子宫内膜基质细胞作为饲养层培养人胚原始生殖细胞

目的探讨子宫内膜基质细胞作为饲养细胞培养人胚原始生殖细胞的可能。方法从5～9周人胚胎生殖嵴、中肾嵴、肠系膜中消化分离原始生殖细胞(PGCs),种植于经丝裂霉素C处理的人子宫内膜基质细胞饲养层上培养。结果PGCs可以在体外培养3个多月,传14代。这样培养的PGCs表达胚胎干细胞的多种标志,如碱性磷酸酶染色、SSEA和TRA抗原等。另外细胞保持正常的染色体核型。结论人子宫内膜基质细胞可以作为饲养细胞在体外培养人胚原始生殖细胞,保持未分化状态。

在人子宫内膜饲养层上生长的人原始生殖细胞生物学特性

背景:目前在胚胎多潜能干细胞建系和培养过程中,存在着建系率低、具有正常核型的干细胞系比率低等问题。目的:观察接种于人子宫内膜成纤维细胞饲养层上原代培养的人原始生殖细胞在体内外的生物学特性。设计、时间及地点:细胞观察,于2004-01/2005-04在沈阳市妇婴医院和中国医科大学完成。材料:人胚胎来源于流产孕妇,用于分离培养原始生殖细胞。人子宫内膜来源于因子宫肌瘤行子宫切除术的患者,用于制备成纤维细胞饲养层。清洁级10周龄雄性裸鼠2只,用于体内分化实验。方法:从人胚胎生殖嵴、肠系膜中消化分离的原始生殖细胞,将其接种在人子宫内膜成纤维细胞饲养层上传代培养。体内实验取连续传5代的2个细胞株,分别制备浓度为1×109L-1的细胞悬液,于每只小鼠两侧腹股沟处皮下各接种0.5mL,培养8周。体外分化采用无黏附特性的培养瓶和除去白血病抑制因子的原始生殖细胞培养液,以脱饲养层法悬浮培养扩增的细胞,直到拟胚体形成及贴壁分化。主要观察指标:通过免疫荧光检测胚胎干细胞特异性表面标志物的表达、碱性磷酸酶染色及染色体核型分析,对所培养细胞进行鉴定。检测裸鼠体内畸胎瘤的形成及组织分化。免疫组化染色观察体外肌肉特异性肌动蛋白、巢蛋白、广谱细胞角蛋白的表达。结果:①传至第2、7代的人胚胎原始生殖细胞SSEA-4,SSEA-3,TRA-1-60,TRA-1-81等表面标志物均呈阳性表达,碱性磷酸酶染色呈阳性,染色体分析为正常二倍体核型46XX。②接种8周末,2只小鼠均形成皮下畸胎瘤,其内存在囊括3个胚层的组织结构,包括皮脂腺、脂肪、腺体及腺上皮、鳞状上皮等。③培养第4天形成拟胚体,肌肉特异性肌动蛋白、巢蛋白、广谱细胞角蛋白均呈阳性表达。结论:人子宫内膜成纤维细胞可以作为人原始生殖细胞的饲养层细胞,传代后的原始生殖细胞仍保持胚胎干细胞的未分化状态和发育全能性。

代孕

代孕是辅助生殖技术的衍生技术之一,其出现确实给一些由于医学原因不能生育的妇女带来了希望。但是,随之接踵而来的是诸如商业化、地下化、子代的归属等社会及伦理问题。本文先介绍代孕定义、分类及世界各国立法现状,然后提出几个值得思考的问题。

控制性超排卵hCG日的决定与LH、E_2、P激素值的临床意义

控制性超排卵（controlled ovarian hyperstimulation，COH）是目前体外受精-胚胎移植（IVF—ET）和卵胞浆内单精子注射（ICSI）程序中第一步。cOH时最终需注射人绒毛膜促性腺激素（hcG）模仿黄体生成素（LH）峰，启动卵子最后成熟与黄体形成。准确掌握这一过程是获得足够数量和质量良好的卵子，乃至整个助孕过程成功的前提。本文仅就如何确定COH的hCO日、hCG日LH、雌二醇（E2）、黄体酮（P）激素值的临床意义及注射hCG后取卵时间的把握几方面做一综述。

黄体酮阴道缓释凝胶在IVF/ICSI周期中作为黄体支持的初步应用

目的:评价黄体酮阴道缓释凝胶(商品名:雪诺同8%)在中国女性体外受精(IVF)和卵细胞浆内单精子注射(ICSI)周期中作为黄体支持的有效性和安全性。方法:此研究为多中心、前瞻性、开放性研究。在12家医院生殖医学中心共894例患者入组,自取卵日开始使用黄体酮阴道缓释凝胶作为黄体支持,评价周期的临床妊娠率、着床率、生化妊娠率、持续妊娠率,并对基线数据与妊娠率的关系进行分析,同时评价黄体酮阴道缓释凝胶使用的安全性及患者满意度。结果:共885例患者完成胚胎移植,其中857例患者完成研究,周期临床妊娠率44.0%(389/885),生化妊娠率为49.3%(436/885),持续妊娠率36.6%(324/885),早期流产率4.4%(17/389),异位妊娠率0.6%(5/885),着床率27.2%(536/1971)。妊娠结果与基线因素的分析,妊娠组与未妊娠组的年龄(30.9±3.7岁vs31.7±3.9岁)和取卵日孕酮水平(3.2±1.9nmol/Lvs4.5±8.3nmol/L)比较,差异有高度统计学意义(P=0.003,P=0.000),而两组其他基线因素比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。不良事件的发生率4.5%,患者对药物使用方法的总体满意度89.7%。结论:黄体酮阴道缓释凝胶在辅助生殖技术中作为黄体支持具有满意的疗效和安全性,相比于传统给药方式,患者更愿接受黄体酮凝胶阴道给药。

五子衍宗丸对精子DNA损伤及精子活力影响及机制

目的:观察五子衍宗丸对精子DNA损伤及精子活力的影响,探讨五子衍宗丸治疗不育症的作用机制。方法:将84例精子DNA损伤患者分为正常对照组、促性腺激素组、五子衍宗丸组,其中促性腺激素组、五子衍宗丸组分别给予促性腺激素、五子衍宗丸干预3个月。采用计算机辅助精子分析(computer-aided sperm analysis,CASA)系统检测精液常规参数,应用流式细胞术进行精子DNA完整性检测。观察五子衍宗丸对精子顶体酶活性及精子形态的影响。使用SPSS 17.0统计软件对治疗后各项指标进行数据分析。结果:治疗3个月后五子衍宗丸组精子总存活率、向前运动精子百分比、精子浓度、DFI以及精子顶体酶活性显著提高;精子形态未发生明显改变。结论:五子衍宗丸能一定程度上改善精子DNA损伤,提高精子活力及精子顶体酶活性。

复发性流产患者血清Th1/Th2细胞因子失衡及补肾固冲汤加减干预作用研究

目的:观察复发性流产患者血清Th1/Th2细胞因子失衡及补肾固冲汤加减干预作用。方法:随机将复发性流产患者120例分为西药组和中药组,选取正常妊娠患者60例,做空白对照组。空白对照组不给予任何措施;西药组给予黄体酮注射液肌肉注射,15 mg/次,3次/周;中药组给予黄体酮注射的同时补肾固冲汤加减口服,100m L/次,日2次。分别于0、2、4、6、8、10、12周检测血清HCG、孕酮水平,观察各组患者流产情况。并于治疗前后检测各组患者血清TNF-α、IL-4细胞因子含量,观察Th1/Th2细胞因子免疫平衡情况。结果:治疗前,复发性流产患者血清HCG、孕酮水平明显低于空白对照组,经治疗后,水平均有不同程度上升,以中药组效果较为明显;计算各组有效率(分娩率)、中药组有效率(分娩率)明显升高;治疗前,与空白对照组比较,西药组和中药组Th1/Th2平衡明显向Th1型偏移;治疗后,西药组和中药组Th1/Th2平衡明显向Th2型偏移。结论:复发性流产患者血清Th1/Th2细胞因子明显向Th1型方向失衡,补肾固冲汤加减能有效提高临床治愈率,并使Th1/Th2细胞因子明显向Th2型偏移。

中西医结合治疗输卵管阻塞疗效观察

目的 :比较中西医结合疗法与单纯西医输卵管通液治疗输卵管阻塞的治疗效果。方法 :80例已证实输卵管阻塞患者随机分为实验组与对照组 ,实验组先服 1个月中药汤剂 ,月经干净后 3～ 7天行输卵管通液治疗 ,疗程 3～ 6个月。结果 :实验组通畅 3 2例 ,其中妊娠 2 2例 ,有效 6例 ,总有效率 95 % ;对照组通畅 4例 ,其中 3例妊娠 ,有效 14例 ,总有效率45 %。χ2检验 ,P <0 .0 5 ,有显著差异。实验组中 ,输卵管间质部、峡部、壶腹部阻塞治疗效果好 ,输卵管积水治疗效果不佳。结论 :本中药方剂加西医输卵管通液是治疗输卵管阻塞的一种行之有效、安全、可靠的方法。

拉贝洛尔辅助治疗重度妊娠高血压疾病的疗效和安全性分析

目的观察拉贝洛尔辅助硫酸镁治疗重度妊娠高血压疾病的疗效和安全性。方法选取重度妊娠高血压疾病患者120例,按随机数字表法将其随机分为对照组和实验组,各60例,对照组采取硫酸镁治疗,实验组采取拉贝洛尔辅助硫酸镁治疗。用药结束后对比2组患者产后的收缩压与舒张压等。结果实验组孕妇的收缩压(142.3±4.3)mm Hg和舒张压(91.3±5.8)mm Hg,比对照组孕妇的收缩压(135.5±4.7)mm Hg和舒张压(95.2±6.5)mm Hg下降更明显,差异具有统计学意义(P<0.05),总有效率上升23.4%。2组出现异常膝跳反射患者例数:实验组(3例)少于对照组(24例);2组产后大出血率实验组(5.0%)明显低于对照组(26.7%),差异具有统计学意义(P<0.05);2组新生儿呼吸窘迫综合症患病率无明显区别。结论拉贝洛尔辅助硫酸镁治疗临床效果明显,且并发症少,具有临床推广意义。

不孕症女性甲状腺功能检测及温肾活血方药干预作用研究

目的:探讨甲状腺功能检测在不孕症女性诊断中的重要意义及温肾活血方药的干预作用。方法:分别检测120例正常育龄女性和120例不孕症女性患者经温肾活血方治疗前后血清雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、促黄体激素(LH)等性激素水平和促甲状腺激素(TSH)、血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、血清游离甲状腺素(FT4)、甲状腺球蛋白(TGAb)、抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)与甲状腺功能密切相关的激素水平变化。结果:与正常组比较,观察组患者治疗前,血清E2、T3水平显著下降(P<0.05),FSH、LH、TSH、TGAb、TPOAb水平显著升高(P<0.05),经温肾活血方治疗后,与治疗前比较,血清E2、T3水平显著升高(P<0.05),FSH、LH、TSH、TGAb、TPOAb水平显著下降(P<0.05)。结论:甲状腺功能减退与不孕症发生有着密切关系,温肾活血方药能有效改善甲状腺功能和性激素水平。

人卵巢组织慢速程序化冷冻保存方案的初步探讨

目的系统比较不同冷冻保护剂在不同浓度时对卵巢组织慢速程序化冷冻效果的影响。方法卵巢组织来源于15例卵巢良性肿瘤手术的患者。分别采用丙二醇(PROH)、乙二醇(EG)、二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻保护剂,在每种冷冻保护剂1.5 mol/L或2.0 mol/L浓度下进行慢速程序化冷冻。每例患者平行进行上述6种冷冻程序,光镜及电镜下分析卵泡的形态正常率,结果与该患者的新鲜对照组织比较。结果各组中不同发育阶段的卵泡分布无统计学差异(P>0.05)。光镜观察显示,1.5mol/L EG组及2.0 mol/L EG组的冷冻效果最好,与新鲜对照组织相比卵泡形态正常率无统计学差异(P>0.05);1.5 mol/L PROH组、2.0 mol/L PROH组、1.5 mol/L DMSO组及2.0 mol/L DMSO组与新鲜对照组织相比,卵泡形态正常率的差异有统计学意义(P<0.05)。电镜观察显示,经程序化冷冻后,卵母细胞质量下降,但由于数据少未进行统计分析;与新鲜对照组织相比,6个冷冻组颗粒细胞的活力均明显降低(P<0.01)。形态正常的颗粒细胞数量在2.0 mol/L PROH组及1.5 mol/L EG组中稍高,但6个冷冻组间两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢速程序化冷冻采用1.5 mol/L EG作为冷冻保护剂,能较好的保存卵泡中的卵母细胞及颗粒细胞,是一种较好的冷冻卵巢组织的方案。

玻璃化冷冻及程序冷冻对人卵巢组织卵泡活性的影响

目的:比较玻璃化冷冻及程序冷冻对人卵巢组织卵泡活性的影响。方法:将15例人卵巢组织20 min内运至实验室,切割成1 mm×5 mm×5 mm大小的卵巢皮质片,随机分为新鲜组、玻璃化冷冻组及程序冷冻组。玻璃化冷冻组及程序冷冻组均采用优化的实验方法进行。新鲜及复苏组织体外培养后,在光镜及电镜下分析卵泡的形态正常率,采用激素释放试验及异体移植试验检测冷冻复苏的人卵巢组织的功能,并与新鲜组比较。结果:冷冻复苏组及新鲜对照组卵巢组织皮质内均可见形态正常和异常的始基及初级卵泡,新鲜对照组卵泡形态正常率显著高于玻璃化冷冻组和程序冷冻组(P<0.05);程序冷冻组形态正常率稍高于玻璃化冷冻组(P>0.05)。3组均可见超微结构正常及异常的原始卵泡、初级卵泡。卵巢皮质片体外培养后持续分泌雌二醇和孕酮。新鲜组激素分泌水平高于玻璃化冷冻组和程序冷冻组,但差异无统计学意义(P>0.05)。异体移植试验显示,程序冷冻组较玻璃化冷冻组具有更高的移植物回收数及卵泡密度。结论:由于程序冷冻人卵巢组织卵泡具有较高的发育潜能,因此其较玻璃化冷冻更有应用前景。

患者体重对体外受精-胚胎移植结局的影响

目的:探讨患者体重对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响。方法:选择140例首次接受IVF-ET助孕的患者为研究对象,按体重指数(BMI)分成超重组37例(BMI≥24 kg/m2)及正常体重组103例(BMI<24 kg/m2),回顾性分析比较两组患者促性腺激素(Gn)用量及使用时间、取卵数、受精率、妊娠率、卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生率及未移植率。结果:超重组Gn的使用时间(11.43±2.01)天、OHSS发生率(13.51%)及未移植率(10.81%)明显高于正常体重组〔分别为(9.79±1.46)天、2.51%及0.97%〕,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05);其余各指标两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:超重对IVF-ET妊娠结局有一定的负面影响,因此在接受IVF-ET治疗前指导患者适当减轻体重可能会改善IVF-ET结局。

针刺对置宫内节育器导致子宫出血妇女血清激素的影响

治疗妇女置宫内节育器(IUD)后异常子宫出血,多年来临床主要采用西药治疗,我们采用针刺疗法,系统地从中医辨证角度予以施治,并结合血清激素的变化,探讨针刺疗法治疗宫内节育器导致子宫出血副反应的机理,现报道如下。临床资料选择23～40岁的实施宫内节育器避孕后异常子宫出?..

精子顶体酶活性定量检测与男性不育病例分析

目的探讨精子顶体酶活性定量与男性不育的关系。方法 2011年7月至9月395例男性不育患者进行精子顶体酶活性定量检测。结果部分精液常规检测正常,但精子顶体酶活性定量异常;少弱精子症患者顶体酶活性定量异常比率相对高。结论顶体酶活性定量是判断男性精子功能和生育力强弱的重要评价指标之一。

尿皮素对体外培养的人脐静脉内皮细胞一氧化氮及一氧化氮合酶的影响

目的：通过检测尿皮素（UCN）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）一氧化氮（NO）生成及一氧化氮合酶（NOS）表达的影响,探讨UCN调节胎儿-胎盘血管张力的分子机制。方法：在离体培养的HUVEC中加入不同浓度的UCN（0、0.1、1、10nmol/L）、10nmol/L促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）及向以上各组UCN/CRH同时加α-helical-CRH进行体外培养,用硝酸还原酶法检测细胞上清液中NO的水平,蛋白印迹法检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达水平的变化。结果：在与UCN共同培养4~8h后,HUVEC细胞上清液中NO水平呈时间和剂量依赖性变化,随着培养时间的延长,UCN浓度增加,NO水平逐渐升高;UCN组HUVEC iNOS表达水平比对照组明显升高（P〈0.05）,且呈浓度依赖性升高。而各组eNOS表达水平与对照组比较无明显变化（P〉0.05）。UCN/CRH＋α-helical-CRH组HUVEC上清液中NO水平和HU-VEC iNOS表达水平与对照组比较无明显变化,差异无统计学意义（P〉0.05）,与相同浓度UCN/CRH组比较NO水平和iNOS蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：UCN可促HUVEC合成及释放NO,NO生成增多与UCN通过促进肾上腺皮质激素释放激素2β受体（CRH-R2β）正相调节iNOS蛋白表达有关,这可能是UCN调节胎儿-胎盘血管张力的分子机制之一。

彩超观察子宫动脉及螺旋动脉能量图与体外受精的关系

目的 :为了探讨子宫动脉及螺旋动脉的能量与体外受精 -胚胎移植 (IVF- ET)结局的关系。方法 :2 0 0 1年 10月～ 2 0 0 2年 6月对 12 4例行常规 IVF助孕的妇女于其注射 HCG之日利用三维彩色多普勒观察子宫动脉及螺旋动脉的 PI、 RI及子宫内膜厚度。结果 :5 2例妊娠 ,72例未妊娠。妊娠组与未妊娠组不孕原因及超促排卵的一般资料无差异 ,而妊娠组螺旋动脉及子宫动脉的 RI、 PI低于未妊娠组 ,P<0 .0 5 ,有显著差异 ,两组子宫内膜厚度无显著差异。结论

精子核蛋白组型严重异常的临床病例治疗分析

目的探讨孕早期自发流产或胚胎停育的精液实验指标。方法 38例精子核蛋白组型严重异常的实验与治疗统计。结果 38例精子核蛋白组型严重患有经过治疗后,连续监测病例发现核蛋白恢复正常后,其配偶自发性流产或胚胎停育发生机率明显下降,正常分娩率显著提高。结论精子核蛋白组型异常是导致自发性流产和胚胎停止发育的非遗传危险因素,但通过药物等治疗途径可以得到改善。

卵巢早衰发病7年后自发妊娠1例及病例分析

卵巢早衰（premature ovarian failure,POF）是指妇女40岁以前出现闭经及卵巢功能的提前衰竭。许多患者不仅要忍受绝经期低雌症状的困扰,还要接受可能不能生育后代的现状。POF曾被认为是卵巢功能的永久丧失,但随着近年来POF后妊娠报道的增多，这种观点有所改变。本文报道1例患者在诊断为POF7年后发生自发妊娠的病例，并对文献报道的POF后妊娠病例进行复习。