食品沙门氏菌检测中PCR技术的应用分析

目的研究使用聚合酶链式反应(PCR)技术检测食品沙门氏菌的应用价值。方法于2020年1月~12月对210名进行预防性体检人员使用PCR检测与常规检测,对两种检测结果进行分析,并与"金标准"进行对比。结果210名进行预防性体检人员中食品沙门氏菌检出率为30.95%;PCR检测灵敏度、特异度、符合率均高于常规检测(P<0.05)。结论使用PCR检测食品沙门氏菌具有一定的临床应用价值,可显著提升检测灵敏度、特异度、符合率。

应用TaqMan荧光定量PCR检测土拉弗朗西斯菌

目的:利用Roche LightCycler实时定量PCR系统建立一种快速、灵敏、特异的检测土拉弗朗西斯菌的方法。方法:基于TaqMan荧光探针实时定量PCR技术,选择土拉弗朗西斯菌染色体上的特异序列[醇醛酮还原酶(AKR)和外膜蛋白FopA基因]作为检测靶序列,建立土拉弗朗西斯菌实时定量PCR检测方法;评价该检测方法的特异性和灵敏性;采用克隆菌株污染环境土壤来模拟实际样品,评价该检测方法在快速检测与现场检测等实际应用中的表现。结果:优化筛选基因组中的FT-AKR和FT-fopA片段作为检测靶序列,所建立的土拉弗朗西斯菌实时定量PCR检测方法检测克隆菌株质粒的灵敏度均为10个拷贝/每个反应体系;以其他非土拉弗朗西斯菌为模板未出现非特异扩增;模拟环境土壤样品检测灵敏度2个引物对分别为440和960CFU/g土壤;盲测实验结果显示对于灵敏度范围内的阳性样本均能正确识别,并能正确检测出不同浓度的阳性样本。以FT-fopA片段为靶序列的扩增效率不及基于FT-AKR引物对的扩增。结论:基于FT-AKR片段的引物对扩增效率高,检测土拉弗朗西斯菌具有特异、灵敏的特点,对临床诊断、环境污染监测、防治生物突发事件等具有重要意义。

儿童细菌性腹泻的病原微生物检验

目的探讨儿童细菌性腹泻行病原微生物检验的意义。方法从2018年10月—2019年10月我市医院收治的细菌性腹泻的患儿中随机选取100例,收集其粪便标本,进行病原微生物检验,给予药敏测试,分析患儿病原微生物的感染类型及耐药性。结果100例患儿共检出菌株87株,占比依次为志贺菌、弧菌属、气单胞菌、大肠埃希菌、其他病原菌菌属。志贺菌对头孢哌酮的耐药率最高,为72.50%;大肠埃希菌、弧菌属、气单胞菌均对氨苄西林的耐药率最高,分别为65.00%,75.00%,60.00%;其他病原菌菌属对阿莫西林的耐药率最高,为60.00%。结论引起儿童出现细菌性腹泻的病原微生物主要包括志贺菌、弧菌属、气单胞菌、大肠埃希菌,耐药性均较高,临床上要针对患儿实际情况选择有效的药物,以提高治疗效果。

200例细菌性腹泻病原学检测研究

目的针对细菌性腹泻病人进行病原学检测的价值。方法于2017年02月~2019年02月采集200例肠道门诊收治的细菌性腹泻患者粪便标本实施病原学检测,对其病原学特点(包括检出致病菌分布情况、季节分布情况及患者年龄、性别分布情况)进行分析。结果200例患者中引发细菌性腹泻主要致病菌为副溶血弧菌、沙门菌及致泻大肠埃希氏菌;病原菌检出较多情况处于夏季,夏季属于细菌性腹泻发生高峰期;致病菌检出率10岁以下组高于超过10岁组(P<0.05)。结论在细菌性腹泻患者用药之前开展粪便标本细菌培养,能够对其病原学特点进行明确,同时在临床治疗方案选择中发挥重要作用。

定量PCR快速检测炭疽芽孢杆菌的实验研究

目的建立一种简便、快速、定量检测炭疽芽孢杆菌的PCR方法。方法采用TaqMan荧光探针技术,针对炭疽芽孢杆菌质粒pXO1、pXO2上的基因设计引物;用炭疽芽孢杆菌(Sterne株)污染环境土壤来模拟实际样本,比较了从土壤中提取DNA的不同方法对检测效果的影响,并与同类进口试剂进行了平行比对。结果以含有检测目的片段的线性质粒为模板,反应体系的灵敏度可达到101拷贝/μl;用Sterne株芽孢悬液污染土壤,检测灵敏度可达2.5×103cfu/g土壤。我们研制的试剂与进口试剂在敏感性和准确性方面一致,且操作简便。结论本研究建立的炭疽芽孢杆菌实时定量PCR检测方法可特异、灵敏地检测土壤标本中可疑目标菌。

2015—2016年营口市手足口病病原学检测结果分析

目的通过对营口市内定点监测医院2015—2016年送检1 096例样本实验室检测结果分析,了解营口市手足口病的病原构成,变迁和毒力变化,提高早期病原学检测能力,预防和控制手足口病的爆发和流行。方法收集2015—2016年间监测医院上报的《中国疾病监测信息报告管理系统》病例信息,对其急性期采集的咽拭子及粪便标本采用实时荧光PCR方法进行病原核酸检测。采用描述流行病学及相关统计学方法对结果进行分析,计数资料采用χ~2检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果 2015—2016共采集1 096例咽拭子和粪便标本,检出核酸阳性843例,阳性率76.91%,其中人类肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)28份,占比3.32%,柯萨奇病毒16型(Coxsackie virus type 16,CoxA16)378份,占比44.84%,EV未分型437份,占比51.84%。2015年手足口病优势病原类型为CoxA6型,占2015年总阳性率的66.76%。2016年以CoxA16型为主,占当年总阳性率的78.37%。结论 2015—2016年营口市手足口病呈现不同程度流行,有明显的季节性,2015年营口市内手足口病优势病原为肠道病毒CoxA6型,2016年为CoxA16型。不同年份病原交替,是我市手足口病病原流行特征。

从业人员戊肝抗体IgG动态检测应用分析

目的了解掌握戊肝在从业人员中流行情况,分析评价HEVIgG动态检测在从业人员戊肝检测中的应用价值及可行性,为进一步提高检测能力提供参考。方法 2012-2014年间来营口市疾病预防控制中心办理健康证从业人员,动态检测HEVIgG滴度同时检测HEV IgM,对检测结果进行分析。结果 47 852名从业人员中检出HEVIgG阳性2 555例,2 519名HEVIgG阳性复检者中,20人HEV IgM阳性,4人HEV IgM阴性但HEVIgG滴度增高4倍以上。结论动态检测HEVIgG滴度一定程度可提高检测灵敏度和特异性。

2016-2018年营口地区手足口病监测结果分析

目的手足口病是一种由多种肠道病毒引起的儿童传染病,传染性强,传播途径复杂,在短时间可以造成较大规模的暴发和流行。本研究分析营口地区手足口病流行病学及病原学检测结果,为手足口病预防工作提供依据。方法采集2016-06-01-2018-10-31营口地区哨点医院和疾控中心手足口病例样本,应用实时荧光定量Real-Time PCR方法检测手足口临床诊断病例的咽拭子和粪便标本中肠道通用病毒EV、肠道病毒EV71型以及柯萨奇CA16病毒,部分肠道通用病毒检测CA16型病毒。分析手足口病性别、时间和年龄分布;比较不同样本中手足口病病原阳性检出率。结果2016-2018年共检测1231份病例,病原阳性率为73.0%(899/1231),CA16阳性率为25.8%(318/1231),EV71阳性率为50.4%(620/1231),其他肠道病毒阳性率为22.0%(271/1231)。在核酸阳性样本中,男女比例为1.4∶1,差异无统计学意义,χ2=3.33,P=0.068。手足口病高发月份集中在6~8月份,病例数为1172例,占总病例数的95.2%(1172/1231)。主要发病人群集中在3~5岁,2017年<5岁人群阳性病例为110例,占当年核酸阳性比例的34.4%(110/320)。在EV71型肠道病毒中,粪便与咽拭子两组间比较,差异无统计学意义,χ2=2.028,P=0.154。而在CA16(χ2=88.807,P<0.001)与其他肠道病毒(χ2=15.463,P<0.001)阳性标本中,粪便与咽试样本之间相比,差异有统计学意义。结论2016-2018年营口地区手足口病分别以CA16、EV71及其他肠道病毒阳性为主,每年都以1个类型为主要发病病原体,没有相关性。学龄前儿童是易感人群,但EV71型或重症发病的年龄偏大,发病时间主要集中在6~8月份,同时,粪便样本的阳性率高于咽试样本。