山黧豆种子萌发特异性蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

蛋白酶在种子萌发过程中参与了储藏蛋白水解等多种生理过程,为植物的生长发育提供氮源并在种子萌发的生化机制中有重要作用。本研究采用明胶酶谱法检测了山黧豆种子在不同萌发时间的蛋白酶表达情况。利用盐析、离子交换层析等方法从萌发6d的山黧豆种子中分离纯化了蛋白酶并对其基本酶学性质进行了研究。结果表明,山黧豆种子萌发特异性蛋白酶造成了种子萌发过程中高分子质量蛋白质的水解和较低分子质量蛋白质的积累。对纯化蛋白酶进行总蛋白含量、酶活力、酶比活力等检测表明,山黧豆蛋白酶的纯化倍数为6.58,蛋白得率为7.97%。山黧豆蛋白酶对金属离子的耐受性较高,添加Fe3+可以引起蛋白酶活性的显著增加。此外,该蛋白酶对血红蛋白和明胶的反应活性最高,其最适反应pH和温度分别为pH7和60℃。本研究为进一步研究山黧豆种子萌发过程中蛋白质水解与其内源毒素β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸积累的相互关系奠定了基础。

山黧豆CASase基因DNA全长序列的扩增及CRISPR/Cas9敲除载体的构建

【目的】克隆山黧豆β-腈基丙氨酸合成酶基因(CASase)DNA全长序列,构建CRISPR/Cas9敲除载体,为筛选"低毒、高硫"山黧豆品系奠定基础。【方法】以萌发4d山黧豆幼苗根部为材料,提取其基因组DNA,利用PCR克隆CASase基因全长;经序列同源性、内含子、外显子、sgRNA靶位点和脱靶分析后,在CASasecDNA上选取5个sgRNA靶位点进行寡核苷酸链设计和体外活性检测;从5个sgRNA靶位点中取活性较高的4个sgRNA,利用酶切连接法构建基因敲除载体pPLHACas9-sgRNA20r、pPLHACas9-sgRNA68r、pPLHACas9-sgRNA225f和pPLHACas9-sgRNA256f。【结果】获得了CASase基因3 143bp的DNA全长序列,该序列编码β-腈基丙氨酸合成酶;在CASase cDNA中选取5个sgRNA靶位点在体外均能有效剪切靶序列;菌落PCR检测结果显示,4个CRISPR/Cas9基因敲除载体构建成功。【结论】克隆了山黧豆CASase基因DNA全长,成功构建了该基因上4个sgRNA靶位点的CRISPR/Cas9敲除载体。

大岩桐SsKN1基因的克隆及组织表达分析

以大岩桐(Sinningia specisoa)茎尖组织为试材,采用RT-PCR方法对大岩桐SsKN1(KNOTTED1-like homeobox)基因进行克隆,经BLAST比对、邻接法构建进化树,研究了SsKN1基因与其它KNOXI基因的亲缘关系;并利用半定量RT-PCR,研究了SsKN1基因在大岩桐根、花瓣、花萼、叶、茎和茎尖等不同组织中的表达情况,以期为SsKN1基因的功能研究奠定基础。结果表明:获得了大岩桐SsKN1基因451bp的cDNA序列,该基因与烟草NTH15基因亲缘关系最近,其次为拟南芥STM基因;SsKN1基因在根、叶、茎尖和花萼等4种组织中表达,在花瓣和茎中不表达。其中在茎尖的表达量最高,叶中的表达量次之,根和花萼的表达量较低。

如何有效提高基层财政所会计精细化管理水平

众所周知,乡村财政是我国财政体系的基层单位,他不仅负责调整着财政资金的收入,而且还是调节居民和政府关系的重要组织形式,此外,它是提升基层政权建设有效性的重要组织。就目前而言,我国乡镇建设在社会主义市场经济发展过程中具有独特性的地位,而其中的基层财政所对于社会主义市场经济的发展起到“经济指挥棒”的作用。在本文的论述中,笔者注重从基层财政所精细化管理存在的问题以及基于问题认知的基础上探究相应的管理策略两方面入手,实现基层财政所管理水平的精细化,促进乡镇经济的高效发展。

完善乡镇财政体制改革的建议

为了充分调动乡镇增收节．虹发展经济的积极性，山东省烟台市莱山区按照“统一领导、分级管理”，“事权与财力相匹配”和“责、权、利”相结合的原则，从2002年起，实行了区与乡镇分税的财政管理体制，对乡镇实行“划分税种、核定收支、定交定补、逐年递增或递减、超收按比例分成、短收自补、自求平衡”的财政管理办法。一是确定乡镇事权范围。将乡镇党政机关及机构改革后的各个站、所（除教育、卫生、公安、土管外）划为乡镇事权范围，按事权确定支出范围。二是划分收入范围。按分税制的要求，将收入划分为区级固定收入、乡镇固定收入以及区与乡镇两级共享收入。三是确定乡镇收支基数，按事权范围及保工资、保运转的原则确定乡镇收支基数，对收大于支的乡镇实行定额上交，超收按比例分成；

有效预防长期卧床下肢深静脉血栓形成的心理辅导及护理干预措施探讨

探讨长期卧床下肢静脉血栓形成的预防性护理措施以及心理辅导的效果观察。方法:抽取我院收治的长期卧床患者20例,根据护理方案分为两组。结果:观察组经不同的护理后各项评分明显地优于对照组(P<0.05)。结论:对于长期卧床的患者实施预防性护理干预以及心理辅导,能够明显地降低下肢静脉血栓的发生率。

在腹腔镜结直肠癌根治术患者中应用集束化护理的护理满意度观察

探究集束化护理方式应用于腹腔镜结直肠癌根治术病患中的护理效果。方法 均采用计算机随机分组,本次研究实施时间自2019年1月开始,截至2022年1月,对本医院100例腹腔镜结直肠癌根治术患者进行平分,所纳入的患者均被平均分组,分为2组。对照组50例采用常规护理,剩余50例作为观察组采取社区护理联合中医情志管理。对两组护理总有效率、术后恢复情况、发生并发症的情况以及护理满意度进行观察对比。结果 通过对比两组病患护理总有效率,与对照组相比,观察组明显效果更佳(P<0.05);对比两组病患术后恢复情况,观察组显著比对照组优(P<0.05);相比对照组,观察组病患术后并发症的发生情况明显更低(P<0.05);与对照组相比,观察组病患护理满意度明显更高(P<0.05)。结论 将集束化护理模式应用与腹腔镜结直肠癌根治术病患中,可以使护理总有效率得到显著提升,促使病患快速康复,并发症的发生情况明显较低,安全性较高,提高病患满意度,临床应用价值较高。