱;并采用差异分析、相似度分析、主成分分析(PCA)、TOPSIS分析和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)对川赤芍品质进行综合评价。结果根据含量测定结果,川赤芍中氧化芍药苷含量大小为根>茎>叶;芍药苷、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖含量大小为根>叶>茎。其中,根样品中的芍药苷含量均大于1.8%,符合《中国药典》2020年版规定;茎、叶中芍药苷含量与根较为接近。并建立了根、茎、叶的UPLC指纹图谱,共标定了17个共有峰,并指认出3个共有峰(芍药苷、氧化芍药苷、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖)。相似度评价结果显示,不同产地川赤芍根、茎、叶的相似度均较好,质量稳定。结论指纹图谱可有效评价不同产地川赤芍品质。川赤芍茎、叶中芍药苷含量与根中相近,基于《中国药典》2020年版以芍药苷为质量控制指标,为综合评价川赤芍的品质和开发新的入药部位等研究提供相关理论基础。

白花败酱草的化学成分、药理活性及质量控制研究进展

白花败酱草Patrinia villosa在清热解毒、消痈排脓的功用上是一味民间传统、运用广泛的中草药材,含多种氨基酸、维生素、可溶性糖等,营养价值丰富,在我国作为传统野菜食用已有两千年历史。1973年日本学者从日本产白花败酱草中分离出3种环烯醚萜类成分后,截至目前,已从中分离出黄酮类、环烯醚萜类、有机酸类、三萜类、苯丙素类、甾体等多种化学成分,具有抗氧化、抗肿瘤、抗腹泻、抗菌、镇静、保肝等药理作用;研究表明,其黄酮类、皂苷类、苯丙素类、三萜类化合物等为其重要药理活性基础物质。由于历代医药古籍记载模糊、各地用药习惯不同导致药材使用混乱,药材质量无法控制,目前已有研究者采用黄酮类、有机酸类、苯丙素类、三萜皂苷类等化合物对其进行质量控制研究。该研究依据前人对白花败酱草的研究成果,依次从化学成分、药理活性及质量控制方面进行归纳与概括,进一步为临床用药安全有效提供依据,为后续实验研究奠定基础。