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山羊APOA 4基因抑制肌内脂肪细胞分化
1
作者
曲比伍且
李艳艳
+5 位作者
李鑫
王永
王友利
刘伟
朱江江
林亚秋
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期1927-1938,共12页
旨在明确山羊脂蛋白A-IV(apolipoprotein A-IV,APOA 4)对肌内脂肪细胞分化的调控作用。本试验所用动物为1周岁生理状态良好,舍饲的简州大耳羊公羊(n=5)。试验利用RT-PCR技术克隆山羊APOA 4基因序列,通过生物信息学分析方法对克隆得到的...
旨在明确山羊脂蛋白A-IV(apolipoprotein A-IV,APOA 4)对肌内脂肪细胞分化的调控作用。本试验所用动物为1周岁生理状态良好,舍饲的简州大耳羊公羊(n=5)。试验利用RT-PCR技术克隆山羊APOA 4基因序列,通过生物信息学分析方法对克隆得到的序列进行分析,并获得序列特征;利用qPCR技术构建山羊APOA 4的组织与细胞时序表达谱;通过构建山羊APOA 4基因过表达载体,本试验分为过表达组(pEGFP-N1-APOA 4)与阴性对照组(pEGFP-N1),每组设置3个重复,每个重复的样本量为2个。转染pEGFP-N1-APOA 4过表达载体和pEGFP-N1至山羊肌内前体脂肪细胞并诱导分化,通过油红O染色、Bodipy染色、DAPI染色、吸光度(OD490 nm)测定及qPCR等方法确定过表达山羊APOA 4基因对肌内脂肪细胞分化及脂肪形成标志物的影响。结果表明:1)试验克隆得到山羊APOA 4基因序列1467 bp,其中CDS区1143 bp,编码380个AA;2)生物信息学分析推测得到山羊APOA4为带负电且属于酸性不稳定疏水蛋白;3)山羊APOA 4在山羊各组织广泛表达,在肝中表达量最高,极显著高于其他组织(P<0.01)。APOA 4在诱导分化48 h的肌内脂肪细胞中表达最高;4)过表达山羊APOA 4基因后与对照组相比较,发现肌内脂肪细胞脂滴积聚减少,脂肪分化标志基因C/EBPα、PPARγ表达极显著下调(P<0.01),SREBP1、C/EBPβ表达水平显著下调(P<0.05)。脂代谢标志基因AP2、LPL显著下调(P<0.05)。综合形态学染色和分子生物学结果,山羊APOA 4基因可能通过抑制分化标志基因C/EBPα、PPARγ、SREBP1、C/EBPβ以及脂代谢标志基因AP2、LPL的表达,进而抑制肌内脂肪细胞的分化和脂滴积聚,提示过表达山羊APOA 4基因抑制肌内脂肪细胞分化。
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关键词
山羊
APOA
4
肌内脂肪细胞
过表达
细胞分化
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题名
山羊APOA 4基因抑制肌内脂肪细胞分化
1
作者
曲比伍且
李艳艳
李鑫
王永
王友利
刘伟
朱江江
林亚秋
机构
西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部/四川省重点实验室
西南民族大学畜牧兽医学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期1927-1938,共12页
基金
国家自然科学基金(32072723,31902154)
四川省应用基础研究计划重点项目(2022JDTD0030)
西南民族大学研究生创新型科研项目(ZD2022683)。
文摘
旨在明确山羊脂蛋白A-IV(apolipoprotein A-IV,APOA 4)对肌内脂肪细胞分化的调控作用。本试验所用动物为1周岁生理状态良好,舍饲的简州大耳羊公羊(n=5)。试验利用RT-PCR技术克隆山羊APOA 4基因序列,通过生物信息学分析方法对克隆得到的序列进行分析,并获得序列特征;利用qPCR技术构建山羊APOA 4的组织与细胞时序表达谱;通过构建山羊APOA 4基因过表达载体,本试验分为过表达组(pEGFP-N1-APOA 4)与阴性对照组(pEGFP-N1),每组设置3个重复,每个重复的样本量为2个。转染pEGFP-N1-APOA 4过表达载体和pEGFP-N1至山羊肌内前体脂肪细胞并诱导分化,通过油红O染色、Bodipy染色、DAPI染色、吸光度(OD490 nm)测定及qPCR等方法确定过表达山羊APOA 4基因对肌内脂肪细胞分化及脂肪形成标志物的影响。结果表明:1)试验克隆得到山羊APOA 4基因序列1467 bp,其中CDS区1143 bp,编码380个AA;2)生物信息学分析推测得到山羊APOA4为带负电且属于酸性不稳定疏水蛋白;3)山羊APOA 4在山羊各组织广泛表达,在肝中表达量最高,极显著高于其他组织(P<0.01)。APOA 4在诱导分化48 h的肌内脂肪细胞中表达最高;4)过表达山羊APOA 4基因后与对照组相比较,发现肌内脂肪细胞脂滴积聚减少,脂肪分化标志基因C/EBPα、PPARγ表达极显著下调(P<0.01),SREBP1、C/EBPβ表达水平显著下调(P<0.05)。脂代谢标志基因AP2、LPL显著下调(P<0.05)。综合形态学染色和分子生物学结果,山羊APOA 4基因可能通过抑制分化标志基因C/EBPα、PPARγ、SREBP1、C/EBPβ以及脂代谢标志基因AP2、LPL的表达,进而抑制肌内脂肪细胞的分化和脂滴积聚,提示过表达山羊APOA 4基因抑制肌内脂肪细胞分化。
关键词
山羊
APOA
4
肌内脂肪细胞
过表达
细胞分化
Keywords
goat
APOA 4
intramuscular adipocytes
overexpression
cell differentiation
分类号
S827.2 [农业科学—畜牧学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
山羊APOA 4基因抑制肌内脂肪细胞分化
曲比伍且
李艳艳
李鑫
王永
王友利
刘伟
朱江江
林亚秋
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
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