神经细胞凋亡的基因调控

神经细胞凋亡的基因调控曲立科裴瑾杨翰仪调亡是细胞死亡的一种形式，区别于坏死，在形态学上，凋亡的细胞质膜保持完整，细胞体积缩小，有质膜小泡形成，细胞器形态不变，胞核浓缩，细胞残体脱落，没有溶酶体内容物的漏出，不引发炎症反应；在生化的水平上，凋亡的细胞多...

慢性乙肝病毒感染与抗磷脂抗体的关系

探讨慢性乙肝病毒 (HBV)感染与抗磷脂抗体 (APA)水平的相关性 ;采用ELISA方法 ,检测慢性乙型肝炎及乙肝后肝硬化患者血清中APA的水平 ;与对照组相比 ,患者血清中APA均有显著升高 (P <0 0 5 ) ,且两组患者间亦有显著差异 (P <0 0 5 ) ;

胃癌细胞MGC-803耐药细胞株的建立及分泌蛋白差异分析

目的:应用蛋白质组学技术系统比较5-氟尿嘧啶、紫杉醇及顺铂耐药细胞与敏感细胞的分泌蛋白表达谱,以期发现胃癌耐药相关分泌蛋白标志物,为临床选择有针对性的化疗药物提供依据。方法:通过药物梯度诱导建立胃癌MGC-803耐药细胞株。从培养上清中收集MGC-803亲代及耐药细胞的分泌蛋白,应用双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)进行分离,通过PD Quest 7.1.0软件分析获得差异蛋白,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)进行鉴定,并用实时定量PCR检测各差异蛋白在耐药细胞株和亲本细胞间mRNA水平上的表达差异。结果:分别建立了对5-氟尿嘧啶、紫杉醇及顺铂耐药指数为110.6、70.0和13.3的耐药细胞株。顺铂耐药细胞对5-氟尿嘧啶和紫杉醇、5-氟尿嘧啶耐药细胞对紫杉醇均有较强的交叉耐药,前者耐药指数分别为23.5和114.0,后者为70.0。制备获得了耐药细胞培养上清的双向凝胶电泳蛋白组分图谱;经PD Quest软件分析获得18个差异在2倍以上、3株耐药细胞培养上清中丰度均增高的蛋白点,其中13个得到了质谱鉴定,它们分别属于蛋白酶类、信号转导分子等。与亲本细胞相比,在mRNA水平上,SLMAP、TOP3A、DYNC1H1、RHPN1、PUF60和SIAH1在3种耐药细胞中皆有明显上调;IFT172、FILIP在耐5-氟尿嘧啶和紫杉醇细胞中上调显著;PLVAP、LMNA在耐紫杉醇及顺铂细胞中表达有所升高,但在耐5-氟尿嘧啶细胞中升高不显著。在蛋白水平上的进一步验证发现,SIAH1在3种耐药细胞中的表达量及培养上清中的含量皆有升高。结论:本研究以胃癌细胞MGC-803为亲本细胞分别建立了针对5-氟尿嘧啶、紫杉醇及顺铂的耐药细胞株,在此基础上应用双向电泳及蛋白质谱技术,整体展示了耐药细胞与亲本细胞的差异分泌蛋白,并发现SIAH1蛋白在耐药细胞总蛋白及培养上清中的含量均明显升高,其有可能成为研发胃癌血清耐药标志物的候选分子。

抗心磷脂抗体检测及其影响因素的研究

目的 :研究血清样品稀释度、温度、离子强度以及样品检测间隔时间对血清抗心磷脂抗体 (ACA)检测结果的影响。方法 :采用酶联免疫吸附测定法 (ELISA)检测ACA。结果 :血清样品最佳稀释度为 1∶5 0 ;37℃时光吸收值比 2 2℃和 2 5℃的光吸收值显著下降 ;15mol LNaCl可明显抑制ACA与抗原结合 (P <0 0 1) ,抑制率平均为 45 4% ;包被 14d以上的检测结果明显高于 1d和 7d的测定结果 (P <0 0 5 )。结论 :血清ACA检测结果受血清样品稀释度、温度、离子强度及包被时间影响。

呋喃唑酮抑制Wistar大鼠精子细胞生成的研究

目的 探讨呋喃唑酮 (NFZ)对成年雄性大鼠生精细胞的抑制作用及其副作用。方法 以Wistar大鼠为模型 ,灌胃法给药 ,采用组织切片及生物化学方法进行分析。结果 一定剂量的NFZ可以特异性抑制成年大鼠的精子细胞生成 ,而对睾丸的基本结构无损害 ,对其它脏器无伤害。此种抑制生精作用为可逆性 ,停药后较短时间即可恢复正常生育 ,子代发育正常。结论 呋喃唑酮有可能作为男性避孕药。

大鼠β_2-糖蛋白Ⅰ的氧化修饰

目的 :探讨 β2 -糖蛋白 ( β2 - GP )在体外的氧化修饰 ,为其在体内诱导抗磷脂抗体产生研究作准备。方法 :首先纯化并鉴定大鼠 β2 - GP ,然后在体外以次黄嘌呤 /黄嘌呤氧化酶氧化系统氧化大鼠β2 - GP 。结果 :大鼠的 β2 - GP 在体外被氧化产生羰基 ,氧化后的羰基含量与氧化前的比较有显著差异( P<0 .0 5)。结论 :在体外 β2 - GP 可以被次黄嘌呤 /黄嘌呤氧化酶氧化系统氧化产生羰基。

呋喃唑酮促睾丸细胞凋亡作用

目的探讨呋喃唑酮(NFZ)诱导大鼠睾丸细胞凋亡的作用,为指导临床药物及禽畜药物的使用提供一定的理论依据。方法采用免疫组化、细胞培养、亚细胞器分离、无细胞体系及免疫沉淀技术,观察睾丸细胞在NFZ作用下形态变化;检查睾丸细胞及其无细胞系统在NFZ作用后的DNA梯状电泳图谱以及与凋亡相关的Bcl-2、caspase-3等因子表达。结果睾丸细胞在NFZ作用下,形态变化具有明显的凋亡特征。DNA电泳出现梯状电泳带,即DNA片段化。分析与凋亡相关的因子表达,均符合细胞程序死亡的规律。结论呋喃唑酮可促进精子细胞凋亡。

分子佐剂TBhsp和MT在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体制备中的作用

目的探讨结核分枝杆菌热休克蛋白(TBhsp)和结核分枝杆菌T细胞刺激表位(MT)在肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)单克隆抗体(mAb)制备过程中的佐剂作用。方法构建对照质粒pET28a-PRL-3和佐剂-PRL-3融合蛋白表达质粒pET28a-PRL-3-MT、pET28a-TBhsp-PRL-3和pET28a-TBhsp-PRL-3-MT,并纯化其表达蛋白,分别免疫BALB/c小鼠,ELISA检测并比较各组的抗血清效价,选取效价最高的小鼠,采用杂交瘤技术制备PRL-3 mAb,并进行类和亚类鉴定。结果成功构建了上述4种PRL-3相关的重组表达质粒,并表达纯化出相应的融合蛋白,其中PRL-3-MT融合蛋白免疫组抗体效价高于其他组;用该组小鼠进行细胞融合并筛选获得均为IgG类的10株分泌PRL-3 mAb的细胞株。结论 MT在PRL-3 mAb制备中可以发挥较为明显的免疫佐剂作用。

应用异型双功能试剂连接制备乳胶妊娠诊断制剂

目的研制稳定性特异性更好的妊娠诊断制剂。方法应用抗ＨＣＧ－β亚基Ｃ末端多肽抗体，以双 功能试剂连接到羧化苯乙烯乳胶上。结果制成的妊娠诊断试剂较目前通用的ＨＣＧ乳胶试剂灵敏度高，为１．５ＩＵ／ ｍｌ。稳定性好，在室温放置３个月，其灵敏度未下降。用本试剂检测１６０份妊娠尿和１５０份正常尿，结果准确率为 ９５％。结论本试剂所用方法优于通常应用的妊娠诊断方法。

酪氨酸磷酸酶PRL-3增加人胃癌细胞BGC823的SP细胞比例并提高其对化疗药物的耐受性

蛋白酪氨酸磷酸酶PRL-3是近年发现的蛋白酪氨酸磷酸酶家族成员,能促进肿瘤细胞的侵袭、转移及上皮细胞间质转型,提示PRL-3可能在肿瘤发生发展及诱导肿瘤干细胞生成中发挥重要作用.由于侧群(SP)细胞具有许多干细胞的性质,SP细胞分选是目前筛选和分离获得干细胞或前体细胞常用的有效方法.为探讨PRL-3在诱导干细胞生成中的潜在作用,本文在建立过表达PRL-3的人胃癌细胞BGC823的基础上,通过SP分选和CCK-8的方法分析PRL-3对BGC823细胞中SP细胞的比例以及对化疗药物耐受性的影响.结果提示,高表达PRL-3提高BGC823中SP细胞的比例(2.5%vs 9.4%),同时增加BGC823对化疗药物紫杉醇和顺铂的耐受性(相对于对照细胞,其耐药指数分别为1.75和1.29).由于SP细胞的产生和细胞耐药性的提高与ABC家族基因表达水平上调密切相关,通过定量RT-PCR和Western印迹检测发现,PRL-3能上调ABCB1和ABCG2的表达.上述研究结果表明,PRL-3有可能通过上调ABCB1和ABCG2的表达,增加胃癌细胞BGC823的SP细胞比例并增加其对化疗药物的耐受性.

PRL-3基因C104S位点突变体和CAAX缺失体的构建及表达

目的:分别构建肝再生磷酸酶-3(phosphatase of regenerating liver 3,PRL-3)基因C104S位点突变和C端CAAX缺失的myc标签和GFP荧光标签重组质粒pcDNA3-myc-PRL-3(C104S)、pEGFP-PRL-3(C104S)、pcDNA3-myc-PRL-3(△CAAX)和pEGFP-PRL-3(△CAAX),并进行真核表达,为PRL-3的后续功能研究提供有效的工具。方法:设计PRL-3基因C104S点突变、C端CAAX缺失的特异性引物,以pcDNA3-myc-PRL-3质粒为模板,通过基因克隆、一步法点突变的方法构建各重组质粒,通过酶切和测序鉴定后转染真核细胞,检测其在细胞中的表达并观察定位情况。结果:成功构建了4种重组质粒,并能在结肠癌细胞LoVo中表达。用激光共聚焦扫描显微镜对细胞中绿色荧光融合蛋白的定位观察发现,当PRL-3的CAAX位点缺失后,PRL-3由内膜系统大量入核,与理论预期相符。结论:获得了PRL-3基因C104S位点突变体和CAAX缺失体重组真核表达质粒并能在细胞中表达,为进一步研究PRL-3的功能提供了条件。

一种SOD定量测定方法的建立

目的：建立ＳＯＤ定量测定方法。方法：从牛血中提取纯化ＳＯＤ，用纯化ＳＯＤ免疫家兔制备高效价的抗体。用１２５Ⅰ标记ＳＯＤ，建立测定ＳＯＤ的放射免疫分析法。结果：纯化得到电泳纯的ＳＯＤ，免疫后抗血清效价为１∶３２。结论：建立了可直接测定ＳＯＤ含量的ＲＩＡ法。

62例冠心病病人抗心磷脂抗体的研究

目的 :为了研究冠心病的病因、发病机理 ,提供临床诊断依据。方法 :采用酶联免疫吸附法( ELISA) ,对临床上 62例冠心病病人及 40例正常人进行了抗心磷脂抗体 ( ACA)的 Ig G、Ig M和Ig A的血清学检测。结果 :冠心病病人组的血清 Ig G- ACA和 Ig M- ACA显著高于正常对照组的Ig G- ACA和 Ig M- ACA水平。结论

33例不育症病人抗心磷脂抗体的研究

目的 :为了研究不育症的病因、发病机理 ,提供临床诊断依据。方法 :利用酶联免疫吸附(ELISA)法 ,对 33例不育症病人进行了抗心磷脂抗体 (ACA)的 Ig G、Ig M的血清学检测。结果 :不育症病人组的血清 Ig G- ACA和 Ig M- ACA显著高于正常对照组的 Ig G- ACA和 Ig M- ACA水平。结论

β_2糖蛋白I与重组乙型肝炎表面抗原的结合特性

目的 研究 ＨＢｓＡｇ与β２糖蛋白Ｉ（β２ＧＰ Ｉ）的结合特性，探讨 β２ＧＰ Ｉ参与 ＨＢＶ感染的机制。方法 采用酶联免疫吸附实验，研究标记的人β２ＧＰ Ｉ与重组ＨＢｓＡｇ的结合特性。结果 标记的人β２ＧＰ Ｉ与ＨＢｓＡｇ有高度亲和力，并可以被过量的未标记人β２ＧＰ Ｉ所抑制。结论 β２ＧＰ Ｉ与ＨＢｓＡｇ的结合特性可能是β２ＧＰ Ｉ介导乙肝病毒感染肝细胞的结构基础。

抗β_2糖蛋白Ⅰ抗体与乙型肝炎后肝硬化细胞外基质的相关性研究

目的 研究乙型肝炎后肝硬化患者血清中抗 β2 糖蛋白I抗体 (aβ2 GPⅠ )与肝细胞外基质的相关性。方法 选择明确诊断的慢性乙型肝炎 (CHB)和乙型肝炎后肝硬化 (PHBC)患者为研究对象 ,以纯化的人血清β2 GPⅠ为抗原 ,用酶联免疫方法检测这些患者血清中的aβ2 GPⅠ水平 ,并且同时检测这些患者血清中的Ⅳ型胶原(Ⅳ -C)、透明质酸 (HA)和层粘连蛋白 (LN)。结果 发现PHBC患者血清中aβ2 GPⅠ水平与对照组比较有明显升高 (P <0 0 1) ,并发现PHBC患者血清中aβ2 GPⅠ高于CHB组 (P <0 0 5 )。同时发现PHBC患者血清中aβ2 GPⅠ的升高程度与肝功能分级无关 ,而与肝细胞外基质HA、Ⅳ -C、LN的血清水平呈明显正相关。结论 PHBC患者血清中aβ2 GPⅠ水平的升高 ,不仅与肝细胞受损有关 。

慢性肝病与β_2糖蛋白Ⅰ抗体及其他自身抗体的关系

目的 研究 β2 糖蛋白Ⅰ (β2 GPⅠ )抗体及抗双链DNA抗体 (ds DNA)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗核糖核蛋白抗体 (RNPA)与慢性肝病的相关性。方法 选择明确诊断的慢性乙型肝炎和乙型肝炎后肝硬化患者为研究对象 ,采用ELISA法 ,以纯化的人 β2 GPⅠ为抗原 ,检测这些患者血清中β2 GPⅠ抗体水平 ,同时检测ds DNA、SMA、RNPA的血清水平。结果 乙型肝炎后肝硬化患者血清中β2 GPⅠ抗体水平与对照组相比明显升高 (P <0 .0 1) ,患者血清中 β2 GPⅠ抗体高于慢性乙型肝炎组 (P <0 .0 5 ) ;并且发现慢性乙型肝病患者 β2 GPⅠ抗体的阳性率高于其他自身抗体。结论 乙型肝炎病毒(HBV)感染与 β2 GPⅠ抗体的产生可能相关 ,推测 β2 GPⅠ参与HBV感染的病理过程。

沉默PES1基因表达对结肠癌细胞恶性表型的抑制作用

目的 :探讨核仁蛋白PES1(pescadillo homolog 1)对结肠癌细胞恶性表型的影响。方法 :构建针对PES1基因的sh RNA干扰质粒,将其转染结肠癌HCT116细胞,经G418筛选耐药细胞克隆,蛋白质印迹法验证靶基因的沉默效果。采用MTT法、平板克隆形成实验、裸鼠成瘤实验、Transwell迁移及侵袭实验和FCM法分别检测沉默PES1表达对HCT116细胞增殖、克隆形成、体内成瘤、体外迁移和侵袭以及凋亡的影响,并采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞增殖和凋亡相关蛋白的表达水平。结果 :成功获得PES1稳定低表达的结肠癌HCT116细胞。沉默PES1表达后,HCT116细胞的增殖、克隆形成和裸鼠体内成瘤能力均明显降低(P值均<0.01),细胞迁移和侵袭能力明显减弱(P值均<0.01),细胞凋亡水平明显提高(P<0.05)。PES1表达被抑制后,HCT116细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P值均<0.01),而Bcl-2相互作用杀伤蛋白(Bcl-2 interacting killer,BIK)、prune同源蛋白2(prune homolog 2,PRUNE2)和基质金属蛋白酶组织抑制因子3(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase 3,TIMP3)的m RNA表达水平明显升高(P值均<0.01)。结论 :PES1可能对结肠癌细胞的多种恶性表型起促进作用。