细胞生物学课程思政教学实施策略

立德树人是教育的根本任务。为贯彻党的教育方针,充分挖掘细胞生物学课程内容中的思政元素,应将专业知识教学与思政教育有机融合,构建“三全育人”体系,全面推进课程思政建设,以期取得良好的教学效果。

沼液农用对土壤氮素形态影响的整合分析

通过研究沼液施用对农田土壤氮素形态影响,为沼液农田可持续利用提供数据支撑。在中国知网和Web of Science文献数据库中,以“沼液”和“氮”为关键词,检索2021年12月以前公开发表的沼液农用下土壤氮素研究文献,利用Meta数据整合分析方法,定量分析沼液施用对农田土壤氮素形态及相关微生物群落和作物产量的影响。与单施化肥相比,沼液配施显著降低了土壤硝态氮含量,增加了土壤碱解氮和微生物量氮含量以及土壤放线菌、细菌、真菌群落数量和作物产量。对于牛粪和鸡粪猪粪混合沼液,猪粪沼液显著降低了土壤硝态氮含量;≤50 kg·hm^(-2)低沼液氮投入量显著降低土壤硝态氮和铵态氮含量,增加全氮含量;20%~40%沼液氮替代化肥氮比例显著增加土壤全氮和碱解氮含量,提高微生物群落数量,同时降低土壤硝态氮含量。沼液施用显著影响土壤氮素含量,但不会增加农田氮素淋失风险。在沼液施用中应用猪粪沼液、控制沼液氮替代化肥氮比例为20%~40%及≤50 kg·hm^(-2)沼液氮投入量还会显著降低氮素淋失风险。

尼古丁对大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨尼古丁对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响。方法用终浓度为100μmol/L的尼古丁作用于体外培养的大鼠VSMCs 24h,不加尼古丁的细胞作为对照组,应用荧光显微镜和扫描电子显微镜观察各组细胞凋亡的形态,BrdU-ELISA和流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡率,进而确定尼古丁对VSMCs增殖和凋亡的影响。结果流式细胞术显示,对照组处于S期细胞比例占总采集细胞的14.46%±4.47%,明显高于尼古丁组处于S期细胞的6.77%±3.41%(P<0.05);对照组的细胞凋亡率为11.47%±2.56%,尼古丁诱导组的凋亡率为24.65%±4.67%,两者差异显著(P<0.05);BrdU-ELISA法显示,与对照组相比,尼古丁组细胞的DNA合成量也明显减少;细胞化学显色法和扫描电子显微镜观察尼古丁诱导组细胞出现明显凋亡形态-核破裂和凋亡小体。结论一定剂量的尼古丁可显著抑制VSMCs的增殖和诱导其凋亡。

靶向叉头框蛋白J2的CRISPR/Cas9基因敲除质粒的构建及其对肝癌细胞转化生长因子β/Smads表达和增殖的影响

目的构建靶向叉头框蛋白J2(FOXJ2)的规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9(CRISPR/Cas9)基因敲除质粒,探讨干扰FOXJ2基因后对小鼠肝癌细胞Hepa1-6的信号通路转化生长因子β/Smads家族蛋白(TGF-β/Smads)表达和增殖的影响。方法设计小鼠FOXJ2的小向导RNA(sgRNA)序列,与PX458载体连接并转化感受态大肠埃希菌,挑取单克隆扩增提质粒。利用脂质体将重组质粒PX458-FOXJ2-sgRNAs转染入肝癌细胞Hepa1-6,对照组只转染空载体,48 h后RT-PCR检测对Hepa1-6细胞FOXJ2的抑制作用,同时检测FOXJ2被抑制后TGF-β和Smads的表达情况;MTT法检测干扰FOXJ2后对肝癌细胞增殖能力的影响。结果成功构建3个FOXJ2的CRISPR/Cas9基因敲除质粒PX458-FOXJ2-sgRNAs,其中质粒PX458-FOXJ2-sgRNA2可以有效抑制FOXJ2的表达,同时检测到干扰了FOXJ2的细胞的TGF-β、Smad2和Smad4的表达均高于对照组,差异显著;并且FOXJ2被抑制组肝癌细胞的增殖能力明显提高。结论小鼠肝癌细胞中的FOXJ2基因在一定程度上抑制TGF-β、Smad2和Smad4基因的表达,抑制细胞的增殖,推测在体情况下,肝癌细胞的增殖和TGF-β信号通路的激活与FOXJ2基因的负调控有一定的相关性,FOXJ2可以作为肝癌预防和治疗的靶点分子进行干预。

不同频率张应变对大鼠血管平滑肌细胞α-肌动蛋白表达的影响

目的研究不同频率张应变对血管平滑肌细胞表型转换的影响。方法应用FX-4000T细胞应变加载系统,对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞施加10%应变,频率分别为0.5 Hz1、Hz和2 Hz,加载时间12 h和24 h后,采用Real time RT-PCR、Western blot、免疫荧光化学等技术检测不同频率张应变下血管平滑肌细胞的αlpha-肌动蛋白(-αactin)的表达变化。以未加载张应变的血管平滑肌细胞为对照组。结果血管平滑肌细胞的-αactin的蛋白和RNA表达量在1 Hz条件下比相同时相点的其他频率组均高。结论不同频率的张应变可以影响血管平滑肌细胞-αactin的表达量,提示应变频率的改变可能参与血管平滑肌细胞表型转换的调节。

不同频率张应变对大鼠血管平滑肌细胞外基质的影响

为研究不同频率张应变对血管平滑肌细胞(VSMC)细胞外基质(ECM)的影响,探讨不同频率张应变与血管重建(remodeling)的关系,本文应用FX-4000TTM细胞应变加载系统,对体外培养的大鼠VSMC施加10%张应变,频率分别为0.5、1和2Hz,加载时间为24h,以未加载张应变的VSMC为对照组。采用Real-time RT-PCR、western blot等技术检测不同频率张应变对fibronectin、collagen Ⅰ和collagenⅢ表达的影响,以及可能参与调节的蛋白激酶p38的活性变化。结果显示:①张应变频率可以明显影响细胞外基质Fibronectin、collagenⅠ和collagenⅢ的mRNA的表达,其影响效果与频率大小是一种非线性关系;②蛋白激酶p38参与调节了一定频率张应变诱导的ECM的表达变化。结果表明不同频率的张应变可以影响VSMC细胞外基质表达的变化,提示频率的改变可能参与调节细胞外基质的合成与分泌;在应力引起的血管重建中频率的改变可能起着重要的作用。

p38促进尼古丁诱导的大鼠血管平滑肌细胞的细胞外基质表达

目的探讨尼古丁对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)的细胞外基质(ECM)表达的影响及可能的机制。方法用终浓度为100μmol/L的尼古丁作用于体外培养的大鼠VSMCs 24 h,以不加尼古丁的细胞为对照组,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫印迹(Western blotting)方法检测ECM包括Ⅰ型胶原、纤维黏连蛋白和膜受体整合素表达的差异,以及可能参与信号转导的蛋白激酶p38的活性变化。结果与对照组相比,尼古丁刺激组细胞的两种细胞外基质包括I型胶原和纤维黏连蛋白及膜受体整合素β1的表达均升高,分别为对照组的1.8倍、1.7倍和1.6倍,差异显著(P<0.05);尼古丁刺激组的蛋白激酶p38的活性比对照组高1.95倍,差异极其显著(P<0.01);p38的活性被特异抑制剂SB202190抑制后,尼古丁诱导的I型胶原的表达也随之下降。结论 p38参与尼古丁诱导的细胞外基质的高表达。

规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9靶向Rho GDIα基因敲除质粒的构建及其对小鼠肝癌细胞系Hepa 1-6迁移的影响

目的利用规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9(CRISPR/Cas9)技术构建Rho鸟苷酸解离抑制因子α(GDIα)的基因敲除载体,并探讨干扰Rho GDIα后对小鼠肝癌细胞Hepa 1-6迁移的影响。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计Rho GDIα的向导RNA(sgRNA)序列,并与PX458载体相连,构建Rho GDIα基因敲除重组质粒PX458-Rho GDIα-sgRNA1和PX458-Rho GDIα-sgRNA2;脂质体转染法将重组质粒转染入Hepa 1-6细胞抑制Rho GDIα的基因表达;RT-PCR法检测Rho GDIα被抑制后的mRNA表达情况;划痕法检测Rho GDIα干扰后Hepa 1-6细胞迁移距离的差异;迁移小室法检测抑制Rho GDIα后Hepa 1-6细胞迁移数量的差异。结果成功构建了Rho GDIα的CRISPR/Cas9基因敲除质粒PX458-Rho GDIα-sgRNAs;转染有PX458-Rho GDIα-sgRNA1的Hepa 1-6细胞与对照组只转染空载体PX458的细胞相比,Rho GDIα的表达被明显抑制(P<0.05),而且该组细胞从划痕起始处迁移到空白处距离较远,从迁移小室上端迁移到底端数目明显增多,差异极其显著(P<0.01),说明Rho GDIα被抑制后肝癌细胞的迁移能力提高。结论CRISPR/Cas9法构建的重组质粒PX458-Rho GDIα-sgRNA1可以有效抑制Rho GDIα的基因表达;Rho GDIα被抑制后明显促进小鼠肝癌细胞Hepa 1-6的迁移,提示在体情况下,Rho GDIα的表达可能起到抑制细胞迁移的重要作用,在肿瘤组织中,可以利用过表达Rho GDIα来抑制肿瘤细胞的转移。

趋化因子在心血管疾病中的作用

趋化因子是一类能介导细胞定向迁移的细胞因子,其功能的行使是通过与相应的受体结合而实现。越来越多的研究证明趋化因子及其受体在动脉粥样硬化、心肌缺血再灌注损伤等心血管疾病中起重要作用。

细胞凋亡的三种形态学检测法的应用比较

文章比较分析了光学显微镜、荧光显微镜和扫描电子显微镜检测细胞凋亡的差异,探讨三种形态学检测法在尼古丁诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)凋亡中的应用。用终浓度为100μM的尼古丁作用于体外培养的大鼠血管平滑肌细胞24 h,不加尼古丁的细胞作为对照组,应用普通光学显微镜、荧光显微镜和扫描电子显微镜分别观察各组细胞的形态,确定尼古丁对血管平滑肌细胞凋亡的影响。三种形态学检测方法均可检测到尼古丁明显诱导血管平滑肌细胞的凋亡。荧光显微镜检测法因操作简便、灵敏度较高、价格适中,更适用于本实验。

沙利度胺通过诱导G_1阻滞和凋亡抑制血管内皮细胞增殖

沙利度胺是一种抗血管生成药物,临床上用于治疗多种肿瘤,但其抗肿瘤血管生成机制尚不十分清楚.本文采用MTT法观察沙利度胺对体外培养的血管内皮细胞增殖的影响.结果发现,沙利度胺能够抑制血管内皮细胞的增殖,其IC50为16.47μg/mL;然后采用Hoechst染色和流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,发现沙利度胺能够诱导内皮细胞凋亡,并干扰细胞的周期,出现G0/G1期阻滞.最后,通过Western印迹方法分析沙利度胺对血管内皮细胞Bcl-2蛋白表达的影响,发现抗凋亡的Bcl-2蛋白表达水平随沙利度胺浓度增大而降低.初步结果提示,沙利度胺可能通过阻遏抗凋亡分子Bcl-2表达,激活诱导G1期阻滞的信号通路而抑制内皮细胞新生,从而抑制肿瘤生长.诱导内皮细胞凋亡及G1期阻滞的具体分子机制正在研究中.

内皮细胞对血管平滑肌细胞整合素β_1表达的影响

目的:探讨内皮细胞(endothelialcells,ECs)对血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)整合素β1(β1-integrin)表达的影响,为研究血管壁细胞功能提供理论依据。方法:应用血管ECsVSMCs联合培养系统,以WesternBlot和细胞免疫荧光技术,检测与ECs联合培养12h后VSMCs的β1-integrin表达和分布变化。结果:与ECs的联合培养,能明显增强VSMCs的β1-integrin蛋白表达,同时诱导VSMCs表面β1-integrin的激活。结论:ECs可能通过调节VSMCs的β1-integrin表达,从而影响VSMCs的功能。

小儿哮喘发作期雾化吸入治疗的观察及护理

目的探讨雾化吸入治疗小儿哮喘的疗效及护理。方法选择部分患儿在治疗哮喘病中,采用雾化吸入,观察患儿的咳嗽、喘憋等临床症状改变等情况。结果经过3~5d的治疗,效果明显。结论雾化吸入疗效满意,吸入疗法的护理很重要,直接影响治疗效果。

腺病毒介导的HCY2基因对血管平滑肌细胞凋亡的诱导作用

目的 观察高同型半胱氨酸诱导基因HCY2对于平滑肌细胞的作用。方法 以复制缺陷型腺病毒作为载体 ,将HCY2基因转移到平滑肌细胞中。提取平滑肌细胞的DNA ,进行凝胶电泳及ELISA ,行DNA片段化分析。用流式细胞术观察平滑肌细胞的亚二倍体。结果 转染HCY2后平滑肌细胞的DNA断裂成相差 2 0 0bp左右的片段 ,流式细胞术测定时发现 ,位于亚二倍体区的平滑肌细胞明显增多。结论 HCY2基因能引起平滑肌细胞的凋亡。

儿科输液区护士静脉穿刺成功率的探讨

静脉穿刺是护士的一项基本的技术操作，其自身的心理状态、情绪波动等外界因素也是影响静脉穿刺成功率低的重要因素。我院从2000年1月成立了专门的儿科输液区，从刚开始穿刺成功率的85％提高到现在的98％以上，现分析如下。