NT-3基因转染对骨髓间充质干细胞增殖及向神经元分化的影响

目的研究神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖和向神经元分化的影响,探讨转染NT-3基因的MSCs体内移植治疗脊髓损伤的可行性。方法体外培养稳定表达NT-3蛋白的MSCs,通过MTT法检测NT-3对MSCs增殖的影响;应用免疫细胞化学和免疫印迹方法检测转染NT-3的MSCs表达神经元标志物NeuN蛋白的情况。结果转染NT-3基因的MSCs生长曲线上移,细胞增殖率显著升高,与对照组相比,两者有显著差异(P<0.05),表明转染NT-3后细胞生长加快。免疫荧光染色结果显示转染NT-3的MSCs的NeuN阳性细胞数明显增多,与对照组比较有显著差异(P<0.05);Western印迹检测结果显示转染NT-3的MSCs内NeuN蛋白表达明显增多,与对照组比较有显著差异(P<0.05),表明NT-3促进MSCs向神经元方向分化。结论 NT-3基因转染可促进MSCs的增殖,并诱导其向神经元方向分化。

中国人鼻旁窦三维重建及测量

目的:观测鼻旁窦三维重建图像及其容积和质心等数据,为临床鼻旁窦辅助诊断、手术治疗提供参考。方法:对3具冰冻颅脑行间隔1 mm断层切片,数码摄影,用自制软件对含鼻旁窦的层面行轮廓线提取,并进行三维重建。各鼻旁窦的体积及质心坐标通过自制软件测得,最大上下径、左右径和前后径则由人工测得,取其平均值。结果:在计算机上重建的鼻旁窦三维图像轮廓清晰,能旋转、剖割及拆分显示。3具头颅的鼻旁窦平均容积分别为:上颌窦17865.75 mm3,额窦5810.4 mm3,蝶窦2789.65 mm3,筛窦6673.3 mm3。蝶窦质心坐标值左x、y、z分别为14.1957、38.4143和25.4751;右x、y、z分别为0.3047、-38.5268和-25.4656。结论:成功获得中国成年人鼻旁窦三维重建图像及形态学数据,可为鼻旁窦疾病的影像诊断和外科手术提供参考。

NT-3基因转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究

目的检测神经营养素-3(NT-3)基因转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)后的表达情况。方法采用密度梯度离心法获取SD大鼠BMSCs,体外培养、传代。取第4代细胞,用脂质体介导法将NT-3真核重组表达质粒plEGFP-NT-3转染BMSCs,G418筛选获得阳性细胞,用免疫细胞化学法检测NT-3转染效果。结果在阳性细胞中能够检测到NT-3基因表达,但细胞形态并没有因为NT-3的转入而有明显改变。结论通过质脂体介导法可将NT-3基因转入BMSCs中,并能稳定表达。

中国人颅骨三维重建

目的探讨中国人颅骨三维重建的方法和意义。方法对冰冻颅脑行间隔1mm断层切片,数码摄影,用自制软件对含颅骨的层面行轮廓线的提取,并进行三维重建。结果重建后的颅骨形态结构逼真,可赋予不同的颜色进行单独显示、任意搭配显示和整体显示,还可在三维空间位置上绕任意轴进行任意角度旋转。结论本方法对于在计算机二维平面上进行颅骨的三维重建是可行的,软件运行可靠,重建图象为教学及外科手术提供参考资料。

寰枢正中关节及相应平面椎管的断层解剖研究

寰枢关节不同部位损伤，如齿状突骨折、寰椎横韧带断裂和寰枢关节脱位等在临床上是较常见的疾病。相关影像学诊断及治疗方法的报道较多，但形态学资料，尤其是断层方面的文献较少。本文在断层标本上详细观察了寰枢正中关节及相应平面的椎管，并做了数据测量，目的是为影像学诊断或治疗提供形态学资料。

浅谈LBL和PBL相结合的教学模式在系统解剖学中的应用

在系统解剖学教学过程中运用PBL与LBL相结合的教学模式，能实现教师教学过程与学生学习过程的有效契合，帮助教师和学生改变观念，达到提高学生分析、解决问题的能力，培养学生团结协作与创新思维能力的教学目的。

气体分离装置的先进控制

本文介绍了Honeywell公司RMPCT先进控制技术在炼油厂气分装置上的应用,阐述了先进控制系统的设计方案,通过中国石油大学精馏塔机理模型得到装置的动态数学模型,运用中国石油大学分馏塔工艺计算软件包实现了主要产品质量的软测量仪表计算。为在整个操作范围内保持控制器的性能,开发了在线实时修改RMPCT控制器模型的软件,基于稳态模型的在不同工作点上增益变化的信息,来调整RMPCT控制器的内部模型,实现了模型自适应预测控制。运行结果表明,先进控制系统提高了装置操作的平稳性,优化了生产,降低了能耗,提高了产品质量的控制水平。

对于LBL与PBL相结合的教学模式在系统解剖学中的实际应用与思考

目的：探讨LBL与PBL相结合的教学模式在系统解剖学中的应用效果研究.方法：分别对本校09级护理2班与4班采用LBL与PBL相结合的教学模式和传统教学模式进行教学,根据理论与实践教学效果的考察进行对比.结果： LBL与PBL相结合的教学模式组效果明显优于传统教学模式组.结论： LBL与PBL相结合的教学模式在系统解剖学教学中更能发挥学生的学习主动性,从而提高教学效果.

数字化颅脑结构体积及形心的测量

目的:探讨数字化颅脑体积的研究方法和手段。方法:选择一具无器质性病变中年男性颅脑标本,采用冰冻刨削切片技术,间隔1mm作断层切片,经扫描仪、普通相机和数码相机采集图像输入计算机,用自编三维重建软件重建颅脑各部三维立体结构。结果:获得颅脑部分结构的体积,大脑灰质体积为615428.6mm3,占颅腔体积44.8%;白质体积500003.4mm3占颅腔体积36.4%;尾状核体积10462063mm3,占颅腔体积0.46%;豆状核体积14683.49mm3,占颅腔体积1.0%。结论:对中国人颅脑进行三维重建并对其体积、形心坐标进行测量,为临床影像、神经外科提供了解剖学数据。

保护层分析中独立保护层的识别与应用

通过对独立保护层有效性、独立性和可审查性定义的阐述,对实例中独立保护层进行分析,实现了保护层分析实施过程中独立保护层的准确识别。

大鼠海马神经干细胞体外增殖、凋亡和分化的激光扫描共焦显微镜观察

目的采用激光扫描共焦显微镜观察体外培养胎鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖、凋亡及其分化情况。方法体外分离培养胚胎大鼠海马NSCs,把神经干细胞球培养在共焦显微镜专用培养皿中。用Hoechst33258染细胞核,免疫荧光细胞化学技术检测巢蛋白(Nestin)的表达以鉴定NSCs,检测神经元、星形胶质细胞的特异性标记物β-Ⅲ型微管蛋白(β-Ⅲtubulin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达以测定NSCs的分化能力。通过激光扫描共焦显微镜对神经干细胞球进行光学连续断层扫描,然后用软件进行三维重建,立体动态观察神经球。结果通过激光扫描共焦显微镜观察到神经球Nestin阳性表达,NSCs的突起随着发育逐渐增长,并相互缠绕,经2次传代后培养7d的NSCs凋亡率为(8.60±2.20)%。在血清诱导下分化后的细胞突起从细胞球向四周呈放射状迁移,且突起相互交错成网状。经2次传代后诱导分化7 d的NSCs分化为星形胶质细胞和神经元的比例分别为(68.60±7.64)%和(29.90±8.22)%(P<0.01)。结论对大鼠神经干细胞球的增殖、凋亡及分化的观察激光扫描共焦显微镜发挥了独特的优势。

大鼠脑源性神经营养因子基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

构建脑源性神经营养因子（BDNF）基因真核表达载体，检测其转染COS-7细胞后的表达。方法：从大鼠海马组织中提取总RNA，采用RT-PCR方法获得目的基因片段，克隆至pGEM-T载体中。经测序确证后将BDNFcDNA片段与pEGFP-N1载体定向连接。将鉴定正确的重组体pEGFP-N1-BDNF以脂质体法转染至COS-7细胞中，用RT-PCR鉴定BDNFmRNA的表达，免疫印迹法检测BDNF蛋白质表达水平。结果：克隆了BDNF的cDNA，并构建了其真核表达载体pEGFP-N1-BDNF，经限制性内切酶酶切鉴定及测序分析证实了其序列的正确性；免疫印迹法分析显示，转染48h时，COS-7细胞以分泌proBDNF-GFP融合蛋白为主，在96h以分泌成熟BDNF-GFP融合蛋白为主。结论：成功构建pEGFP-N1-BDNF真核表达载体，并且在COS-7细胞中得到高效表达，BDNF前体及成熟体同时分泌到胞外，在不同时间点分泌组合不同。

基于稳态模型的自适应预测控制策略及其应用

针对丙烯精馏塔,结合模型预测控制器的设计,提出基于系统稳态模型的自适应模型预测控制策略,利用稳态模型在不同操作点上被控变量对操纵变量及扰动变量的相对变化率的变化,来刷新调整预测模型各通道的增益,以有效提高对丙烯塔塔顶、塔底温度控制的性能。现场应用表明:采用该模型自适应调整方法,其控制温度的波动性降低了一个数量级,有利于产品质量的稳定。

脑源性神经营养因子过表达促进大鼠神经干细胞向神经元分化

目的构建脑源性神经营养因子(BDNF)基因真核表达载体,探讨BDNF过表达对神经干细胞(NSCs)向神经元分化的影响。方法采用RT-PCR法,以大鼠海马组织RNA为模板,扩增BDNF基因,定向克隆到pEGFP-N1载体中,用脂质体法转染pEGFP-N1-BDNF表达载体至NSCs中,然后用RT-PCR鉴定BDNF的表达,免疫组织化学方法鉴定NSCs向神经元的分化情况。结果成功构建了pEGFP-N1-BDNF真核表达载体,BDNF在重组质粒转染的NSCs中能够高效表达。重组质粒转染的NSCs在体外诱导分化后,能够较空质粒转染的NSCs产生更多的神经元(P<0.01)。结论 BDNF过表达能够显著促进大鼠NSCs向神经元方向分化。

大鼠少突胶质细胞转录因子2基因真核表达载体的构建

背景:碱性螺旋-环-螺旋转录因子少突胶质细胞转录因子2在脊髓的少突胶质细胞的分化过程中起着关键性的作用。目的:构建大鼠少突胶质细胞转录因子2基因重组真核表达载体,观察其在真核细胞内的表达。方法:从新生大鼠脊髓组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获得目的基因片段,克隆至pGEM-T载体中。经测序确证后将少突胶质细胞转录因子2cDNA片段与pEGFP-N1载体定向连接。将鉴定正确的重组体pEGFP-N1-Olig2以脂质体法转染至COS-7细胞中,反转录PCR鉴定少突胶质细胞转录因子2mRNA的表达,免疫印迹法检测少突胶质细胞转录因子2蛋白质表达水平。结果与结论:克隆了少突胶质细胞转录因子2的cDNA,并构建了其真核表达载体pEGFP-N1-Olig2,经限制性内切酶酶切鉴定及测序分析证实了其序列的正确性;转染72h时免疫印迹分析显示,COS-7/pEGFP-N1-Olig2实验组COS-7细胞表达Olig2-GFP融合蛋白。提示实验成功构建pEGFP-N1-Olig2真核表达载体,并且在COS-7细胞中得到高效表达。

大鼠羊膜上皮细胞的生物学特性

目的探讨建立大鼠羊膜上皮细胞分离、培养及鉴定方法及观察其生物学特性。方法从妊娠14～16 d的SD大鼠胎盘剥离羊膜,用胰蛋白酶消化法分离大鼠羊膜上皮细胞,采用免疫荧光细胞化学和流式细胞仪分析细胞表型特征;使用含有10%胎牛血清(FBS)和100 U/ml青霉素-链霉素(PS)溶液的DMEM/F-12的培养基进行细胞培养。结果每次采用胰蛋白酶消化法从1只孕鼠分离的上皮细胞数为(1～6)×105/ml,足够达到贴壁培养浓度。所分离的羊膜上皮细胞表达神经前体细胞特异性蛋白nestin和骨髓间充质干细胞表面标记蛋白CD29和CD44,但是未成熟神经元标记蛋白β-Ⅲ-tublin、星形胶质细胞标记物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)以及造血干细胞表面标记蛋白CD34表达阴性。在完全培养基培养条件下,羊膜上皮细胞生长增殖较快,原代培养1 w后即可传代。结论建立了大鼠羊膜上皮细胞分离、培养及鉴定的方法,大鼠羊膜上皮细胞具有神经前体细胞的特异标志和间充质干细胞的某些表型特征。

非酒精性脂肪性肝病与代谢综合征

目的 分析非酒精性脂肪性肝病与代谢综合征的关系。方法按住院顺序选择有随访资料病例共70例，将其按有无脂肪肝分为两组，NAFLD组（30例）和对照组（40例），首先在基线水平对两组出现代谢综合征和代谢综合征各个组分情况进行比较。其次，在随访后水平再次对两组出现代谢综合征和代谢综合征各个组分情况进行组内、组间比较。最后再将所有随访对象按是否存在肥胖进行分组（单纯脂肪肝组、单纯肥胖组、脂肪肝＋肥胖组、两者皆无组），对比4组随访过程中代谢紊乱发生的情况。结果随访结束时，脂肪肝组MS及其各组分的发病率明显高于对照组（P〈0．05），且重新分组排除肥胖的影响。结论NAFLD促进代谢综合征及代谢综合征各组分的发生。

计算中国男性人体环节体积的二元回归方程的研究

采用CT—图像分析法,在尸体研究的基础上,对50例中国男性样本(18～23岁)进行了全身CT横断层扫描、影像分析和测算,获得了样本各环节的长度和体积等惯性数据。进而确定了中国男性青年人体体积的分布,并据此建立了以身高、体重为自变量的直接计算中国青年人体各环节体积的二元回归方程。

GDNF促进体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞增殖的时效及量效关系的研究

目的观察外源性胶质细胞系源性神经营养因子（GDNF）促进大鼠C6胶质瘤细胞增殖的时效及量效关系，为深入研究GDNF对C6细胞的促增殖机制提供最佳的时效及量效作用点。方法将体外培养的C6细胞分为空白对照组、溶剂对照组和实验组（GDNF浓度分别为10、30、50、70、90μg／L，作用时间分别为12、24、48、72h），用MTT比色法检测不同浓度GDNF通过不同作用时间对C6细胞增殖情况的影响。结果浓度在50μg/L以上的GDNF作用24h后，C6细胞增殖水平升高，在48h时达到高峰而后趋于平稳或呈下降趋势，与对照组比差异有统计学意义。其中，70μg/LGDNF作用48h后，C6细胞的增殖率明显高于其他实验组。结论外源性GDNF促进体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞增殖的最佳时效及量效作用点为浓度70μg/L、时间48h。