目的:构建尤文肉瘤融合基因EWS-FLI1重组腺病毒,利用此腺病毒感染外周血单核细胞(PBMC),培养树突细胞(DC),检测感染后的DC致敏的淋巴细胞对尤文肉瘤细胞系的杀伤作用。方法:将质粒Pec1/EW S-FLI1酶切,切出的EWS-FLI1 cDNA片段克隆至腺...目的:构建尤文肉瘤融合基因EWS-FLI1重组腺病毒,利用此腺病毒感染外周血单核细胞(PBMC),培养树突细胞(DC),检测感染后的DC致敏的淋巴细胞对尤文肉瘤细胞系的杀伤作用。方法:将质粒Pec1/EW S-FLI1酶切,切出的EWS-FLI1 cDNA片段克隆至腺病毒穿梭质粒padtrack-cmv的hCMV启动子下游。将穿梭质粒和骨架质粒共同转化大肠杆菌B J5183菌株,获得同源重组后的腺病毒质粒pADeasy-1/EW S-FLI1。将此质粒转染293细胞,包装产生腺病毒Ad EW S-FLI1。扩增、纯化产生高滴度的Ad EW S-FLI1。转染PBMC并经过鉴定后致敏淋巴细胞,4 h51Cr释放试验测定致敏后的淋巴细胞对尤文肉瘤细胞系的杀伤作用。结果:同源重组后产生的pADeasy-1/EW S-FLI1经PCR鉴定构建成功,纯化后的滴度为4×1010/mL。转染PBMC后,RT-PCR证实有EW S-FLI1 mRNA的转录。致敏后的淋巴细胞对尤文肉瘤细胞系有明显的杀伤作用,效靶比在40∶1时,对尤文肉瘤673细胞系的杀伤率为35.1800%±0.0128%,和对照组相比差异有统计学意义。结论:重组腺病毒Ad EW S-FLI1构建成功,并能在PBMC中稳定有效地表达,Ad EW S-FLI1转染的DC可高效地诱发机体T细胞的特异性抗肿瘤免疫应答作用。展开更多
目的:从患者的主观角度和临床客观指标评价人工韧带用于耻骨肿瘤切除后重建的临床效果。方法:选择2012年2月至2018年2月因耻骨肿瘤就诊于北京大学人民医院骨与软组织肿瘤治疗中心,并接受手术切除和人工韧带重建的25例患者进行回顾性分析...目的:从患者的主观角度和临床客观指标评价人工韧带用于耻骨肿瘤切除后重建的临床效果。方法:选择2012年2月至2018年2月因耻骨肿瘤就诊于北京大学人民医院骨与软组织肿瘤治疗中心,并接受手术切除和人工韧带重建的25例患者进行回顾性分析,评价其临床疗效以及相关并发症。结果:所有患者均顺利接受手术,单纯切除耻骨上支的患者8例,耻骨下支5例,耻骨上下支一并切除的12例。平均出血量(774±580) m L,平均手术时间(138±25) min,平均住院时间(19±6) d。1例患者术后出现伤口愈合问题,经清创后愈合。平均随访时间为(37±21)个月,肿瘤复发1例,1例转移癌(肾癌)患者因原发肿瘤进展而死亡。无切口疝,无韧带感染以及局部异物感等相关并发症。23例患者术后活动不需要借助任何辅助设施,2例患者活动时需要拄单拐。19例患者未诉任何疼痛不适,3例患者诉活动时感轻度疼痛,3例患者中度疼痛。评价术后功能的MSTS评分平均为87±4。结论:人工韧带可应用于耻骨肿瘤切除后下腹壁缺损的重建,此重建方式可以预防腹壁疝的发生,同时可以通过减小残腔而降低术后感染的发生率,从而获得患者术后较好的主观评价。展开更多
文摘目的:构建尤文肉瘤融合基因EWS-FLI1重组腺病毒,利用此腺病毒感染外周血单核细胞(PBMC),培养树突细胞(DC),检测感染后的DC致敏的淋巴细胞对尤文肉瘤细胞系的杀伤作用。方法:将质粒Pec1/EW S-FLI1酶切,切出的EWS-FLI1 cDNA片段克隆至腺病毒穿梭质粒padtrack-cmv的hCMV启动子下游。将穿梭质粒和骨架质粒共同转化大肠杆菌B J5183菌株,获得同源重组后的腺病毒质粒pADeasy-1/EW S-FLI1。将此质粒转染293细胞,包装产生腺病毒Ad EW S-FLI1。扩增、纯化产生高滴度的Ad EW S-FLI1。转染PBMC并经过鉴定后致敏淋巴细胞,4 h51Cr释放试验测定致敏后的淋巴细胞对尤文肉瘤细胞系的杀伤作用。结果:同源重组后产生的pADeasy-1/EW S-FLI1经PCR鉴定构建成功,纯化后的滴度为4×1010/mL。转染PBMC后,RT-PCR证实有EW S-FLI1 mRNA的转录。致敏后的淋巴细胞对尤文肉瘤细胞系有明显的杀伤作用,效靶比在40∶1时,对尤文肉瘤673细胞系的杀伤率为35.1800%±0.0128%,和对照组相比差异有统计学意义。结论:重组腺病毒Ad EW S-FLI1构建成功,并能在PBMC中稳定有效地表达,Ad EW S-FLI1转染的DC可高效地诱发机体T细胞的特异性抗肿瘤免疫应答作用。
文摘目的:从患者的主观角度和临床客观指标评价人工韧带用于耻骨肿瘤切除后重建的临床效果。方法:选择2012年2月至2018年2月因耻骨肿瘤就诊于北京大学人民医院骨与软组织肿瘤治疗中心,并接受手术切除和人工韧带重建的25例患者进行回顾性分析,评价其临床疗效以及相关并发症。结果:所有患者均顺利接受手术,单纯切除耻骨上支的患者8例,耻骨下支5例,耻骨上下支一并切除的12例。平均出血量(774±580) m L,平均手术时间(138±25) min,平均住院时间(19±6) d。1例患者术后出现伤口愈合问题,经清创后愈合。平均随访时间为(37±21)个月,肿瘤复发1例,1例转移癌(肾癌)患者因原发肿瘤进展而死亡。无切口疝,无韧带感染以及局部异物感等相关并发症。23例患者术后活动不需要借助任何辅助设施,2例患者活动时需要拄单拐。19例患者未诉任何疼痛不适,3例患者诉活动时感轻度疼痛,3例患者中度疼痛。评价术后功能的MSTS评分平均为87±4。结论:人工韧带可应用于耻骨肿瘤切除后下腹壁缺损的重建,此重建方式可以预防腹壁疝的发生,同时可以通过减小残腔而降低术后感染的发生率,从而获得患者术后较好的主观评价。
