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鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平快速定量方法的建立及应用
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作者 彭新凯 王娉 +5 位作者 武运 陈颖 曲天铭 王宇 赵晓美 郜忠川 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第7期167-174,共8页
目的应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR),建立鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平的快速定量检测方法。方法通过比对鼠李糖乳杆菌HN001的近缘菌株的基因组,筛选出鼠李糖乳杆... 目的应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR),建立鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平的快速定量检测方法。方法通过比对鼠李糖乳杆菌HN001的近缘菌株的基因组,筛选出鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平的特异基因,以菌株水平的特异基因为靶标设计引物及探针,优化反应体系和条件,建立鼠李糖乳杆菌HN001株水平的qPCR检测方法。对方法的特异性、灵敏度、检出限进行验证,并采用已建立的qPCR方法进行模拟添加样品和实际样品的检测。结果所建立的方法特异性强,与近缘菌株无交叉反应,鼠李糖乳杆菌HN001纯培养液检出限为10^(2)CFU/mL,灵敏度可达到650 copies/μL,可在2 h内完成样品检测。对模拟添加样品以及实际样品检测中qPCR和平板计数法结果的对数值进行显著性分析检验,两种方法的测定值结果均无显著性差异(P>0.05)。结论本研究建立的qPCR检测方法可有效应用于益生菌产品中鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平定量检测,具有快速、灵敏、准确的特点。 展开更多
关键词 实时荧光定量聚合酶链式反应 鼠李糖乳杆菌HN001 菌株水平定量检测 益生菌产品
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基于流式细胞仪技术的快速检测试剂盒在生乳菌落总数检测中的应用
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作者 赵晓美 王娉 +3 位作者 曲天铭 梁丽姣 姬庆龙 陈颖 《质量安全与检验检测》 2023年第1期7-15,共9页
本研究将市售流式细胞仪技术快速检测试剂盒应用于生乳中菌落总数的检测。通过对不同浓度、不同死/活细菌比的金黄色葡萄球菌菌悬液的流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测,并将检测结果与标准分离分离培养法进行对比,证实了试剂盒染色... 本研究将市售流式细胞仪技术快速检测试剂盒应用于生乳中菌落总数的检测。通过对不同浓度、不同死/活细菌比的金黄色葡萄球菌菌悬液的流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测,并将检测结果与标准分离分离培养法进行对比,证实了试剂盒染色液对常见微生物的荧光标记能力良好,样品染色液A和染色液B联用可以有效实现对死/活细菌的区分与计数。通过向生乳样品中添加不同浓度金黄色葡萄球菌、不同死/活细菌比例细菌或不同种细菌制备人工污染生乳样品并进行FCM检测,证实了该FCM试剂盒方法能够适用于实际生乳制品菌落总数定量检测与死/活细菌区分计数,且方法稳定性良好,可以应用于实际生乳菌落计数。该试剂盒方法在生乳检测流程上的应用证实了利用FCM法替代传统分离检测法的实际应用可行性,可以为第三方检测机构和乳品企业提供一种更为高效、便捷和准确的流程参考。 展开更多
关键词 流式细胞技术 菌落总数 生乳
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东北传统发酵食品中降胆固醇乳酸菌的筛选及其降解机制 被引量:15
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作者 任大勇 曲天铭 +3 位作者 杨柳 安彬 王国超 冯时蓉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第22期199-206,共8页
从中国东北传统发酵食品黏面子、辣白菜、辣酱中筛选具有高效降解胆固醇作用的乳酸菌,并探讨其主要的降解机制。采用体外实验筛选出高效降胆固醇的乳酸菌菌株,进一步研究了其降胆固醇的作用机制,包括细胞膜的吸附、胆汁盐水解酶基因表... 从中国东北传统发酵食品黏面子、辣白菜、辣酱中筛选具有高效降解胆固醇作用的乳酸菌,并探讨其主要的降解机制。采用体外实验筛选出高效降胆固醇的乳酸菌菌株,进一步研究了其降胆固醇的作用机制,包括细胞膜的吸附、胆汁盐水解酶基因表达及酶活性、胆汁酸共沉淀胆固醇以及抑制胆固醇胶束形成等。筛选得到6株高胆固醇清除能力的菌株C1、C2、H6、H9、L22和L30,清除率均在85%以上。受试菌株均可以通过膜吸附、共沉淀、胆汁盐水解酶作用和抑制胆固醇胶束等机制发挥作用,其中以胆汁盐水解酶的作用为主要机制。 展开更多
关键词 降胆固醇 乳酸菌 筛选 胆汁盐水解酶 降解机制
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乳酸链球菌L16对感染金黄色葡萄球菌小鼠肠道菌群的调节作用 被引量:1
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作者 任大勇 宫圣洁 +5 位作者 朱剑威 王迪 高良锋 曲天铭 刘宏妍 于寒松 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第4期81-86,共6页
为研究乳酸链球菌L16对金黄色葡萄球菌感染小鼠肠道菌群结构的恢复情况,采用高通量测序技术,构建小鼠肠道微生物的16S rRNA基因测序文库,通过菌群结构图、等级丰度分布曲线、热图、稀释性曲线图、维恩图等,分析预防组、治疗组、正常组... 为研究乳酸链球菌L16对金黄色葡萄球菌感染小鼠肠道菌群结构的恢复情况,采用高通量测序技术,构建小鼠肠道微生物的16S rRNA基因测序文库,通过菌群结构图、等级丰度分布曲线、热图、稀释性曲线图、维恩图等,分析预防组、治疗组、正常组和模型组小鼠的肠道菌群组成和生物多样性。结果:模型组中脱铁杆菌门(12.67%)显著升高,菌群结构异常。预防组中厚壁菌门(49.03%)和拟杆菌门(43.15%)的相对丰度接近正常组(44.75%;42.08%)。结论:乳酸链球菌L16能预防金黄色葡萄球菌感染小鼠肠道,调节肠道菌群结构。 展开更多
关键词 乳酸链球菌 金黄色葡萄球菌 高通量测序 菌群结构
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粮食加工品和肉制品中克罗诺杆菌的污染状况及致病性阪崎克罗诺杆菌生物膜形成能力研究 被引量:3
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作者 王敏 刘长虹 +3 位作者 陈颖 曲天铭 张九凯 王娉 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第9期2995-3003,共9页
目的 了解我国粮食加工品和肉制品中克罗诺杆菌(Cronobacter spp.)的污染情况及致病性。方法对我国8个省份的226份粮食加工品和肉制品的克罗诺杆菌污染情况进行检测,对分离菌株进行种间鉴定,并针对阪崎克罗诺杆菌进行脉冲场凝胶电泳(pul... 目的 了解我国粮食加工品和肉制品中克罗诺杆菌(Cronobacter spp.)的污染情况及致病性。方法对我国8个省份的226份粮食加工品和肉制品的克罗诺杆菌污染情况进行检测,对分离菌株进行种间鉴定,并针对阪崎克罗诺杆菌进行脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis, PFGE)分型及生物膜形成能力研究。结果 粮食加工品和肉制品中克罗诺杆菌的检出率分别为21.92%和12.50%。种间鉴定显示,115株分离菌株中有94株阪崎克罗诺杆菌。PFGE和结晶紫染色结果表明,94株阪崎克罗诺杆菌可被分为49个型别,均在36~60 h内达到最大菌膜生产量。结论 上述8个省份粮食加工品和肉制品中存在克罗诺杆菌污染,其中阪崎克罗诺杆菌有多种PFGE带型,且均具有生物膜形成能力,本研究可为食品安全风险评估及标准制定提供基础数据。 展开更多
关键词 克罗诺杆菌 分子分型 生物膜形成 种间鉴定
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单分子实时测序技术研究不同来源原料乳中群落组成及多样性 被引量:2
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作者 梁丽姣 王娉 +3 位作者 曲天铭 赵晓美 姬庆龙 陈颖 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第4期1123-1131,共9页
目的 采用三代单分子实时测序法(single molecule real time sequencing, SMRT)研究北京和内蒙古两地原料乳中的细菌群落组成及多样性,解析其携带污染菌的差异,为原料乳质量及风险评估提供基础数据。方法 收集北京和内蒙古两地春夏季和... 目的 采用三代单分子实时测序法(single molecule real time sequencing, SMRT)研究北京和内蒙古两地原料乳中的细菌群落组成及多样性,解析其携带污染菌的差异,为原料乳质量及风险评估提供基础数据。方法 收集北京和内蒙古两地春夏季和秋冬季的原料乳样品20份,采用SMRT技术对其进行基于16S rDNA基因全长的测序和多样性分析。在此基础上,对其进行了微生物相关功能性预测。结果 不同产地与不同采样季节原料乳中细菌群落的结构组成和相对丰度存在差异,假单胞菌属、不动杆菌属与乳球菌属是大部分样品中相对丰度最高的细菌,其中脆弱假单胞菌的相对丰度与原料乳冷链运输时间正相关。功能预测揭示了原料乳脂肪质量可能具有地区差异性,维生素与氨基酸质量可能具有季节差异性。结论 两产地原料乳菌群分析结果提示了原料乳潜在的食品安全风险,并且除致病菌风险之外耐药菌及耐药基因传播的风险同样不容忽视;此外,乳球菌属细菌具有开发作为益生菌的潜力。本研究结果为原料乳的质量安全监测评估和功能菌种挖掘提供了参考依据。 展开更多
关键词 单分子实时测序 原料乳 细菌组成 功能预测
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Detection and quantification of Bacillus cereus and its spores in raw milk by qPCR,and distinguish Bacillus cereus from other bacteria of the genussBacillus 被引量:1
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作者 梁丽姣 王娉 +3 位作者 曲天铭 赵晓美 葛毅强 陈颖 《Food Quality and Safety》 SCIE CSCD 2022年第3期386-395,共10页
Introduction:Raw milk is the basic raw material of dairy products.Bacillus cereus(B.cereus)is a typical conditional pathogenic bacteria and cold-phagocytic spoilage bacteria in raw milk.Materials and Methods:In this s... Introduction:Raw milk is the basic raw material of dairy products.Bacillus cereus(B.cereus)is a typical conditional pathogenic bacteria and cold-phagocytic spoilage bacteria in raw milk.Materials and Methods:In this study,a quantitative polymerase chain reaction(qPCR)method for detecting B.cereus in raw milk was established.The specificity of the method was verified by using other Bacillus bacteria and pathogenic bacteria;the sensitivity of the method was evaluated by preparing recombinant plasmids and simulated contaminated samples;and the applicability of the method was verified using pure spore DNA.The actual sample detection was completed by using the established qPCR method.Results:The qPCR established in this study can specifically detect B.cereus in raw milk.The limit of detection of the method was as low as 200 CFU/mL,the limit of quantification ranged from 2×10^(2)to 2×10^(8)CFU/mL,and the amplification efficiency of qPCR was 96.6%.Conclusions:The method established in this study can distinguish B.cereus from other Bacillus bacteria,and spore DNA can be used as the detection object.This method has the advantages of strong specificity,high sensitivity,wide application range,and short detection time,which isexpectedtobeapplied in thedairy industry. 展开更多
关键词 Raw milk quality control Bacillus cereus detection SYBR Green real-time qPCR spore DNA detection
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