暴马桑黄SbLSD基因克隆及差异表达分析

【目的】暴马桑黄是一种重要的药用资源,三萜是其发挥药用功效的主要成分,但是目前获取大量三萜仍然非常困难。通过对暴马桑黄三萜合成途径中的羊毛甾醇14α-脱甲基酶(lanosterol 14-alpha-demethylase,LSD)基因进行克隆及差异表达分析,以期深入了解暴马桑黄三萜合成的调控机理,进而提高三萜产量。【方法】采用PCR扩增得到LSD基因cDNA序列全长,利用生物信息学软件对该基因编码的氨基酸序列进行分析;采取同源重组方法构建原核表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达,SDS-PAGE检测;qRT-PCR技术分析LSD基因在暴马桑黄不同发育阶段转录水平差异。【结果】暴马桑黄LSD基因cDNA全长1662 bp,编码553个氨基酸,相对分子量为62.26 kDa,命名为SbLSD(登录号为MN864180);跨膜区和亚细胞定位预测显示SbLSD蛋白是在内质网和高尔基体发挥作用的跨膜蛋白;系统进化树结果表明暴马桑黄和灵芝的LSD蛋白同源性最高,符合物种经典分类;SDS-PAGE结果证实在62.26 kDa附近出现目的蛋白条带,说明所获得的基因可以成功表达出蛋白;从荧光定量分析结果中可以看出SbLSD基因转录水平在不同发育阶段有差异性,并且在子实体阶段该基因转录水平最高,与羊毛甾醇合成的基因变化规律相吻合。【结论】通过对SbLSD基因的分子鉴定解析,为进一步揭示该基因在暴马桑黄三萜合成途径中的功能奠定基础。

丝状真菌遗传转化体系及筛选技术的研究进展

目前,丝状真菌已经广泛应用于工业、农业、医药等领域,随着基因时代的发展,大量丝状真菌基因组序列公布,丝状真菌的基因功能研究和菌种改造也成为现今分子生物学的热点,但是这些研究都需要高效稳定的遗传转化体系来支撑。然而现有的遗传转化方法仍存在转化效率较低、筛选阳性困难等问题。为了在大量转化受体中筛选阳性转化子,快速准确的检测阳性转化子在遗传转化研究中具有至关重要的作用。综述了目前广泛使用的丝状真菌遗传转化体系的构建方法以及从核酸、蛋白质、生物学特性等方面鉴定丝状真菌阳性转化子的检测方法,为从分子水平研究丝状真菌的基因功能、改良菌种奠定基础。

刍议城市供排水设计常见问题及改进建议

随着经济的发展,城市化进程的加快,城市供排水工程成为道路建设中不可或缺的部分,城市的供排水建设关系到城市居民的正常工作与生活,是城市及时排除积水,避免受到洪灾威胁的重要保障.本文简述城市供排水设计常见问题及改进建议.

水稻苗期病害的发生与防治

大石桥稻区地势低洼,盐碱较重,受季风气候影响,4～5月间温度变幅较大,对水稻苗期生长极为不利。常造成水稻黄立枯病、青立枯病严重发生。导致秧苗素质下降,延迟插秧、分蘖,影响稻谷产量。通过加强苗期管理,增强秧苗自身抗逆能力,抵御病害,健康生长,可实现壮苗早插、正常发育、增产增效、提高效益之目的。

关于城市供排水工程施工问题的思考

排水工程施工在排水工程建设中具有很重要的地位，我们要提高质量意识，发挥人的主观能动性，不断研究施工技术，加强创新步伐。本文简述对城市供排水工程施工问题的思考。

供排水管道内衬修复技术与应用

城市供排水管道是整个城市的血液，为居民提供生活用水，同时排出生活污水。近年来．由于城市化和工业化的发展．在全国上下保护水资源、治理水污染的形势下．排水设施工程已经成为各地基础建设的热点，供排管道虽然是埋藏在地下的隐形工程，但其意义重大，供排管道的正常运行关系到城市居民的生产生活．因此，管道内衬修复技术的推广与创新势在必行。由于供排水管道一般深埋地下．大多都使用管道内衬修复技术作为管道维修的有效手段。下面对供排水管道内衬修复技术与应用作以介绍。

暴马桑黄羊毛甾醇14α-脱甲基酶基因的克隆、序列分析及原核表达

为深入了解暴马桑黄三萜合成途径的调控机理,基于前期测得的转录组数据,同时结合基因组数据(GenBank登录号为LNZH00000000.2),筛选得到暴马桑黄羊毛甾醇14α-脱甲基酶(lanosterol 14-alpha-demethylase,LSD)基因序列,并设计特异引物。以暴马桑黄菌丝体总RNA反转录得到的cDNA为模板,采用PCR技术克隆得到LSD基因cDNA序列全长,命名为SbLSD1(登录号为MN640689)。序列分析结果表明,SbLSD1基因cDNA序列全长1 746 bp,编码581个氨基酸,分子量为65.96 ku,没有信号肽,在53~75位氨基酸序列之间含有一个跨膜螺旋结构,属于P450超家族成员。系统发育分析表明,暴马桑黄LSD1蛋白和灵芝LSD蛋白同源性最高。将SbLSD1基因cDNA序列构建到原核表达载体pET-32a上,获得重组质粒pET-32a-SbLSD1,然后将其转入Escherichia coliBL21中进行SbLSD1蛋白诱导表达。SDS-PAGE结果显示,SbLSD1基因成功表达出蛋白,并在63~75 ku出现与预期大小一致的蛋白条带。通过对SbLSD1基因的克隆及表达分析,为进一步研究该基因在暴马桑黄三萜生物合成过程中的功能奠定基础。