前体饲喂、诱导子和光照联合使用对葡萄细胞培养合成花青素的影响

苯丙氨酸前体饲喂分别和环糊精、葡聚糖、茉莉酸甲酯、黑曲霉和直喙镰孢茵提取液五种诱导子联合作用，其中以与茉莉酸甲酯的联合作用时葡萄细胞培养生产花青素的影响最大，可使单位鲜细胞花青素含量提高2．7倍，花青素产量提高3．4倍，实验证明两者在培养后第4天加入效果最好。在30μmol／L苯丙氨酸、218μmol／L茉莉酸甲酯和3000-4000lx光照条件下，不同花青素产量的细胞株都能显著提高花青素产量，但低产株VV06比高产株VV05具有更大的产率提高潜力。该条件下VV05和VV06花青素产量分别达到2975和4090CV／L，是对照组的2．5倍和5.2倍。

继代周期和接种量对葡萄细胞培养的影响

在每种不同的继代周期和接种量条件下,葡萄细胞在连续10次继代培养过程中的生物量、花青素含量、胞内糖、胞内蛋白及胞内总磷均表现出不同程度的波动。不同接种量对培养不稳定性的影响比不同继代周期大;在所考察的条件中,7d继代周期与1.60g接种量组合的继代条件下花青素合成相对稳定;花青素合成与胞内蔗糖或胞内总磷水平呈负相关。

细胞均一性对葡萄细胞生长和花青素合成的影响

通过色差筛选法建立了一个相对均一的葡萄细胞悬浮系E,其细胞团较小,在长期继代培养过程中花青素合成能力的变异系数为8.7%,重复摇瓶实验的变异系数为5%。以E为实验材料进行的各组前体饲喂、诱导子添加、光照等联合作用实验,其生物量和花青素合成的变异系数均可控制在12%以内,充分说明了培养体系的均一性对维持稳定生产的重要性;黑暗条件下添加30μmol/L苯丙氨酸(Phe)和218μmol/L茉莉酸甲酯(MeJA)可使单位细胞花青素含量达到对照组的5.89倍,花青素产量为对照组的4.30倍,且连续5次继代培养过程中生物量和花青素合成的变异系数均比对照组降低。

杭州湾海域产纤维素酶海洋真菌的分离筛选及鉴定

[目的]筛选产纤维素酶的海洋真菌资源。[方法]从杭州湾海域采集海水和海泥(沙)等样品,采用海水PDA培养基进行富集培养,然后在羧甲基纤维素钠培养基上进行真菌分离纯化,采用刚果红染色法筛选产酶菌株,并对其中纤维素酶活性较高的菌株进行了26S rDNA ITS扩增及序列测定。[结果]共筛选到72株产纤维素酶的海洋真菌,两株高产菌株的同源序列比对结果分别与Penicilliumfuniculosum和Pseudocercosporella fraxini的同源性高达100%和99%。[结论]该研究为纤维素酶高产菌株的改造和定向进化奠定了资源基础。

产蛋白酶海洋细菌的筛选及产酶工艺优化

[目的]筛选产蛋白酶的海洋细菌资源。[方法]分别采用2216E培养基和酪蛋白固体培养基,对采自宁波洋沙山和象山海域的海水进行微生物的分离与纯化,采用平板透明圈法初筛和酶活力测定法复筛,采用16S r DNA序列分析进行菌株鉴定,并进行产酶工艺优化研究。[结果]纯化出15株产蛋白酶海洋细菌,从中筛选出1株产蛋白酶活力最高的菌株PB02,经鉴定为交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)。该菌株最适培养温度为20℃,最适装液量为10%,最适接种量为0.5%,最适转速为100 r/min,最适培养基pH为7。酶促反应最适温度为40℃,最适pH为10。[结论]该研究为蛋白酶高产菌株的改造和定向进化奠定了资源基础。

抗农业病害真菌的海洋细菌筛选·发酵及分离初步研究

[目的]筛选对农业病害真菌有较强拮抗作用的海洋细菌。[方法]以油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)为筛选模型,采用平皿拮抗法筛选抗菌活性,对活性菌株进行发酵工艺优化,并对活性物质提取进行初探。[结果]海洋细菌菌株MB133具有明显抑菌现象,最优发酵工艺条件为最适培养温度28℃,发酵液中最适葡萄糖浓度2.0%,最适培养时间72 h;热稳定性试验表明活性物质对热不稳定;醇沉法提取有效物质发现抑菌组分在沉淀中。[结论]该研究为农用病害真菌的生物防治扩充了菌种资源。

抑制农业病害真菌的海洋微生物筛选及发酵工艺优化

[目的]从海洋中筛选对农业病害真菌有较强拮抗作用的海洋微生物。[方法]以5种农业病害真菌为筛选模型,采用平皿拮抗法对分离获得的菌株进行初步筛选,对有活性的菌株再进行复筛,并选择活性高的菌株进行发酵工艺优化。[结果]初筛中有拮抗作用的海洋细菌有21株,进行复筛后菌株MB133在稻瘟菌平板上抑菌效果最明显,菌株MB025、MB026、MB133在油菜菌核病菌、辣椒炭疽病菌、番茄灰霉病菌平板上均存在抑菌效果。抑菌效果最明显的菌株MB133的优化发酵工艺:最适装液量为12%,最适接种量为2.0%,最适培养基p H 7.0。[结论]该研究为农用抗生素的推广和应用奠定了资源基础。

化妆品专业《微生物检验技术》课程理实一体化教学改革探索

化妆品专业《微生物检验技术》课程系统性强,理论知识信息量大,实践操作要求高,对高职院校学生而言学习困难大。我们针对课程内容以及高职学生自身的特点,将课程开发成理实一体化教学模式。本文主要探讨了在实施理实一体化教学过程中对教学内容的组织与安排,教学方法和教学过程设计以及教学效果评价等内容,对相关课程教学具有一定的借鉴意义。

化妆品专业《微生物检验技术》实践教学改革

化妆品专业《微生物检验技术》课程是一门实践性很强的学科,我们在进行岗位调研的基础上,合理优化实践教学内容。结合开设的各个实验的具体情况,探索多种教学模式的应用,取得了良好的教学效果,对相关课程教学具有一定的借鉴意义。

益生菌作用治疗非酒精性脂肪肝

非酒精性脂肪肝(NAFLD)是一种比较常见的慢性肝病,其涵盖范围包括脂肪肝、脂肪性肝炎以及肝硬化。其发病率的增加与肥胖、2型糖尿病等密切相关。越来越多人体试验表明,肠道微生物菌群过度生长与NAFLD和非酒精性脂肪肝炎(NASH)有关。最近,已有很多研究表明益生菌在改善NAFLD方面有效,已被视为一种治疗NAFLD的新方式,但仍需大样本试验和较长周期的临床随访进行深入研究。鉴于此,本文主要对NAFLD以及益生菌治疗NAFLD的动物实验和临床试验研究进展情况进行综述,从而进一步为益生菌用于NAFLD的治疗提供借鉴。

黄芩苷与橙皮苷对顺铂所致小鼠肝损伤的保护作用比较

目的:研究黄芩苷与橙皮苷对顺铂所致小鼠肝损伤的保护作用,并比较二者的作用。方法:将ICR小鼠分为4组,即正常组、顺铂模型组、黄芩苷组和橙皮苷组,给药组分别给予黄芩苷(300mg/kg)和橙皮苷(300mg/kg),连续灌胃7天,正常组和模型组给予同体积溶剂,在第3天给药后1h时腹腔注射顺铂(5mg/kg)连续5天,末次注射15h后断头处死小鼠,取肝脏和血液进行检测,通过肝脏的病理组织学检测、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)测定可反映顺铂引起肝脏损伤,利用生化法测定肝组织丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)可反映其氧化损伤情况。结果:黄芩苷和橙皮苷可显著抑制顺铂引起小鼠血清ALT和AST水平升高,减少MDA的形成,恢复抗氧化酶SOD的活性,并抑制GSH的耗竭,但黄芩苷的作用比橙皮苷更显著。此外,黄芩苷和橙皮苷明显减轻肝脏水样空泡样变性、炎症浸润和坏死。结论:黄芩苷与橙皮苷均对顺铂所致小鼠肝损伤均具有明显保护作用,尤其是黄芩苷,其保护作用主要与抗氧化作用密切相关。

刀豆蛋白A引起小鼠免疫性肝损伤机制研究

目的:建立刀豆蛋白A(Con A)引起小鼠免疫性肝损伤模型,并考察其损伤机制。方法:ICR小鼠随机分为正常对照组和Con A模型组,每组10只。Con A模型组小鼠尾静脉注射Con A2.5 mg.ml-1.kg-1,对照组给予等体积生理盐水。造模后8 h断头处死小鼠,分别取肝脏和血液,采用生化法测定小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸转移酶(AST)水平,苏木精-伊红染色法测定肝组织病理学改变,ELISA法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)含量。结果:与正常对照组比较,Con A模型组小鼠血清ALT和AST水平均显著升高(P<0.01),肝细胞明显坏死,伴炎细胞浸润,同时血清中TNF-α和IFN-γ含量亦均显著升高(P<0.01)。结论:尾静脉注射Con A 2.5 mg.ml-1.kg-1可建立免疫性肝炎模型,其损伤机制与炎症因子表达相关。

行动导向在食品微生物检验技术教学中的应用

本文从食品微生物检验技术的课程特点、教学实际,以及高职院校学生的特点出发、探讨行动导向教学法在该课程教学上应用的优势,并举例分析和说明了行动导向教学法中案例分析法、模拟教学法、团队竞争法和项目分析法等具体方法在食品微生物检验技术教学中的具体应用和优点.同时本文就行动导向教学法具体实施过程中遇到的一些客观问题进行了分析.

三维综合评价体系在《微生物学基础与检验技术》课程中的设计及应用——基于线上线下混合式教学模式

在专业基础课程《微生物学基础与检验技术》中应用线上线下混合式教学模式,该模式下设计并实施全面评价学生的三维综合评价体系,将过程考核与结果考核相结合,线下课堂学习评价与线上网络学习评价相结合,理论知识考核与实践技能考核相结合,有效促进学生的学习积极性,提高了教学效果。

医药类高职高专医学免疫学教学实践

探讨通过多种教学模式相结合来提高学生学习兴趣,引导学生自主学习,促进医学免疫学的教学,提高医学免疫学教学质量。

PBL教学在高职院校食品微生物课程中的应用

PBL教学是以问题为载体,以学生为主体,突出能力培养目标的一种全新的教学模式。实践证明高职院校的食品微生物课堂融入PBL教学后,能充分发挥学生的主体性地位和教师的主导性作用,可大大提高学生的学习兴趣,培养学生自主学习和合作学习的能力,提高学生文献检索、分析总结等各项综合素质,取得了良好的教学效果。

产纤维素酶海洋细菌的筛选鉴定和产酶条件优化

从宁波洋沙山海域采集样品,通过刚果红染色法共筛选到23株具有纤维素分解能力的菌株。根据复筛结果,选择其中一株高产碱性纤维素酶的海洋细菌MB117进行深入研究。经16S rDNA鉴定,MB117为交替假单胞菌属(Pseudoalteromonas sp.)细菌。发酵条件研究结果表明,MB117菌株培养的最适pH为7.0,1%接种量和10%装液量最利于产酶,低温有助于菌体生长和产酶。酶学性质研究结果表明,酶反应的最适pH为9.0,pH 7.0～10.0范围内酶活力均可保持在85%以上;MB117菌株CMCase不耐高温,酶最适反应温度为40℃。

宁波海域产纤维素酶海洋细菌的筛选

通过两种途径筛选来自宁波海域的具有纤维素酶活性的海洋细菌。在实验室原有的365株海洋细菌资源库中,通过刚果红染色法筛选到27株纤维素酶活性菌株,活性比例为7.40%;在以羧甲基纤维素钠为唯一碳源的分离培养基中,共分离到70株海洋细菌,经过刚果红染色筛选到68株活性菌,活性比例为97.14%。在分析透明圈直径与菌落直径大小的比值(Hc)时发现,两种途径筛选到的活性菌株在产酶能力上存在着显著差异。以羧甲基纤维素钠作为唯一碳源的分离培养基中,虽然活性菌株的比例高,但酶活力相对较小,Hc值大于2的菌株数为0;而从菌株资源库筛选活性菌株时,虽然活性比例小,但酶活力相对较高,其中有25.93%的菌株Hc值大于2,并且有两株Hc值高达5的菌株。研究亮点:近年来微生物来源的纤维素酶研究在国内外一直是研究热点,但宁波海域乃至浙江海域内却尚未开展相关研究工作。本实验从宁波海域采集海洋样品,比较了两种不同途径筛选海洋细菌来源的纤维素酶的研究结果,为海洋微生物的有效筛选提供了一定的参考价值。同时,实验中获得了7株活性较高的纤维素酶活性菌株,为今后的深入研究奠定了基础。

科学利用数码显微互动实验室提高微生物学实践技能

数码显微互动实验室的诞生,掀起了形态教学方式的革命,为微生物实验教学提供了崭新的理念和实用的平台。文中探讨了在高校微生物学实验课的教学过程中,如何科学合理利用数码显微互动系统,创造一种全新的信息化教学环境,培养学生自主学习能力,提高微生物学实验教学效率。

葡萄悬浮细胞长期培养过程中不同继代条件下花青素生产的不稳定性(英文)

为了深入研究植物细胞培养生产次生代谢产物不稳定性的机制,以葡萄细胞作为模式体系,研究悬浮培养过程中花青素合成的不稳定性。除了用常规的花青素总含量来表征花青素的生物合成之外,还采用HPLC测定花青素不同组分的含量。结果表明,在长期的继代培养过程中,不仅花青素的含量而且花青素的组成也表现出明显的不稳定性。首次采用了不稳定系数(δ)和因素得分(Factor scores)来表征植物细胞培养过程中次生代谢生产的不稳定性。培养条件对花青素生物合成的影响实验结果表明,继代周期和接种量均能诱发次生代谢的不稳定性表达,其中接种量的影响相对更大。在考察的(6.5 d,2.00 g),(7 d,2.00 g),(7.5 d,2.00 g),(7 d,1.60 g)和(7 d,2.40 g)五种不同的继代周期和接种量组合条件中,7 d继代周期和1.60 g接种量最有利于保持花青素的稳定生产。