人胃癌组织中分子伴侣蛋白的表达及检测

目的:检测人胃癌组织中GRP94/gp96,CRT的表达,分离并鉴定富含分子伴侣的细胞裂解物(CRCL),为研制和开发肿瘤来源的分子伴侣疫苗奠定基础.方法:采用免疫组织化学方法检测人胃癌组织中GRP94/gp96和CRT表达及其表达程度与胃癌病理因素的关系;等电聚焦技术从人胃癌组织匀浆中分离CRCL,经电泳及Westernblot进行蛋白分子质量及性质鉴定.结果:癌组织中GRP94/gp96和CRT表达的阳性率分别为86.3%和84.3%;而癌旁非癌组织中的阳性率分别为37.3%和43.1%,癌组织表达程度显著高于癌旁非癌组织(X2=25.946,18.704,P<0.01);癌组织中GRP94/gp96的表达程度与肿瘤分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关,CRT的表达程度与肿瘤大小及淋巴结转移有关.分离的CRCL经鉴定为HSP70,HSP90,GRP94/gp96,CRT.并且这些分子伴侣蛋白沿pH梯度集中分布于5-11号收集管中,其余管中未见明显表达.pH跨度为4.8-5.6.不同组织类型中分子伴侣蛋白的分布及pH跨度具有一致性.结论:胃癌组织中稳定表达GRP94/gp96和CRT,其表达程度与胃癌的发生、发展及其生物学行为有关.

PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞来源的Exo-some促进同源肿瘤细胞增殖中的作用

目的:研究胃癌细胞来源的Exosome对同源肿瘤细胞增殖的影响,初步探讨PI3K/Akt和MAPK/ERK信号转导通路在此过程中的作用.方法:采用离心超滤和蔗糖密度梯度离心的方法从胃癌MGC803细胞的上清液中分离出胃癌细胞来源的Exosome.应用透射电子显微镜观察Exosome的形态,MTT检测细胞活力,Western blot检测蛋白的表达.结果:透射电子显微镜下观察胃癌MGC803细胞来源的Exosome具有特征性的盘状结构,由双层膜构成,他们的直径在30-100nm.Westernblot结果显示Exosome表面富含CD9和TSG101分子.Exosome能以时间和剂量依赖性的方式促进MGC803和其同源肿瘤细胞SGC7901细胞的增殖,在此过程中伴随有磷酸化Akt和磷酸化ERK表达的上调.结论:胃癌细胞来源的Exosome能促进同源肿瘤细胞的增殖,其机制可能与激活PI3K/Akt和MAPK/ERK信号转导通路有关.

MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞来源的外来体诱导Jurkat T细胞凋亡中的作用

目的:研究胃癌细胞来源的外来体对JurkatT细胞凋亡的影响,初步探讨MAPK/ERK通路在此过程中的作用.方法:采用离心超滤和蔗糖密度梯度超速离心的方法从胃癌SGC7901细胞的上清液中分离出胃癌细胞来源的外来体.透射电子显微镜下观察外来体形态,流式细胞仪PI染色检测细胞凋亡,Westernblot检测蛋白表达.结果:透射电子显微镜下观察胃癌SGC7901细胞来源的外来体具有特征性的盘状结构,由双层膜构成,他们的直径为30-100nm.外来体能以时间和剂量依赖性的方式诱导JurkatT细胞凋亡,在凋亡过程中伴有caspase-3,8的活化和p-ERK表达的下调.结论:胃癌细胞来源的外来体能诱导JurkatT细胞凋亡,其机制可能与抑制MAPK/ERK通路的活性有关.

Src激酶在胃癌细胞来源的exosome促进肿瘤细胞增殖中的作用

目的:研究胃癌细胞来源的外泌体(exosome)对肿瘤细胞增殖的影响,初步探讨Src蛋白激酶在此过程中的作用.方法:采用离心超滤和蔗糖密度梯度超速离心的方法从胃癌SGC7901细胞的上清液中分离出胃癌细胞来源的exosome.透射电子显微镜下观察exosome形态,MTT法检测细胞增殖能力,Westernblot检测蛋白的表达.结果:透射电子显微镜下观察胃癌SGC7901细胞来源的exosome具有特征性的盘状结构,由双层膜构成,他们的直径30-100nm.Westernblot结果显示exosome表面富含CD9和TSG101分子.MTT结果显示exosome能以时间和剂量依赖性的方式促进SGC7901细胞的增殖,200mg/L和400mg/L的exosome处理SGC7901细胞72h,细胞的增殖比率分别是对照组的138%(P<0.001)和144%(P<0.001),在此过程中伴随有p-Src表达的上调.结论:胃癌细胞来源的exosome能促进肿瘤细胞的增殖,其机制可能与激活Src蛋白激酶有关.

胃癌细胞来源的exosomes对肿瘤细胞增殖的影响

目的:观察胃癌细胞来源的exosomes对肿瘤细胞增殖的影响,并对PI3K/Akt、MAPK/ERK通路在此过程中的作用机制进行了探讨。方法:采用离心超滤和蔗糖密度梯度超速离心的方法从胃癌MGC803细胞的上清液中分离出肿瘤来源的exosomes。透射电子显微镜下观察exosomes形态,Western blot检测其蛋白的表达。采用MTT法检测exosomes对MGC803细胞增殖能力的影响。结果:透射电子显微镜下观察胃癌MGC803细胞来源的exosomes具有特征性的盘状结构,由双层膜构成,直径在30-100nm之间。Westernblot结果显示exosomes富含FGF、EGFR和Her-2分子。Exosomes以时间和剂量依赖性的方式促进MGC803细胞的增殖,在此过程中伴随p-Akt和p-ERK1/2表达上调。结论:胃癌细胞来源的exosomes能促进肿瘤细胞MGC803增殖,其机制可能与其表面表达FGF、EGFR和Her-2分子及激活PI3K/Akt和MAPK/ERK通路有关。

晚期胃癌分子靶向治疗的现状及其发展趋势

胃癌死亡率占全球第2位.目前,化疗仍是晚期胃癌的主要治疗手段.尽管新药联合化疗在一定水平改善了患者的生存,但晚期胃癌中位生存仍不尽人意.迫切需要新的治疗手段改善患者的生存.随着胃癌分子生物学研究的不断深入,针对肿瘤细胞生长、凋亡、侵袭浸润以及血管生成等分子靶点提出的分子靶向治疗成为胃癌综合治疗的热点.本文将对近几年报道的晚期胃癌的分子靶向治疗结果进行简要综述.

干扰素-α增强胃癌细胞对TRAIL的敏感性及其机制研究

目的:观察IFN-α对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的影响,并探讨ERK信号通路在此过程中的作用及其可能的机制。方法:MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪PI染色检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测蛋白的表达。结果:IFN-α预处理可协同TRAIL抑制胃癌SGC7901细胞增殖。单独用IFN-α或TRAIL处理SGC7901细胞,仅有少量的细胞发生凋亡,IFN-α和TRAIL联合用药细胞凋亡明显增加(P<0.01)。IFN-α能上调DR4和p-ERK的表达,抑制ERK的活性能部分逆转IFN-α和TRAIL协同诱导的胃癌细胞凋亡和DR4表达的上调。结论:IFN-α能增强TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡,其机制可能通过激活ERK信号通路,进而上调DR4的表达有关。

Cbl-b在T细胞免疫耐受和肿瘤免疫治疗中的作用

Cbl-b(casitas B-cell lineage lymphoma-b)为一种高度保守的RING家族E3泛素连接酶,是调节T细胞信号的关键因子,对维持外周T细胞免疫耐受至关重要。Cbl-b表达受转录因子、共刺激分子CD28、CTLA4及自身泛素化的调控。Cbl-b通过泛素化激活的受体、受体相关酪氨酸激酶和下游信号分子而参与淋巴细胞信号的负性调控,进而精密调节抗原受体信号和免疫反应。另外,Cbl-b在调控T细胞TGF-β信号转导通路中起着重要作用。Cbl-b的缺失能增强抗肿瘤免疫反应,打破自身免疫耐受。因此,深入研究Cbl-b在T细胞免疫耐受和肿瘤免疫治疗中的作用可为肿瘤免疫治疗提供新的靶点。

胃癌细胞来源的exosomes诱导Jurkat T细胞凋亡及其机制初探

目的研究胃癌细胞来源的exosomes对JurkatT细胞凋亡的影响,初步探讨NF-κB通路在此过程中的作用。方法采用离心超滤和蔗糖密度梯度超速离心的方法从胃癌SGC7901细胞的上清液中分离出胃癌来源的exosomes。透射电子显微镜下观察exosomes形态。台盼兰拒染法检测细胞增殖能力,瑞氏-姬姆萨染色检测细胞凋亡,Western blot检测蛋白的表达。结果透射电子显微镜下观察胃癌SGC7901细胞来源的exosomes具有特征性的盘状结构,由双层膜构成,它们的直径在30～100nm之间。Exosomes能抑制JurkatT细胞增殖,并能诱导JurkatT细胞凋亡,在此过程中伴随有p-IKK表达的下调。结论胃癌细胞来源的exosomes能抑制JurkatT细胞凋亡,其机制可能与抑制NF-κB通路有关。

干扰素-α通过上调DR5和抑制Akt的活性增加胃癌细胞对TRAIL的敏感性

目的:观察IFN-α对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的影响,并对死亡受体DR5和PI3K/Akt通路在此过程中的作用机制进行探讨。方法:MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞仪PI染色检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测蛋白的表达。结果:IFN-α预处理可协同TRAIL抑制胃癌MGC803细胞增殖。单独用IFN-α或TRAIL处理MGC803细胞,仅有少量的细胞发生凋亡,IFN-α和TRAIL联合用药细胞凋亡明显增加(P<0.01)。IFN-α能上调DR5的表达,抑制Akt的磷酸化。结论:IFN-α能增强TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡,其机制可能与其上调DR5的表达和抑制Akt的活性有关。

细胞外蛋白调节激酶依赖的survivin表达下调在干扰素-α增强胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体敏感性中的作用

目的观察干扰素(IFN)-α对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导胃癌细胞凋亡的影响,并探讨凋亡抑制蛋白survivin和其上游信号分子细胞外蛋白调节激酶(ERK)在此过程中的作用机制。方法流式细胞仪碘化丙啶(PI)染色检测IFN-α和/或TRAIL诱导的胃癌SGC7901细胞凋亡,蛋白质印迹法检测IFN-α和(或)TRAIL刺激后survivin、p-ERK和ERK的表达。结果 IFN-α预处理可协同TRAIL诱导胃癌SGC7901细胞凋亡。IFN-α能下调survivin的表达,同时激活ERK信号通路。抑制ERK的活性能部分逆转survivin表达的下调以及IFN-α和TRAIL协同诱导的胃癌细胞凋亡。结论 IFN-α能增强TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡,其机制可能与ERK依赖的survivin表达下调有关。

肿瘤免疫及其治疗应用

近年来,随着免疫学基础理论研究的迅速发展,尤其是对人类肿瘤抗原的确认及MHCI类分子参与的抗原加工和提呈分子机制等的深入研究,肿瘤免疫学基础理论研究以及相应的肿瘤免疫治疗研究均取得了较大的进展。以肿瘤免疫治疗为代表的肿瘤生物治疗已成为继手术治疗、化疗和放疗后的肿瘤治疗第四种模式。本文对肿瘤免疫及其治疗应用的进展作一简要综述。

蟾蜍灵在诱导HL-60细胞凋亡时对SYK和CBL家族蛋白的影响

为了探讨酪氨酸蛋白激酶SYK和CBL家族泛素连接酶在蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用机制,采用台盼蓝染色检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用Western blot和免疫沉降技术检测CBL、CBL-b表达和SYK的磷酸化。结果显示,蟾蜍灵以时间和剂量依赖方式抑制HL-60细胞增殖,24、48和72小时抑制细胞活力的IC50浓度分别约为26.3,7.8和2.0 nmol/L。高剂量蟾蜍灵从8小时即开始诱导HL-60细胞凋亡;与此同时蟾蜍灵快速活化SYK,并以时间依赖的方式下调CBL和CBL-b表达。结论:SYK活化及CBL家族蛋白表达下调可能参与蟾蜍灵对HL-60细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。

利用TCGA数据集分析AKT3在胃癌中的表达及临床意义

目的研究AKT3在胃癌中的表达情况,预测并探讨AKT3参与肿瘤发生发展的可能机制及临床价值。方法从癌症基因组图谱(TCGA)数据库收集胃癌数据集,下载AKT3基因表达谱资料及临床信息资料。分析AKT3表达与胃癌临床病理学参数的相关性及对预后的影响。采用基因集富集分析(GSEA)方法预测AKT3的调控基因。结果 AKT3表达水平与肿瘤浸润深度(P=0.001)、TNM分期(P=0.049)、分化程度(P<0.001)相关,肿瘤恶性程度越高,AKT3表达越高。AKT3高表达患者总生存期明显短于低表达患者(P<0.001)。AKT3高表达样本富集了细胞黏附、骨架蛋白调控、紧密连接、TGF-β通路等基因集。结论在胃癌中,AKT3高表达是一种预后不良因素,可以作为预测患者转移发生、判断预后的有效生物标志物。

胃癌化疗的现状与研究进展

胃癌是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一,发病率及死亡均居高不下,目前,无论早期胃癌的术后辅助治疗,还是晚期胃癌的维持治疗,均以化疗为主。近年来,靶向治疗及免疫治疗等多种新型治疗手段的发展,也为胃癌的药物治疗提供了更多的选择。本文对胃癌的药物治疗进展进行综述。

FAK及pAKT在乳腺癌中的表达及预后分析

目的探讨黏着斑激酶(FAK)及磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)在乳腺癌组织中的表达情况及临床价值。方法收集从1997至2008年于我院行乳腺癌根治手术的271例有完整存档蜡块标本,采用组织微阵列芯片和免疫组化SP法检测FAK和p-AKT在乳腺癌组织中的表达,并对两者的表达情况及其与乳腺癌临床病理因素和患者生存情况的关系进行分析。结果 FAK、p-AKT的高表达率分别为53.9%(146/271)、36.2%(98/271),两者的表达水平呈正相关(r=0.397,P<0.01)。FAK/p AKT同时均高表达的比率为29.2%(79/271)。FAK高表达与孕激素受体(PR)呈负相关(P=0.046),p AKT高表达与组织学分级(P=0.024)、淋巴结转移(P=0.016)呈正相关,FAK与p AKT共同高表达的患者更倾向于出现淋巴结转移、骨/软组织转移(P=0.019,P=0.022)。FAK高表达人群中,p-AKT高表达者的总生存期(OS)明显短于低表达者(P=0.047)。单独分析FAK及p-AKT表达与总体人群预后无关,将两者联合分析后,FAK/p AKT均高表达患者的OS明显缩短(P=0.027)。亚组分析显示:HER2阳性患者,FAK/p AKT高表达者的OS缩短(P=0.015),FAK/p AKT高表达是HER2阳性乳腺癌的独立预后因素(HR=3.352,P=0.021)。结论在乳腺癌组织中FAK和p-AKT两者密切相关,FAK/p AKT联合检测能够预测乳腺癌患者的预后,并能够成为HER2阳性乳腺癌的独立预后指标。

中期因子在胃癌中的表达与细胞增殖的关系

目的:研究中期因子(midkine,MK)在人胃癌组织中的表达情况,探讨其与胃癌细胞增殖的关系及分子机制。方法:收集70例临床胃癌组织标本及其配对癌旁正常胃黏膜组织标本,应用实时定量PCR技术检测中期因子mRNA表达水平。构建中期因子逆转录病毒载体,经DNA测序正确后,应用脂质体转染法将病毒载体转染GP293病毒包装细胞,48h后收集病毒上清。分别用不同浓度的病毒上清感染人胃癌SGC7901细胞,应用MTT法检测细胞增殖速率。应用免疫印迹技术检测中期因子影响胃癌细胞增殖的分子机制。结果:有65.7%(46/70)胃癌组织中中期因子表达量为癌旁正常胃黏膜组织2倍以上,而仅有11.4%(8/70)癌旁正常胃黏膜组织中中期因子表达量为胃癌组织2倍以上,二者统计学有显著性差异(P<0.05)。随着感染病毒浓度的增加,中期因子蛋白表达水平逐渐增加,同时SGC7901细胞增殖速率逐渐加快。随着MK蛋白表达水平的增加,泛素连接酶CBL、CBL-b蛋白表达水平下降,磷酸化Akt蛋白表达水平增加。结论:中期因子在胃癌组织中呈高表达;应用其逆转录病毒感染SGC7901细胞可显著促进胃癌细胞增殖;中期因子以剂量依赖性方式下调泛素连接酶CBL、CBL-b表达,同时伴有Akt活性的上调,推测中期因子通过下调CBL、CBL-b蛋白表达,解除其对PI3激酶的泛素化降解作用,从而激活PI3K/Akt信号通路,促进肿瘤细胞的生长。

胃癌细胞来源的exosome的提取和鉴定

目的从胃癌细胞系SGC7901培养上清中分离获得外来体(exosome),并进行形态学观察鉴定。方法通过低速离心、高速离心、超滤及超高速离心等方法,从SGC7901胃癌细胞培养上清中分离exosome,用透射电子显微镜观察其形态特征,Lorry方法蛋白定量,通过免疫印迹进行主要组织相容性复合体(MHC)分子鉴定。结果SGC7901胃癌细胞上清中分泌大量的exosome,电镜下观察呈椭圆形或圆形的双层膜的囊泡,直径为30～100nm,具有完整的细胞膜。结论用离心的方法可从SGC7901胃癌细胞培养上清中提取exosome,有可能作为胃癌免疫治疗的潜在抗原,同时也为研究肿瘤的发病机制提供一个新的途径。

抑制NF-κB通路增强蟾蜍灵诱导的HL-60细胞凋亡

目的:观察蟾蜍灵对HL-60细胞活力和凋亡的影响,对NF-κB通路的作用,探讨NF-κB通路在蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用。方法:锥虫蓝染色检测细胞活力;流式细胞仪技术检测细胞凋亡和周期分布;采用WesternBlot技术检测IKK的磷酸化。结果:蟾蜍灵以时间和剂量依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡。24,48和72h抑制细胞活力的IC50浓度分别为26.3,7.8和2.0nmol/L。对照组HL-60细胞有pIKK表达,蟾蜍灵可诱导IKK的快速活化。NF-κB通路的特异性抑制剂Bay11-7082增强蟾蜍灵的凋亡诱导作用。结论:蟾蜍灵可诱导HL-60细胞凋亡,促进IKK活化与NF-κB通路调节相关,而且与NF-κB通路抑制剂有协同作用。